分子实验常用试剂缓冲液配制.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑分子实验常用试剂缓冲液配制 分子测验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、1M Tris-HCl 组份浓度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0） 配制量 1L 配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中 2. 参与约800mL的去离子水，充分搅拌溶解 3. 按下表量参与浓盐酸调理所需要的pH值 pH值 浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存 留神：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，由于Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位 2、1.5 M Tris-HCl 组份浓度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） 配制量 1L 配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中 2. 参与约800mL的去离子水，充分搅拌溶解 3. 用浓盐酸调pH值至8.8 4. 将溶液定容至1L 5. 高温高压灭菌后，室温保存 留神：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，由于Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer 组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） 配制量 1L 配置方法 1. 量取以下溶液，置于1L烧杯中 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向烧杯中参与约800mL的去离子水，平匀混合 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌 4. 室温保存 4、3 M 醋酸钠 组份浓度 3 M 醋酸钠 （pH5.2） 配制量 100mL 配置方法 1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，参与约40mL的去离子水搅拌溶解。

2. 参与冰乙酸调理pH值至5.2 3. 参与去离子水将溶液定容至100mL 4. 高温高压灭菌后，室温保存 5、PBS Buffer 组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 配制量 1L 配置方法 1. 称量以下试剂，置于1L烧杯中 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中参与约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加HCl将pH值调理至7.4，然后参与去离子水将溶液定容至1L 4. 高温高压灭菌后，室温保存 留神：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2 6、10 M醋酸铵 组份浓度 10 M醋酸铵 配制量 100mL 配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，参与约30 mL的去离子水搅拌溶解 2.加去离子水将溶液定容至100mL 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌 4.密封瓶口于室温保存 留神：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌 7、Tris- HCl平衡苯酚 配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学测验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应制止使用同时也应制止使用结晶苯酚，结晶苯酚务必在160℃对其举行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推举使用高质量的苯酚举行分子生物学测验 2. 操作留神：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等全体操作均应在通风橱中举行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇 3. 苯酚平衡：由于在酸性pH条件下DNA调配于有机相，因此使用苯酚前务必对苯酚举行平衡使其pH值达成7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达成室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解 ② 参与羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％该化合物是一种恢复剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色有助于便当识别有机相 ③ 参与等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④ 重复操作步骤③ ⑤ 参与等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相 ⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留片面上层水相 ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8 ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存 8、苯酚/氯仿/异戊醇 配置方法 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时往往使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分开，而异戊醇那么有助于消释抽提过程中展现的气泡 2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）平匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存 9、10％（W/V）SDS 组份浓度 10％（W/V）SDS 配制量 100mL 配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，参与约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

2. 滴加数滴浓盐酸调理pH值至7.2 3. 将溶液定容至100mL后，室温保存 10、2 N NaOH 组份浓度 2N NaOH 配制量 100mL 配置方法 1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂） 2. 称取8g NaOH提防地逐步参与到烧杯中，边加边搅拌 3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存 11、2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl 配制量 100mL 配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中参与21.6mL的浓盐酸（11.6N），平匀混合 2. 室温保存。

12、5 M NaCl 组份浓度 5 M NaCl 配制量 1L 配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，参与约800mL的去离子水后搅拌溶解 2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份 3. 高温高压灭菌后，4℃保存 13、20％（W/V）Glucose 组份浓度 20％（W/V）Glucose 配制量 100mL 配置方法 1. 称取20。