《中药学院综合设计性实验方案》.docx

中药学院综合设计性实验方案学生学号、姓名：XXX XXX XXX XXX 年级、专业：XX级XX专业 实验课程名称： 不同促渗剂对氧化苦参碱乳膏透皮吸收的影响 实验分组号： 第X组 填写日期：2012年11月15日 实验名称不同促渗剂对氧化苦参碱乳膏透皮吸收的影响一、 项目背景（实验的目的、意义，以及欲解决的问题和国内外研究现状）透皮给药系统或称经皮给药系统 [1] （transdermal drug delivery systems, TDDS; transdermaltherapeutic systems, TTS）是指在皮肤表面给药，药物经恒定速度（或接近恒定速度）通过 皮肤各层，进入体循环，产生全身或局部治疗作用的新制剂 透皮给药制剂与常用的普通制剂相比，具有以下特点[2]: 1.避免了口服给药可能发生的肝首过效应及胃肠灭活， 提高了治疗效果；2.维持恒定的最佳血药浓度或生理效应，减少了胃肠给药的副作用； 3.延长有效作用时间，减少用药次数，药物可长时间持续进入血液循环； 4.可以通过改变给药面积调节给药剂量，减少个体差异和个体内差异，且患者可以自主用药，也可以随时停止用药透皮给药吸收还受到皮肤条件、 药物性质和剂型等因素的影响， 在实际应用中常遇到药物难以吸收或吸收缓慢的问题。

促透皮吸收技术尤其是透皮吸收促进剂 （促渗剂）的使用是改善上述问题的有效方法之一 [3]常用的促渗剂有表面活性剂、氮酮及其同系物、二甲基亚砚 及其类似物、角质保湿与软化剂、葩烯类等氧化苦参碱为具有 2个稠环哌嚏共用一个氮原子的喳喏里酸西嚏类的苦参型生物碱， 具有苦参次碱-15-酮基本结构的化合物（结构式见右图） ，广泛存在于双子叶豆科植物苦参（Sophora flavescens Ait.）和苦豆子（S.ALopecuroides L.）中现代研究发现[4-10],氧化苦 参碱具有良好的抗肿瘤、抗病毒、抗心律失常、抗炎、免疫抑制等药理作用，尤其在结合其他药物治疗病毒性肝炎中应用较多，因此具有重要应用和开发前景氧化苦参碱及其制剂的开发与是近年来药学领域的热门课题之一 目前临床上使用的氧化苦参碱制剂主要有苦参碱注射液、 片剂、胶囊剂等将氧化苦参碱开发成透皮给药制剂，可降低氧化苦参碱的毒副作用，获得更加持久的血药浓度，同时为婴幼儿用药提供方便本实验通过对氧化苦参碱乳膏进行体外透皮吸收实验， 并建立氧化苦参碱的高效液相色谱分析方法，考察不同促渗剂对氧化苦参碱乳膏的体外透皮吸收的影响， 从而筛选出最佳促渗剂，为氧化苦参碱透皮给药制剂的制备和开发提供实验参考。

二、 实施方案（包括实验的原理或技术路线、实验器材与药品、具体操作过程、每个成员的 具体分工、实验的进程安排等）1. 实验的技术路线!KiIL2. [翅化昔容碱 〜rIKFWir \ -曲钱建制2. 实验器材与药品（器材名称、规格和数量；药品或试剂的名称、规格和使用量） 2.1.实验器材：垂直式双室扩散池，HPLC仪，分析夭平，恒温透皮扩散仪，离心机，超声仪，涡旋仪2.2. 药品与试剂：氧化苦参碱，氮酮，丙二醇，薄荷油，生理盐水，硬脂酸，硬脂酸甘油酯，白凡士林，液体石蜡，羊毛脂，三乙醇胺，羟苯乙酯，无水乙醇，三乙胺，色谱甲醇，蒸储水等3. 具体操作步骤3.1. 孚L膏剂的制备3.1.1. 处方[11]:氧化苦参碱25mg 液体石蜡0.6g硬脂酸1.2g 羊毛脂0.5g硬脂酸甘油酯 0.35g 三乙醇胺 0.04 g白凡士林0.1g 羟苯乙酯0.01g蒸储水 加至10g3.1.2. 制法将硬脂酸、硬脂酸甘油酯、白凡士林、液体石蜡、羊毛脂作为油相，在 75- 78 C水浴加热熔 融成液体，将氧化苦参碱溶于适量酸化蒸储水中，加入三乙醇胺、羟苯乙酯，在 75~78 C水浴上加热使溶解，在不断搅拌下，将水相缓缓加入到油相中，并保温搅拌 10 min,离开水浴，继续搅拌至完全乳化。

其中促渗剂氮酮、薄荷油加入油相，丙二醇加入水相，依法制得 含不同量或不同种类的氧化苦参碱乳膏 同法制备得不含促渗剂的氧化苦参碱乳膏和不含氧化苦参碱的阴性对照乳膏3.2. 实验方法3.2.1.动物皮肤处理取大鼠200g,雌雄不限，腹部用 8%Na2S脱毛后脱颈椎处死，立即剪取下腹部皮肤，将皮 肤平辅于干净的玻璃板上，角质层向下，且玻片剥离皮下脂肪层和结缔组织， 用生理盐水洗净，低温保存备用实验前自然解冻，并用生理盐水浸泡 0.5h3.2.2. 体外透皮吸收实验渗透扩散装置为垂直式双室扩散池 取出备用小鼠皮肤自然解冻， 取氧化苦参碱乳膏1g （相对含有氧化苦参碱 2.5mg）,均匀涂于小鼠皮的角质层扩散面，固定于垂直双室扩散池给药 室和接收室之间，角质层向上，扩散面积约为 4.1cm2,接收液为70%生理盐水乙醇溶液，体积7mL,水浴恒温 32 0.5C，磁力搅拌，转速 200r/min.分别于1、2、3、4、5、6、 8h取出接收液1mL,并立即补加等量的 70%生理盐水乙醇溶液3.3. HPLC法测定氧化苦参碱的含量 [12-17] 3.3.1.色谱条件色谱柱：迪马 C18 （250X 4.6mm , 5um），流动相：甲醇-水（45:55:）（每300mL流动相加 50uL三乙胺），检测波长：215nm,流速：1.0mL/min，柱温：室温，进样量： 20uL。

3.3.2. 测定波长的选择将氧化苦参碱对照品溶液在 200~400波长范围内进行光谱扫描， 选择最大吸收波长为 HPLC检测波长3.3.3. 苦参碱对照溶液的制备精密称取氧化苦参碱 10.00mg,置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密 吸取5mL于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得氧化苦参碱对照品溶液（0.5mg/mL ）3.3.4. 阴性对照溶液与供试品溶液的制备定时吸取氧化苦参碱乳膏透皮接收液 1mL,过0.45um微孔滤膜，续滤液置于1.5mL离心管内，即得供试品溶液取氧化苦参碱空白乳膏 1g,加70%生理盐水乙醇溶液 7mL ,涡旋混匀5min ,滤纸滤过，吸取滤液1mL,过0.45um微孔滤膜，续滤液置于 1.5mL离心管内，得阴性对照溶液3.3.5. 专属性考察分别取氧化苦参碱对照品溶液、阴性对照溶液和供试品溶液 20uL,进样，观察保留时间和吸收峰出峰情况若对照品供试品与对照品保留时间相近， 且在氧化苦参碱峰位置均呈单峰； 而空白对照品在氧化苦参碱峰位置无色谱峰显示，证明无干扰3.3.6. 线性范围考察精密吸取氧化苦参碱对照品溶液 1、5、10、15、20uL,进样，以氧化苦参碱进样量 X （ug）为横坐标，峰面积 A为纵坐标进行线性回归考察。

3.3.7. 精密度（日内）实验精密吸取100ug/ml的氧化苦参碱溶液 20uL,重复进样6次，对氧化苦参碱峰面积求 RSD 值，应小于2.0%3.3.8. 稳定性实验取同一供试品溶液，将其置于室温下分别在 0、1、2、3、4、6h时，精密吸取20uL进样测定，对氧化苦参碱峰面积求 RSD值，应小于2.0%3.4. 氧化苦参碱的累积渗透量曲线实验中接收液容积为 7mL，有效扩散面积为 4.1cm2,按照下列公式计算苦参碱的累积渗透Cn X Vo + y < O X 小 Qn= 量 Q （ug/cm2）其中，Cn为t时刻进样量Xn测量值与进样体积（20uL）的比值，Ci为t时刻以前进样量Xi测量值与进样体积（20uL）的比值，Vo为接收液的总体积，Vi为每次取样的体积，A为 有效扩散面积以累积渗透量 Q对渗透时间t作线性回归，求渗透动力学方程，斜率即透皮速率常数 Js（ug - cm-2 - h-1）,并绘制氧化苦参碱的累积渗透量曲线，比较各种促渗剂的透皮吸收促进效果3.5. 促渗剂的筛选方法3.5.1. 相同浓度的不同促渗剂的促进透皮吸收效果比较参照3.1.2.项操作，分别加入 3%的氮酮、3%丙二醇、3%薄荷油于相对应的相中，制成不同 的氧化苦参碱乳膏，按 3.2.2.项操作进行透皮吸收实验，并用无促渗剂的氧化苦参碱乳膏进 行平行对照实验，比较透皮吸收的促进效果： A>B>C。

3.5.2. 不同浓度的同种促渗剂的促进透皮吸收效果比较3.5.1. 项操作后筛选促进透皮吸收效果最好的促渗剂 A,参照3.1.2.项操作，分别加入不同量的促渗剂A （1%、3%、5%），制成不同的氧化苦参碱乳膏，按 3.2.2.项操作进行透皮吸收实 验，比较透皮吸收的促进效果3.5.3. 不同促渗剂配伍对透皮吸收的考察3.5.1. 项操作后筛选促渗剂 A促进透皮吸收效果最好的浓度，分别与不同浓度的促渗剂 B（3%、5%、10%）配伍，参照3.1.2.项操作，制成不同的苦参总碱乳膏，按 3.2.2.项操作进 行透皮吸收实验，比较透皮吸收的促进效果4. 小组成员分工XXX :查询文献，药品称量，动物皮肤处理，透皮吸收实验， HPLC法含量测定，汇总实验结果XXX：查询文献，汇总实验方案，撰写实验方案报告及方案陈述，处方制备，动物皮肤处 理，透皮吸收实验XXX :查询文献，处方制备，动物皮肤处理，透皮吸收实验， HPLC法含量测定，实验数据处理XXX :查询文献，药品称量，动物皮肤处理，透皮吸收实验，透皮吸收实验， HPLC法含量测定，实验数据处理5. 实验进程安排10.29-11.15 :查询文献，制定实验方案及方案陈述。

11.16-11.18:实验方案改进和修定11.19-11.23:实验实施阶段11.24-11.30:实验总结，撰写实验报告三、可能遇到的困难、问题及解决的措施 1.处方稳定性未知：进行预实验，简单考察处方的稳定性（ 500r/min离心后观察是否分层），以便保存2.处方 含药物量及药物透皮吸收量少：查询并参考文献，修改处方，适当提高处方中氧化苦参碱的含量 3.没有透皮实验经验，皮肤处理时损伤或脂肪处理不干净：实验前在互联网上学习透皮及皮肤处理操作和注意事项， 实验时主动向老师或研究生师兄姐寻求帮助4.进样量多，氧化苦参碱保留时间较晚，耗时长：减少透皮吸收实验取样的时间点，减少样品数量； 查询并参考文献，选择合适的流动相，使氧化苦参碱出峰时间相对提前，若出现拖尾峰则加入少量的三乙胺等扫尾剂 5. HPLC仪不稳定(如频频出现基线漂移、柱效低、精密度差异大等) ：出现基线漂移时先对流动相再次超声( 15min以上)，若仍出现基线漂移考虑换一台 HPLC仪操作；发现柱效低、精密度差异大时，考虑换一台 HPLC仪操作四、参考文献[I] 潘冰冰，程智刚，杨文茜，等.药物透皮给药系统研究进展[J].中国实用医 药，2009, 4(20): 241-244. [2] 崔福德.药剂学，第6版[M].北京：人民卫生出版 社,2011: 464-479.[3] 袁园，张莉，陈晓.新型经皮渗透促进剂及作用机制的研究进展[J].中国新药杂 志,2010, 19(2): 118-122[4] 李金陵，程爱民，荆宇红，等.中药苦参抗肿瘤作用的实验研究 [J].中国肿瘤临床与康复,2002, 9(2): 28.[5] 蔡宝仁，汤苏阳.苦参类生物碱的研究进展和临床应用[J].医学信息，2001, 14(4): 236. [6]周玲.苦参碱及氧化苦参碱生物活性研究进展[J].农业与技 术，2009, 2。