免疫酶组织化学技术
104页1、免疫酶组织化学技术CK阳性肿瘤细胞组织来源(中间丝标志物 ) EMA阳性肿 瘤 的 病 因 和 发 病 机 理 研 究 HBsAg阳性(病毒及癌基因标志物) 肿瘤细胞功能分类B 细 胞 阳 性(淋巴瘤及神经内分泌肿瘤标志 ) 肿瘤癌前病变和早期诊断P53阳性(癌胚抗原或肿瘤相关抗原)肿瘤病理诊断与鉴别诊断HMB45阳性(各种肿瘤特异性抗原) 肿瘤治疗和预后判断PR阳性(性激素受体,癌基因和细胞增殖活性标志) Cer-bB-2Ki-67阳性第一节 基 本 原 理 抗原抗体(特异性)酶标记抗体,通过酶与底物作用生成有色反应物,定位组织或细胞内抗原的一门技术。免疫酶组化 免疫学(抗原抗体反应) 酶细胞化学(底物显色反应)+特异性 敏感性 定位性 可视性PAP法免疫酶组织化学基本组成:抗原 抗体 放大系统 显色系统ABC法免疫酶特点:信号定位准确标本可长期保存阳性标记与病变关系方法简便,易推广第二节 酶 和 底 物一、酶及其特点酶选择标准: 该酶用细胞化学易于被检出 , 能被光镜或电镜观察。 酶反应产物须稳定,不扩散 , 具有良好定位。 酶易于纯化,获得纯制品。 酶与免疫球蛋白结合后,不丧失其
2、活性。酶在PH中性液内较稳定。组织中不应存在与底物作用的内源性酶。符合上述条件:辣根过氧化物酶硷性磷酸酶葡萄糖氧化酶(一)辣根过氧化物酶(HRP) 分子量(40000),不会遮盖抗原的结合部位 稳定,易获得较高纯度酶 具有较高活性及特异性 可溶性佳,生成的产物不扩散 组织中内源性酶较少 可作用于多种底物,产生不同颜色 HRP穿透力强,易进入细胞内(二)硷性磷酸酶(AKP)从小牛肠粘膜或大肠杆菌中提取 组织穿透能力较弱 内源性AKP较高 左旋咪唑具有抑制作用 (三)葡萄糖氧化酶(GOD)底物为葡萄糖,终产物稳定 体内无内源性GOD 分子量大,穿透力较弱 二、底物及其特点酶底物酶底物酶产物(显色)HRP的底物:HRP的底物为低浓度的H2O2,供氢体为胺类及酚类化合物。 HRP显色反应:HRPH2O2 HRPH2O电子供体(氧化型) 电子供体电子供体被氧化后,迅速改变颜色,通过聚合等反应,生成不溶性有色颗粒,并就地原位沉淀。HRP常用的电子供体: 3.3-二氨基联苯胺(DAB)棕色 氨乙基卡巴唑(AEC)红色,易溶于有机溶剂,易扩散,用水溶性封固剂。 4-氯-1-茶酚(4CN)蓝色,易弥散,
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