遗传变异3菌种保藏课件
32页1、第八章 微生物的遗传变异与育种,第四节 菌种的衰退、复壮与保藏,一、菌种的衰退与复壮 1.衰退(degeneration):是指由于自发突变的结果,而使某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 具体表现有: 原有形态性状变得不典型; 生长速度变慢,产生孢子变少; 对外界不良条件的抵抗能力下降; 代谢产物生产能力下降; 致病菌对宿主侵染力下降。,衰退的防止 控制传代次数 创造良好的培养条件 利用不易衰退的细胞传代 采用有效的菌种保藏方法,2.复壮(rejuvenation):使衰退的菌种恢复原来优良性状。 狭义的复壮:是一种消极的措施,是指在菌种已发生衰退的情况下,通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标,从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体,以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。 广义的复壮:是一项积极的措施,即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前,就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作,以期从中选择到自发的正变个体。,菌种的复壮措施: 纯种分离法 通过宿主体复壮 淘汰已衰退的个体,划线接种,分离纯化,Inoculating an agar plate to obt
2、ain single colonies,二、菌种保藏,1.目的: 存活,不丢失,不污染 防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种,2.原理: 挑选典型菌种或典型培养物的优良纯种,最好保藏它们的休眠体; 创造一个有利于它们长期休眠的良好环境条件。,措施 低温 干燥 缺氧 避光 缺乏营养 添加保护剂 添加酸度中和剂,3.菌种保藏的方法,(1)斜面保藏法 方法:接种适宜斜面培养基培养4保藏 措施:低温,4 适用:各大类 保藏期:16个月,定时传代 用橡皮塞代替棉塞,可适当延长保藏时间,(2)石蜡油封藏法 方法:斜面或半固体接种 培养 加无菌液体石蜡高出培养基1cm415保藏 措施:低温,隔氧 适用:不能利用石油的各大类 保藏期:12年 优点:简便,(3)砂土管保藏法 方法:孢子或芽孢悬液 加入无菌砂土管中 干燥 封口 保藏 措施:无营养,缺氧,干燥 适用:产孢子(芽孢)微生物 保藏期:110年,(4)冷冻真空干燥保藏 方法:菌种培养 用保护剂悬浮 加入安瓿管中低温冻结(-25-40)抽真空干燥 真空封口 检查真空度 保藏 措施:低温、干燥,缺氧,有保护剂 保藏期:515年或更长 适用于
3、各种微生物,便于大量保藏,菌种存活时间长,是目前最理想的保藏方法。,(5)甘油悬液低温冷冻保藏法 方法:菌种培养 1530%甘油培养液悬浮 加入保藏管中 置 -80冰箱保藏 措施:低温(-80)、保护剂(1550%甘油) 适用:细菌、酵母菌 保藏期:约10年,(6)液氮保藏法 方法:菌种培养 保护剂悬浮 加入保藏管中 置液氮瓶中 措施:超低温(-196)、保护剂 保藏期:15年 适用于各种微生物,是防止菌种退化最有效的保藏方法。,菌种保藏机构的任务: 广泛收集实验室和生产用菌种、菌株、病毒毒株的基础上,将它们妥善保藏,使之不死、不衰、不乱,以达到便于研究、交换和使用的目的。,国内外菌种保藏机构,菌种保藏机构: 中国微生物菌种保藏委员会(CCCM) 中国典型培养物保藏中心(CCTCC) 美国典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所(NCTC) 美国北部地区研究实验室(NRRL) 国家水生动植物病原库(APCCAM),26,27,28,29,30,31,思考题,名词解释: 遗传、遗传型、表型、变异、饰变、基因重组、转化、转导、接合、原生质体融合、衰退、复壮、质粒 核酸存在的七个水平为哪些? 典型质粒的种类。 基因突变的机制有哪些? 7种常用菌种保藏方法的比较。,
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