慢病毒浓缩.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑慢病毒浓缩 方法一超速离心沉淀法 1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中开启紫外灯持续消毒30分钟 2. 每个Ultra-clear SW28离心管中参与约32ml的预先处理的病毒上清液 3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液将移液管一向插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别参与到另两个离心管中另取一支明净的移液管，对剩下3管举行同样处理 4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g 5. 按次序将全体6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中 6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时 7. 提防将管子从转头中取出倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干吸掉剩余的液滴在管底应当有可见的沉淀 8. 每管中参与100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀 9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。

10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡 11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底 12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬制止产生泡沫将全体管中的液体集中到一个SW28离心管中 13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中用碎干冰速冻后储存在-80 ℃ 方法二 PEG-8000浓缩法 1. 5X PEG8000+NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭尽 30min；保存在4℃ 2. 使用0.45μm滤头过滤慢病毒上清液； 3. 每30ml过滤后的病毒初始液，参与5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml； 4. 每20～30min混合一次，共举行3-5次； 5. 4度放置过夜； 6. 4度，4000 g，离心 20min； 7. 吸弃上清，静置管子1～2分钟，吸走剩余液体； 8. 参与适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀； 9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份，保存在成品管中。

用碎干冰速冻后储存在-80 ℃ — 2 —。