膜过滤技术在食品饮料微生物检测中的应用
92页1、栗 壮 2016.09膜过滤技术在食品饮料微生物检测中的应用Company presentation2Agenda膜过滤技术介绍膜过滤技术应用膜过滤技术常见问题分析食品饮料微生物检测解决方案膜过滤技术介绍4微生物检验方法微生物检验方法涂布法涂布法薄膜过滤法薄膜过滤法倾注法倾注法4MPN法法平皿平皿法法划线法划线法划线划线法法 适合做单一菌落(适合做单一菌落(Single colonySingle colony)的分离)的分离5涂布平板法涂布平板法 优点优点传统方法快速,简单广泛的选择性琼脂用于不可过滤产品 局限性局限性有限的样品体积不能冲洗掉抑制物质计数不准确倒平板法倒平板法1.0 mL 稀释过的样品大豆酪蛋白营养琼脂融化后&冷却到45oC混匀 优点优点传统方法快速,简单广泛的选择性琼脂用于不可过滤产品 局限性局限性有限的样品体积不能冲洗掉抑制物质无法观察到典型形态注意力不集中视力疲劳将导致观察平皿菌落计数结果偏差10-110-210-3Incubate最大可能数最大可能数法法(MPNMPN法)法)8也称稀释培养计数,制备3个连续稀释级供试液,每一稀释级取3份1mL分别接种至3管液体培
2、养基中,培养后观察是否有微生物生长,根据微生物生长的管数从表中查需氧菌总数的最可能数。 优点优点传统方法广泛的选择性培养基用于不可过滤产品 局限性局限性工作量大多步稀释和操作额外的准备和清洁时间无法计数 (微生物的可能数量)需要附加实验确认总实验时间长 LST薄膜过薄膜过滤滤法法无菌滤杯加样品冲洗将膜片转移到培养基上并培养9 优点优点可将抑菌物质冲洗掉可测试大体积样品统计学意义上更可靠敏感度高,可达1CFU 局限性局限性只适用可过滤样品固体颗粒可能会堵膜3193JEFiltration 过滤Retention 截留Recovery 恢复生长 检测方法选择不当,会造成假阴性和假阳性的检测结果!产品中防腐成分残留,造成假阴性!Improper Rinsing操作过程受到污染,造成假阳性!11根根据样品特性据样品特性选择合适的检测方法选择合适的检测方法12不同检测方不同检测方法法间间的的比较比较平板平板涂涂布布法法平板平板倾注倾注法法滤膜滤膜法法样本量样本量最大约0.2 mL最大约2 mL任意菌落生长菌落生长 情况情况示例示例13涂涂布布法法与与倾注倾注法的菌落生长情况法的菌落生长情况平板表
3、面涂抹法平板倾注法Micrococcus luteus藤黄微球菌 SCD, 30Presentation title in footer | 00 Month 000014平板倾注法薄膜过滤法薄膜过滤薄膜过滤法法与与倾注倾注法的菌落生长情况法的菌落生长情况方法对方法对比:直接接种法比:直接接种法 vs 薄膜过滤法薄膜过滤法15直接接种法直接接种法薄膜过滤法薄膜过滤法样品量样品量样品处理量有限,通常为12ml允许测试大体积样品,1毫升至数升菌落形态菌落形态菌落小,不容易识别膜片上的菌落更容易识别灵敏度灵敏度低灵敏度更敏感,可达:1CFU 抑菌性抑菌性有抑菌问题有效去除样品中抑菌成分工作量工作量每次需要倒大量的平板准备时间少,可提前准备好培养皿菌落识别菌落识别不易观察容易观察,在24小时内即可提供(有/无)信息菌落分离增殖菌落分离增殖接种量少,不能够分离和增殖不连续的细菌菌 落能够分离和增殖不连续的细菌菌落表面冲洗表面冲洗接种后不能够冲洗膜片表面可以冲洗Presentation title in footer | 00 Month 000016MPN法法薄膜过滤法薄膜过滤法样品量样品量样品
4、处理量有限允许测试大体积样品,1毫升至数升精准度精准度半定量,精确度差,得到近似值精确度高,可达:1CFU 工作量工作量每次需要准备大量的试管培养基准备时间少,可提前准备好培养皿适用范围适用范围适用需氧菌总数,一般在没有适宜计数方法时使 用,不适用霉菌计数可检测需氧菌总数、霉菌酵母菌总数方便性方便性操作不便,需对样品做一系列稀释,误差大,重 复性差操作相对方便,重复性好抑菌性抑菌性不能去除抑菌成分,通过稀释减弱抑菌效应膜片表面可以冲洗,有效去除抑菌成分方法对方法对比:比:MPN法法 vs 薄膜过滤法薄膜过滤法膜过滤技术应用食品饮料中的微生物污染18 猪肉感染假单胞菌发篮光 蓝铃冰淇淋感染李斯特杆菌致3人死亡 沙门氏菌污染致28名儿童吃冰淇淋中毒 100多名三亚游客感染诺如病毒,引发急 性胃肠炎 肉毒杆菌事件余震不断 食用冰块没有马桶水干净法规大事件请根据报告内容更新19 新版食品安全法实施 包装饮用水国家标准出台膜过滤技术应用20药品水饮料其他可过滤产品食品应用情况膜过滤技术由于其取样量大、检测灵敏度高等特点正得到越来越多的客户的认可,目前国内知名的食品公司,如可口可乐,百事可乐、达能
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