遗传变异3菌种保藏课件

第八章 微生物的遗传变异与育种,第四节 菌种的衰退、复壮与保藏,一、菌种的衰退与复壮 1.衰退（degeneration）：是指由于自发突变的结果，而使某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 具体表现有： 原有形态性状变得不典型； 生长速度变慢，产生孢子变少； 对外界不良条件的抵抗能力下降； 代谢产物生产能力下降； 致病菌对宿主侵染力下降。,衰退的防止 控制传代次数 创造良好的培养条件 利用不易衰退的细胞传代 采用有效的菌种保藏方法,2.复壮（rejuvenation）：使衰退的菌种恢复原来优良性状。 狭义的复壮：是一种消极的措施，是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。 广义的复壮：是一项积极的措施，即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的正变个体。,菌种的复壮措施： 纯种分离法 通过宿主体复壮 淘汰已衰退的个体,划线接种，分离纯化,Inoculating an agar plate to obtain single colonies,二、菌种保藏,1.目的： 存活，不丢失，不污染 防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种,2.原理： 挑选典型菌种或典型培养物的优良纯种，最好保藏它们的休眠体； 创造一个有利于它们长期休眠的良好环境条件。,措施 低温 干燥 缺氧 避光 缺乏营养 添加保护剂 添加酸度中和剂,3.菌种保藏的方法,（1）斜面保藏法 方法：接种适宜斜面培养基培养4保藏 措施：低温，4 适用：各大类 保藏期：16个月，定时传代 用橡皮塞代替棉塞，可适当延长保藏时间,（2）石蜡油封藏法 方法：斜面或半固体接种 培养 加无菌液体石蜡高出培养基1cm415保藏 措施：低温，隔氧 适用：不能利用石油的各大类 保藏期：12年 优点：简便,（3）砂土管保藏法 方法：孢子或芽孢悬液 加入无菌砂土管中 干燥 封口 保藏 措施：无营养，缺氧，干燥 适用：产孢子（芽孢）微生物 保藏期：110年,（4）冷冻真空干燥保藏 方法：菌种培养 用保护剂悬浮 加入安瓿管中低温冻结（-25-40）抽真空干燥 真空封口 检查真空度 保藏 措施：低温、干燥，缺氧，有保护剂 保藏期：515年或更长 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最理想的保藏方法。,（5）甘油悬液低温冷冻保藏法 方法：菌种培养 1530%甘油培养液悬浮 加入保藏管中 置 -80冰箱保藏 措施：低温（-80）、保护剂（1550%甘油） 适用：细菌、酵母菌 保藏期：约10年,（6）液氮保藏法 方法：菌种培养 保护剂悬浮 加入保藏管中 置液氮瓶中 措施：超低温（-196）、保护剂 保藏期：15年 适用于各种微生物，是防止菌种退化最有效的保藏方法。,菌种保藏机构的任务： 广泛收集实验室和生产用菌种、菌株、病毒毒株的基础上，将它们妥善保藏，使之不死、不衰、不乱，以达到便于研究、交换和使用的目的。,国内外菌种保藏机构,菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCM) 中国典型培养物保藏中心（CCTCC） 美国典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 美国北部地区研究实验室（NRRL） 国家水生动植物病原库（APCCAM）,26,27,28,29,30,31,思考题,名词解释： 遗传、遗传型、表型、变异、饰变、基因重组、转化、转导、接合、原生质体融合、衰退、复壮、质粒 核酸存在的七个水平为哪些？ 典型质粒的种类。 基因突变的机制有哪些？ 7种常用菌种保藏方法的比较。,