《营养师资料》微生物 ppt文件
28页1、实验一、常用培养基的制备、灭菌与消毒营养:从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质,满足生长和繁殖需要的一种生理过程。是生命活动的物质基础,是生命活动的起点。营养物:具有营养功能的物质。也包括光能。提供生物的结构物质、能量、代谢调节物质和良好的生理环境。营养要素:碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水培养基:人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。要求:应具备6大营养要素;物质比例合适;必须灭菌。,选用和设计培养基的原则、方法 及制备过程:原则:目的明确 、营养协调、经济节约物理化学条件适宜方法:生态模拟、查阅文献精心设计、试验比较 步骤:称量、熔化、调PH、过滤、分装、加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查,培养基种类:一、按成分的不同分天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态分固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途基础培养基、选择培养基加富培养基、鉴别培养基,消毒与灭菌消毒:消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌:杀灭一切微生物的营养体,芽胞和孢子。方法: 一、物理的方法:加热、过滤、辐射 二、化学的方法:用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏
2、细菌代谢机能。如重金属离子,磺胺类药物及抗生素等。,加热法: 干热法:火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等,试管口和瓶口,涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气(160170C)加热灭菌12h,适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性,与水的含量有关,当环境和细胞含水量越大,凝固越快。 3、注意事项:1)培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法;2)温度控制在180;3)物品不能太挤;4)温度降至70时才开箱门。,湿热法 : 原理:因为湿热中菌体吸水,蛋白质容易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低;湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。高压蒸汽灭菌法: 1、设备:高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌,也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项:1)冷空气彻底排除;2)加水;3)压力降为“0”时方可打开。,常压蒸汽灭菌:对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基,含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。煮沸灭菌法:适用注射器和解剖器
3、皿,时间1015min,超高温杀菌 135-150C和2-8s对牛乳和其它液态食品。优点 :保持食品价值和营养成分。,过滤除菌:原理:介质在有压力时阻隔微生物。适用范围:许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。设备:蔡氏过滤器,滤膜过滤器。优缺点:不破坏培养基成分,只适用少量滤液。需 大量无菌空气以及净化工作台。 注意事项:1、压力适当;2、无菌条件下进行;3、防止渗透现象。,辐射灭菌:原理:紫外线波长在200300nm,具有杀菌作用,以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收;可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。缺点:穿透力不大。距照射物1.2m为宜。应用:无菌室,医院。注意事项:对眼睛和皮肤有刺激作用。射线灭菌:r射线,穿透力强,适用于堆积物品的灭菌。,化学药品灭菌:原理:应用化学制剂破坏细菌代谢机能。杀菌剂如重金属离子;抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。注意:与药品的浓度高低,时间长短,微生物种类以及微生物所处的环境有关。常用化学杀菌剂有:乙醇、醋酸、石碳酸福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等,实验二、微生物的分离、纯化及培养技术分离与纯化:从混杂的微生物
4、群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。为什么要进行纯培养:平板上的单一菌落并不一定保证是一种菌。常用的分离、纯化方法:单细胞挑取法 稀释涂布平板法稀释混合平板法 平板划线法,稀释涂布平板法 : 原理:步骤: 1、倒平板: 牛肉膏蛋白胨培养基,高氏I号培养基,查氏培养基冷却至55-60时,混匀后倒平板,牛肉膏蛋白胨培养基倒4皿,高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。2、制备污水稀释液:10g土样,加入90ml无菌水中,在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中,以此类推,制成不同稀释度。3、涂布:将上述每种培养基平板底面标记稀释度,然后用无菌吸管从最后三种稀释度,即10-4、10-5和10-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上,用玻棒涂布。4、培养:高氏I号和查氏倒置培养于28培养箱中培养3-5days,牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37培养1-2days。5、挑菌落:转至斜面,检查是否一致,保存。,平板划线法:1、倒平板,标记培养基名称,编号和实验日期。2、划线方法 稀释混合平板法 :1、先加菌2、倒平板时注意培养基温度3、混合均匀,微生物培养技术 1、斜面
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