Bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的作用
4页1、1Bcl-2 基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋 亡中的作用【摘要】 目的:探讨 Bcl-2 基因对阻塞性黄疸大鼠肝细胞损害中细胞凋亡的调控作用。方法:采用胶原酶原位肝灌注法获取对照组大鼠肝细胞及阻塞性黄疸实验组术后 3、7、14、21 d 大鼠的肝细胞,分别用 RT-PCR 检测 Bcl-2 mRNA 的表达。分离对照组及实验组 14 d 组大鼠的肝细胞行原代培养后,使用 100 mol/L 甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用于两组肝细胞 24 h 后,用 FCM 法测定肝细胞的凋亡比率,用 TUNEL 技术进行肝细胞凋亡的原位检测。结果:(1)对照组大鼠肝细胞无Bcl-2 mRNA 表达,实验组术后 7、14、21 d 组大鼠肝细胞均有 Bcl-2 mRNA 表达;(2)GCDC 作用两组大鼠肝细胞后,实验组比对照组肝细胞凋亡明显减少(P 0.001)。结论:在阻塞性黄疸过程中,大鼠肝细胞通过表达 Bcl-2 基因是抑制胆盐致肝细胞的凋亡作用的途径之一。 【关键词】 凋亡 黄疸 阻塞性 基因 Bcl-2 大鼠 WistarRole of Bcl-2 gene in apoptosis of
2、 hepatocytes in rats with obstructive jaundice【ABSTRACT】 Objective: To explore the regulating mechanism of Bcl-2 gene in hepatocyte injury caused by obstructive jaundice in rats by comparing apoptotic rate. Methods: Normal rats and bile duct-ligated 7 d, 14 d, 21 d rats hepatocytes were isolated by in situ collagenase perfusion and primary culture. (1)Bcl-2 mRNA was detected by RT-PCR in all cells; (2)After normal rat and bile duct-ligated 14d rat hepatocytes were added 100 mol/L GCDC and kept f
3、or 24 hours, cells were evaluated by FCM and TUNEL. Results:(1)Normal rat hepatocytes did not express Bcl-2 by RT-PCR technique. Bcl-2 was expressed in 7-,14-,21- day BDL rats.(2)After adding 100 mol/L GCDC and keeping for 24 hours, the apoptosis of bile duct-ligated rat hepatocytes significantly decreased compared with that of normal rat hepatocytes. Conclusions: Bile duct-ligated rat hepatocytes expressed Bcl-2.Hepatocellular expression of Bcl-2 during obstructive jaundice is an adaptive pheno
4、menon to resist 2apoptosis by bile salts.【KEY WORDS】 Hepatocyte apoptosisJaundice, obstructive Genes, Bcl-2Rat, Wastar阻塞性黄疸因胆汁淤积引起胆盐升高,造成肝损害。本研究通过观察正常大鼠及阻塞性黄疸大鼠体外培养肝细胞 Bcl-2 mRNA 的表达情况,研究其与细胞凋亡的关系,探讨胆盐致肝细胞损害的调控机制。 1 材料与方法1.1 实验动物及分组 健康雄性 Wistar 大鼠 50 只,随机分为 5 组,每组 10 只,其中 4 组为实验组,1 组为对照组。全部实验组大鼠均手术游离出胆总管,于肝门部结扎胆总管并切断,远端再予结扎。分别于结扎 3 、7 、14 和 21 d 后处死 1 组。对照组手术不结扎切断胆总管,14 d 处死。1.2 大鼠肝细胞的分离与培养 采用胶原酶原位肝灌注法1获取肝细胞,4%台盼蓝染色判断肝细胞存活率,细胞计数板记数细胞浓度。细胞于合成培养基(RPMI 1640 80 ml,新生小牛血清 20 ml,青霉素 100 U/ml,链霉素 100 g
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