《发酵工程的无菌技术》第3课时示范课教学课件【高中生物苏教版选修3新课标】.pptx

第二节 发酵工程的无菌技术（第3课时）第一章 发酵工程新课引入 酵母菌是单细胞真菌，可以进行出芽生殖，也可以进行孢子生殖其培养的最适pH为4.55.0，最适生长温度一般为2830，可以用液体培养基培养，也可以用固体培养基培养，但要获得纯化的酵母菌菌落，则需通过固体培养基培养思考：如何获得纯化的酵母菌菌落？平板划线法一、平板划线法 阅读课本第21页的内容，理解平板划线法的概念和原理，并初步认识平板划线法的操作方法学生活动一、平板划线法 把含有多种微生物的杂菌样品，通过在特定的琼脂平板表面划线稀释，从而获得_的方法 将微生物样品在琼脂平板表面多次做_的稀释划线，经过这样的操作可得到_经过平板培养后，会形成部分_的纯种菌落1概念单个菌落“由点到线”较多独立分布的单个微生物由单个微生物生长、繁殖而成2原理平板划线法分离和培养酵母菌 在一个倒有培养基的培养皿的皿底外侧面中央用记号笔画一直线，再在此线中间处画一垂直线，将培养皿分成三个区域：第1区域、第2区域、第3区域，分别标上“1”“2”“3”字样123 接种划线时，将带有酵母菌样品的接种环，在培养皿内培养基的第1区域划线，然后再从第1区域划到第2区域，从第2区域划到第3区域（在第2次、第3次划线前，接种环需过火灭菌）。

在固体培养基表面完成多次“由点到线”的逐步稀释划完线后盖上皿盖，倒置培养 接种和划线操作需要在酒精灯火焰附近进行 通过培养可以得到由单个酵母菌增殖而形成的菌落一、平板划线法 灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线重复以上操作，作第三、四、五次划线注意不要将最后一次的划线和第一次的划线相连1）五区划线法（2）几种划线方法示意图拓展平板划线的其他方法二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落尝试通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落一）目的要求（二）实验原理 马铃薯葡萄糖琼脂培养基能满足酵母菌生长、繁殖的营养需要，利用前面实验中配制的马铃薯葡萄糖琼脂培养基制作平板 平板划线法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法之一在制作好的酵母菌培养基平板上，采用无菌操作技术及平板划线法能够获得纯化的酵母菌菌落二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 酵母菌样本（菌种）；接种环、酒精灯、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅；马铃薯葡萄糖琼脂培养基三）实验器材和试剂二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落（四）实验步骤1培养基和培养皿灭菌使用哪种灭菌方法和设备进行灭菌？用牛皮纸包扎已配制的培养基已包装的培养皿高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌法二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 将灭好菌的培养基和培养皿取出，置于操作台上，待培养基冷却到50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。

2倒平板拔出锥形瓶的棉塞将瓶口迅速通过火焰将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（1020 mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖等培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置操作倒平板 将灭好菌的培养基和培养皿取出，置于操作台上，待培养基冷却到50 左右时进行倒平板操作图1 打开瓶塞图2 灼烧瓶口灭菌图3 倒培养基 等平板冷却凝固后，将平板倒置（皿盖在下，皿底在上）备用 在酒精灯火焰旁一只手拿着装有培养基的锥形瓶，另一只手拔出瓶塞（图1），使瓶口迅速通过火焰23次（图2），并转动瓶口，确保瓶口被灭菌再取无菌培养皿，在火焰旁用拇指和食指将培养皿打开（稍大于锥形瓶瓶口），将锥形瓶中的培养基倒入培养皿中（图3） 注意事项倒平板的注意事项u 待培养基冷却到50 左右时进行倒平板操作u 要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰，通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基u 倒平板时，要用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基u 整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染1倒平板时，为什么在酒精灯火焰旁操作？ 酒精灯火焰旁是无菌区域，可以避免周围环境中的微生物的污染2倒平板时为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

3平板冷凝后为何要倒置？ 防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快蒸发易错辨析二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落平板划线法操作的注意事项划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束后仍需灼烧接种环灼烧接种环之后，要等其冷却后才能挑取菌体，以免温度太高杀死菌种在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，使微生物的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细胞繁殖而来的菌落多次划线时最后一区域不要与第一区域相连接种和划线操作需要在酒精灯火焰附近进行三区划线示意图培养获得的酵母菌菌落二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 在平板上划线，然后置于28恒温箱内培养3划线和培养 根据实验操作流程进行倒平板和划线在此过程中注意不到烫伤、划伤，操作要规范学生活动二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落每次划线前后灼烧接种环的目的是什么？灼烧时间目的第一次划线前每次划线前划线结束后杀死接种环上可能存在的微生物，防止外来微生物干扰杀死上一次划线结束后接种环残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端杀死接种环上残存的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落1在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？如果你观察到了不同形态的菌落，可能是哪些原因引起的？ 如果观察到单菌落，培养基上生长的菌落颜色、形状、大小等基本一致，说明接种成功。

若培养基出现了其他菌落，说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，可能是菌种不纯、培养基灭菌不彻底或实验过程中被杂菌污染五）结果分析与评价二、通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落2若培养基出现了其他菌落，如何检验培养基是否被杂菌污染？ 将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若出现了菌落，说明培养基被杂菌污染五）结果分析与评价课堂小结 倒平板时都有哪些操作是为了避免杂菌污染？1锥形瓶的瓶口通过火焰；2在酒精灯附近操作；3培养皿只露出一个小缝；4平板冷凝后倒置学生活动 平板划线的过程中有哪些操作是为了避免杂菌污染？1灼烧接种环，在火焰旁冷却；2将试管口通过火焰；3在火焰附近将培养皿开一条缝；4每次接种完灼烧接种环接种环灭菌第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌课堂小结 思考平板划线的基本操作和注意事项学生活动1下列关于微生物的实验操作的叙述，正确的是（ ）A配制细菌培养基过程中，需要在倒平板时调节培养基的pHB配制固体培养基时加入琼脂，其作用是为微生物生长提供碳源C平板划线法接种时，每次划线之前都需要对接种环进行灭菌D实验结束后，使用完的培养基可以直接丢弃课堂检测C 2（多选）微生物接种的方法很多，平板划线法是常用的一种。

如图是平板划线示意图，划线的顺序为下列相关叙述错误的是（ ） A划线操作时，将蘸有菌种的接种环插入培养基B平板划线后培养微生物时要倒置培养C可以将第区域的划线与第区域的划线相连D在第区域中划线前都要对接种环进行灭菌课堂检测AC 3有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是（ ）A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落造成污染C倒平板时将培养皿的盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿D检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温箱中培养课堂检测C 敬请各位老师提出宝贵意见！。