实验八、蛋黄卵磷脂的制备.ppt

实验八、蛋黄卵磷脂的制备实验八、蛋黄卵磷脂的制备 《《专业综合实验专业综合实验2》》 化学与环境工程学院化学与环境工程学院主讲：孟江平主讲：孟江平 《《专业综合实验专业综合实验2》》 一、实验目的一、实验目的1、了解并掌握鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理、了解并掌握鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理和方法 教学重点：教学重点：1、鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理和方法鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理和方法  《《专业综合实验专业综合实验2》》 教学方法：讲授、实际指导教学方法：讲授、实际指导教学时数：教学时数：8学时教学过程教学过程:三、实验原理三、实验原理卵磷脂最早发早发现于卵磷脂最早发早发现于1844年，由法国学者葛布利（年，由法国学者葛布利（Gobley）从）从蛋黄中分离出来，故而得名卵磷脂是构成生物体细胞膜的重要蛋黄中分离出来，故而得名卵磷脂是构成生物体细胞膜的重要成分之一，广泛存在于动植物体内虽然许多食物中都含有一定成分之一，广泛存在于动植物体内虽然许多食物中都含有一定的卵磷脂，其中大豆、卵黄和动物肝脏中的卵磷脂含量较高卵的卵磷脂，其中大豆、卵黄和动物肝脏中的卵磷脂含量较高卵磷脂既是一种重要且安全的食品乳化剂，有事一种保健食品。

此磷脂既是一种重要且安全的食品乳化剂，有事一种保健食品此外还广泛应用于临床上心脑血管及肝、肿瘤等疾病的治疗，及作外还广泛应用于临床上心脑血管及肝、肿瘤等疾病的治疗，及作为药物载体为药物载体 《《专业综合实验专业综合实验2》》 卵磷脂为两性分子，既具有脂溶性，又具有亲水性其等卵磷脂为两性分子，既具有脂溶性，又具有亲水性其等电点约为电点约为ph6.7卵磷脂外观为浅黄色至浅棕色粉末或半透卵磷脂外观为浅黄色至浅棕色粉末或半透明黏稠状液态物质，有清淡柔和的风味和香味卵磷脂可明黏稠状液态物质，有清淡柔和的风味和香味卵磷脂可溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂中，也能溶于水成为胶溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂中，也能溶于水成为胶体状态，但不溶于丙酮，且不同的磷脂在有机溶剂中溶解体状态，但不溶于丙酮，且不同的磷脂在有机溶剂中溶解度不同，故可用有机溶剂来提取分离卵磷脂但单纯用溶度不同，故可用有机溶剂来提取分离卵磷脂但单纯用溶剂萃取制备卵磷脂是所得产品纯度不高，如果在萃取过程剂萃取制备卵磷脂是所得产品纯度不高，如果在萃取过程中加入酸、碱或盐类物质，利用金属离子或酸、碱对卵磷中加入酸、碱或盐类物质，利用金属离子或酸、碱对卵磷脂分子的选择性，可以获得较高纯度的卵磷脂。

脂分子的选择性，可以获得较高纯度的卵磷脂 本实验使用有机溶剂从鸡蛋卵黄中提取卵磷脂、利用金属本实验使用有机溶剂从鸡蛋卵黄中提取卵磷脂、利用金属盐沉淀纯化卵磷脂，并对卵磷脂的质量进行分析盐沉淀纯化卵磷脂，并对卵磷脂的质量进行分析 《《专业综合实验专业综合实验2》》 二、实验材料、试剂与仪器二、实验材料、试剂与仪器1、材料：、材料：新鲜鸡蛋、卵磷脂对照品新鲜鸡蛋、卵磷脂对照品2、试剂：、试剂：乙醇（乙醇（95%）、无水乙醇、丙酮、石油醚、氯化锌、氯仿、）、无水乙醇、丙酮、石油醚、氯化锌、氯仿、甲醇、碘，均为分析纯甲醇、碘，均为分析纯3、仪器：、仪器：紫外可见分光光度计、旋转蒸发仪、真空干燥箱、恒温磁紫外可见分光光度计、旋转蒸发仪、真空干燥箱、恒温磁力搅拌器、离心机、力搅拌器、离心机、GF250硅胶板（硅胶板（10cm×20cm）、薄层色）、薄层色谱展开缸、玻璃毛细管（内径谱展开缸、玻璃毛细管（内径0.9～～1.1mm，壁厚，壁厚0.10～～0.15mm，管长，管长100mm）等 《《专业综合实验专业综合实验2》》 三、实验实验方法与步骤三、实验实验方法与步骤 1、蛋黄的收集、蛋黄的收集采用放置于冰箱保存的新鲜鸡蛋。

打蛋是要注意保采用放置于冰箱保存的新鲜鸡蛋打蛋是要注意保证蛋黄的完整性，分离蛋黄，备用证蛋黄的完整性，分离蛋黄，备用2、卵磷脂的提取、卵磷脂的提取取取100g鸡蛋卵黄于烧杯中，加入鸡蛋卵黄于烧杯中，加入200ml95%乙醇，乙醇，置磁力搅拌器室温下搅拌置磁力搅拌器室温下搅拌1h，，3000r/min离心分离离心分离10min，将沉淀物再加入，将沉淀物再加入95%乙醇，重复以上步骤乙醇，重复以上步骤3次收集上清液，次收集上清液，45℃℃下减压蒸馏至近干，用少量石下减压蒸馏至近干，用少量石油醚溶解，得石油醚溶液，于石油醚溶液中加入适量油醚溶解，得石油醚溶液，于石油醚溶液中加入适量丙酮，分离出沉淀物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超丙酮，分离出沉淀物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超过过1.5cm，，40℃℃左右减压真空干燥左右减压真空干燥2～～4h，得淡黄色，得淡黄色的卵磷脂粗品，准确称量，记录的卵磷脂粗品，准确称量，记录3、卵磷脂的纯化、卵磷脂的纯化 《《专业综合实验专业综合实验2》》 将将2.5g粗卵磷脂溶于粗卵磷脂溶于25ml无水乙醇中，加入相当无水乙醇中，加入相当于卵磷脂质量于卵磷脂质量10%的的Zncl2的水溶液的水溶液3ml，室温下搅，室温下搅拌拌0.5h，得金属盐卵磷脂络合物沉淀，过滤，收集，得金属盐卵磷脂络合物沉淀，过滤，收集沉淀物。

加入冰冷丙酮沉淀物加入冰冷丙酮50ml洗涤沉淀物，搅拌洗涤沉淀物，搅拌1h，，过滤，收集沉淀物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超过滤，收集沉淀物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超过过1.5cm，，40℃℃左右减压真空干燥左右减压真空干燥2～～4h，可得淡黄，可得淡黄色蜡状的精制卵磷脂，准确称量，记录色蜡状的精制卵磷脂，准确称量，记录4、卵磷脂的检测、卵磷脂的检测（（1）薄层层析分析）薄层层析分析 将卵磷脂样品与对照品分别配成将卵磷脂样品与对照品分别配成2%的氯仿溶液，的氯仿溶液，用用GF250硅胶板进行层析，展开剂为氯仿：甲醇：硅胶板进行层析，展开剂为氯仿：甲醇：水（水（65：：25：：4），层析完毕后，取出薄板，干燥，），层析完毕后，取出薄板，干燥，用碘蒸汽显色，观察并拍照用碘蒸汽显色，观察并拍照 《《专业综合实验专业综合实验2》》 （（2）紫外分光光度法测定）紫外分光光度法测定 将自制的卵磷脂样品溶于无水乙醇中，浓度将自制的卵磷脂样品溶于无水乙醇中，浓度为为0.1%，用紫外分光光度计扫描其在，用紫外分光光度计扫描其在190～～400nm的吸收光谱，卵磷脂的紫外最大吸收峰的吸收光谱，卵磷脂的紫外最大吸收峰应在应在215nm左右的波长处。