木糖葡萄球菌.ppt

第六章 球菌,球菌引起化脓性感染，故又称化脓性球 菌本章介绍临床最常见的兼性厌氧球 菌、即葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌 属、奈瑟菌属和布兰汉菌属第一节 葡萄球菌属,一、分 类 重要菌种有金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌， 头状葡萄球菌，人葡萄球菌和腐生葡萄球菌 人体分离的葡萄球菌还有溶血葡萄球菌、沃氏 葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施 氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔 氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、 山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌和中间葡萄球菌二、临床意义,凝固酶阳性葡萄球菌是重要致病菌，以急性 化脓性感染为特征，感染还可扩散或转移 常见的感染有疖痈、切口创伤等局部感染和 骨髓炎等全身性感染致病性与侵袭性酶类 (如血浆凝固酶)和多种毒素有关某些菌株 还能产生肠毒素引起食物中毒；产生剥脱毒 素可引起人类烫伤样皮肤综合征；产生毒性 休克综合征毒素引起毒性休克综合征(TSS)凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤粘膜 正常菌群，是医院感染的主要病原菌， 其中表皮葡萄球菌引起人工瓣膜性心 内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性 腹膜炎、血管移植物感染和人工关节 感染等；腐生葡萄球菌则是女性尿路 感染的重要病原菌，成为重要的条件 致病菌和免疫受损患者的感染菌。

感染的发生常和细菌产生夹膜多糖或糖 萼有关，它能增强细菌与生物性瓣膜、 导管等物质表面的粘附或在其表面形成 一层生物膜而保护细菌对抗杀菌物质作 用葡萄球菌的耐药性已演变为医院感 染和临床治疗的棘手问题三、微生物特性,直径0.5～1.5μm、革兰阳性球菌， 排列呈葡萄串样，无鞭毛和芽胞 能形成荚膜兼性厌氧菌，营养要求不高，最适生长温 度35℃～37℃，最适 pH7.4～7.6普通培 养基上形成2～3mm呈金黄色、白色、柠檬 色等不透明圆形凸起菌落，血琼脂平板上 有透明溶血环能在10％～15％NaCl琼脂 中生长，接种于高盐琼脂平板上，有利于 菌种检出抵抗力最强，耐干燥，对多种抗生素和 消毒剂不敏感生化反应活泼、能分解 多种糖类和蛋白质，触酶阳性G+Cmol％ 为30～39，携带青霉素酶和乙酰基转移 酶的质粒，能通过转导转移耐药性四、微生物检验,（一） 采取标本应避免正常菌群污染 （二） 直接显微镜检查 无菌体液如脑脊液和关节穿刺液涂片革 兰染色，查见细菌具有重要临床价值； 其他体液标本如同时伴有炎性细胞也 具有参考价值，可向临床初步报告“查 见属革兰阳性葡萄球菌”其他体液标本如同时伴有炎性细 胞也具有参考价值，可向临床初 步报告“查见属革兰阳性葡萄球菌”。

三）分离培养与鉴定 临床标本可接种血平板，污 染标本接种在选择平板上，如甘 露醇高盐平板，血液标本则用肉 汤增菌培养基孵育过夜平板上可见直径约为2-3mm， 呈金黄色、白色或柠檬色的光滑、不 透明、凸起圆形菌落，有时可见β- 溶血环，挑取菌落作鉴定试验鉴定病原性葡萄球菌的方法,1．凝固酶试验 试验所用的血浆为 EDTA抗凝兔血浆金黄色葡萄球 菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反 应1)玻片凝固酶试验：金黄色葡萄 球菌表面有结合的凝固酶(聚集 因子)，与血浆中的纤维蛋白原 交联使菌体快速凝聚2)试管凝固酶试验：细菌分泌到 菌体外的凝固酶被血浆中的协 同因子激活形成复合物，再使 纤维蛋白原转变成纤维蛋白2.耐热核酸酶试验 大多数金 黄色葡萄球菌、施氏葡萄球 菌、中间葡萄球菌、猪葡萄 球菌能产生耐热核酸酶将待测菌的过夜肉汤培养物置沸 水浴15min后，滴加于含甲苯胺蓝 核酸琼脂上已打好的直径为2～5mm 小孔内，置35％孵育，1h后观察 结果，绕孔周围蓝色琼脂转变为 粉红环为阳性大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡 萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄 球菌和猪葡萄球菌为阳性３．磷酸酶试验,将待测菌种点种在加有硝基酚 磷酸盐的pH5.6～6.8MH琼脂上， 孵育18～24h，菌落周围出现黄 色为阳性。

溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、 施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为 试验阳性 将孵育24h斜面培养物接种在含 吡咯烷酮-β萘基酰胺肉汤中,35℃ 孵育2h，加入试剂后2分钟内呈现 深紫红色为阳性４．吡咯烷酮芳基酰胺酶试验,(四)药物敏感性试验,葡萄球菌属细菌药敏试验选择抗生素： A组(常规首选药物)为苯唑西林、青 霉素； B组(临床使用主要药物)阿齐霉素、 克林霉素、甲氨苄啶／磺胺甲嗯唑、 万古霉素；,C组(对A组耐受、过敏或无反应者) 用环丙沙星、庆大霉素、氯霉素； U组(尿道中分离细菌)用诺氟沙星、 呋喃妥因耐甲氧西林葡萄球菌,通过药敏试验可筛选出耐甲氧西林葡萄球菌 (methecillin resistant Staphylococcus， MRS)，它是携带mec A基因、编码低亲和力 青霉素结合蛋白导致耐甲氧西林、所有头孢 菌素、碳青霉烯类、青霉素类+青霉素酶抑 制剂抗生素的葡萄球菌，该菌是医院内感染 的重要病原菌，感染多发生于免疫缺陷患者、 老弱患者及手术、烧伤后的患者、极易导致 感染暴发流行，治疗困难、病死率高六)检验结果分析与报告,葡萄球菌是临床上常见的细菌，经涂 片染色镜检观察革兰阳性球菌和典型 菌落形态，若触酶试验阳性者，应先 用凝固酶试验检查，将其分成凝固酶 阳性和凝固酶阴性细菌。

前者大多为金黄色葡萄球菌，应及 时快速鉴定和进行药敏试验，尽快 报告临床后者大多是从输液导管、 人工植入组织中分离出的细菌，应 视为病原菌，须鉴定到菌种对凝固酶阴性葡萄球菌，可先用呋 喃唑酮纸片（100μg/片)，杆菌肽 纸片(0.04u／片)作药敏试验和氧化 酶试验，以此与微球菌属细菌鉴别， 微球菌对杆菌肽敏感而对呋喃唑酮 耐药、氧化酶试验阳性，与葡萄球 菌属正好相反若药物敏感性试验是甲氧西林耐药 的菌株，则报告该菌株耐所有青霉 素、头孢菌素、碳青霉烯类和β-内 酰胺药β-内酰胺酶抑制剂类抗生素， 同时对氨基糖苷类，大环内酯类和 四环素类抗生素也耐药第二节 链球菌属,一、分 类 分类发生变化，D群链球菌独立为肠球菌属, N群链球菌为乳球菌属鉴定仍用传统的分类方法，分为： 1.具有A、C、G抗原群β溶血性链球菌 包括: ①菌落直径大于0.5mm A群的化脓 性链球菌,C群、G群的马链球菌和似马链 球菌；②菌落直径小于0.5mm 具A、C、 G抗原，称米勒链球菌，主要包括咽喉炎 链球菌、中间型链球菌和星座链球菌3种 还有溶血和不溶血的细菌2. 具有B抗原群β溶血性链球菌又称 无乳菌。

3.α溶血或草绿色溶血包括肺炎链球 菌和草绿色链球菌群 4. 不溶血D群抗原链球菌称牛链球菌二、临床意义,化脓性链球菌是致病力最强的链球菌, 能产生多种毒素、M蛋白、脂磷壁酸和 链激酶、链道酶、透明质酸酶等致病因 子，可引起咽炎、呼吸道感染、丹毒、 心内膜炎和脑膜炎等，产毒株还可引起 猩红热该群细菌可致变态反应性疾病 如急性肾小球肾炎，风湿热等无乳链球菌是新生儿脑膜炎的常见菌， 该菌定居于妇女生殖道，故感染多发于出 生后24h，以肺炎为主晚发型为产后7天 至3月,以脑膜炎和菌血症为主 B群链球菌对成人侵袭力较弱，主要有 肾盂肾炎、子宫内膜炎;糖尿病泌尿生殖道 功能失调，肿瘤和免疫功能低下者易受B 群链球菌感染C、G群β溶血性链球菌可引起上 述相似的感染米勒链球菌是口腔、 上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常 菌群，引起手术和创伤等内源性感染肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气 管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳 突炎、鼻窦炎、脑膜菌血症荚膜的 侵袭力起重要作用，溶血素、神经胺 酸酶也是其主要致病物质草绿色链球菌是人体正常菌群，从 血液中分离出该菌常被认为是污染的 细菌然而它可引起瓣膜异常患者的 亚急性细菌性心内膜炎。

血液链球菌、 温和链球菌、格氏链球菌、口腔链球 菌、中间型链球菌、常分离自深部脓 肿、尤其是肝和脑脓肿三、微生物特征 直径小于2μm的革兰阳性球菌，呈链状排 列，无芽胞和动力，形成荚膜肺炎链球菌 呈矛尖状，宽端相对尖端向外 兼性厌氧菌，肺炎链球菌和草绿色链球菌 某些菌种需要CO2：促进其生长营养要求 高，须在培养基中加入血液、血清最适生 长温度35～37℃，pH7.4～7.6，血平板上形 成灰白色，透明表面光滑的小菌落，环绕菌 落形成α、β、γ三种特征性溶血现象，液 体培养形成絮状和颗粒沉淀发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳 酸为代谢终末产物，触酶阴性链球 菌基因DNA中G+C mol％为31～34 抗原结构复杂，主要有多糖抗原和蛋 白抗原，前者位于细胞壁以此可将链 球菌分类为A、D、C、D、F、G等13 群 本菌属对干燥和消毒剂敏感，除肺 炎链球菌外，较少引起细菌耐药性四、微生物检验 1. 主要采咽拭标本、痰液、脓汁和血液 等标本，采集后在2h内送验，对B群 溶血链球菌的检查，第35～37周妊娠 妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素 (10μg／m1)和萘啶酸(15μg g／m1) 选择性培养肉汤中孵育18～24h，再 作分离培养。

2. 直接显微镜检查标本涂片革兰染色 镜检，见链状排列革兰阳性球菌有 助于无正常菌群污染标本，荚膜肿 胀试验用于检查肺炎链球菌 3. 直接检测抗原咽拭标本的A群和阴 道标本的D群链球菌可用抗原检测， 先将标本放于含亚硝酸液中孵育片 刻，用ELISA方法检测标本含菌 数少可出现假阴性4. 分离培养与鉴定 用血平板培养有助于识别溶血特性和 进一步鉴定初代分离需用5％CO２环 境, 35℃—37℃孵育24h, 观察菌落性状： β溶血的A、C、G群菌落较大，直径大 于0.5mm，而米勒链球菌则小于0.5mm B群链球菌菌较大，溶血环较A、C、G 群模糊，α溶血菌落呈草绿色，肺炎链 球菌因荚膜多糖使菌落呈粘性牛型链 球菌则为无溶血环呈灰色链球菌属鉴定方法 1. β-溶血链球菌鉴定 (1) Lancefield群特异性抗原鉴定：B群 为无乳链球菌，F群为米勒链球菌 (2) PYR试验：化脓性链球菌产生的吡 咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮B- 萘基酰胺，加入 N、N-二甲氧基肉 桂醛试剂后产生桃红色3) 杆菌肽敏感试验：可作为筛选试验 0.04U杆菌肽药敏纸片贴在待测菌的 血平板上，35℃孵育过液后，观察 抑菌环,化脓性链球菌敏感为阳性。

(4) VP试验：挑取平板上孵育过夜菌落 置于2ml VP肉汤中，孵育6h后加入 VP试剂，摇匀30秒，出现桃红色者 为阳性5) CAMP试验：无乳链球菌能产生 CAMP因子促进金葡菌溶血能力， 可作为初步鉴定试验先将金葡 菌(ATCC25923)沿直径划线接种， 再沿垂直方向接种无乳链球菌， 两线不得相接，间隔约3～4mm 35℃孵育过夜，划线交界处出现 箭头状溶血为阳性2. 非β－溶血链球菌鉴定 (1) optochin试验：含5μｇoptochin 纸片贴于涂布有待测菌的平板上, 35℃孵育过夜，抑菌圈大于14mm 即为敏感肺炎链球菌敏感2) 胆汁溶菌试验：将O．5ml的麦氏浓 度细菌悬液和等量的2％去氧胆盐置 于试管内，35℃孵育2小时后, 菌液 变清为阳性肺炎链球菌为阳性 (3) 胆汁七叶苷试验：将待测菌落接种 于胆汁七叶苷斜面，35℃孵育48小 时，斜面黑色为阳性牛链球菌试 验阳性3．草绿色链球菌鉴定,(五) 抗链球菌溶血素O试验 常用于风湿热的辅助诊断，活 动性风湿热患者的抗体效价一般 超过400单位六) 药物敏感性试验 A组为红霉素、青霉素、甲氨苄啶／磺 胺甲嗯唑等； B组为头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、 培南类等； C组为阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、 利福平等。

青霉素是抗链球菌的首选药 物，此外头孢菌素、红霉素、万古霉素 也是治疗链球菌感染的药物有报道A群链球菌红霉素耐药株和 牛链球菌万古霉素耐药株，耐青霉 素的肺炎。