植物组织培养园艺
51页1、1,第二章 植物组织培养实验室和基本技术 2.1 组培实验室及基本设备 2.1.1 组培实验室的组成及其功能 2.1.1.1 准备室(基本操作实验室) 基本功能 常用仪器和设备,2,2.1.1.2 无菌操作室 功能 组成 缓冲室(间): 接种室(间): 无菌操作室的消毒 主要设备 超净工作台 金属器械消毒器,3,2.1.1.3 培养室 功能 主要设备 环境条件,2.1.1.4 温室 功能,4,5,2.1.2 组培实验室的布局 2.1.2.1 布局基本要求 便于隔离,便于操作,便于灭菌和便于观察。 2.1.2.2 基本布局规律 根据实验操作程序排列实验室; 接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域; 灭菌室与接种室相邻; 其他实验室的布局可根据条件,以方便使用为宜。,6,培 养 室,准 备 室,灭菌室,储藏室,接种室,缓冲室,植物组织培养实验室布局示意图,7,2.1.2.3 设计组培实验室时的注意事项 为了减少污染,实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯; 培养室最好设在南面,设大玻璃窗,以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧,其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗; 培养室房
2、间及门要小,而且密闭性要好,最好装移门; 无菌操作室要小,要设缓冲间,也最好装移门,且门要稍大一些。,8,2.1.3 组培实验室的基本设备 2.1.3.1 器皿和器械类 玻璃器皿 器械 镊子类 解剖刀 剪刀 接种针 细菌过滤器,2.1.2.2 仪器设备 无菌操作设备 超净工作台,9,高压蒸汽灭菌器,10,电热烘箱 接种器具消毒器,11,12,培养设备 空调 加湿器和去湿机 定时器 培养架 摇床或旋转床 培养箱,药品贮存和配制仪器设备 冰箱 天平 酸度计 观察分析仪器设备 体视显微镜 普通光学显微镜 倒置显微镜 其它仪器设备 离心机 恒温水浴锅,13,14,2.2 培养基 组培中培养基的重要性: 基本培养基:指只含有维持离体植物细胞基本生命活动所需的营养成分的培养基。通常包括水分、无机营养成分和有机营养成分,不包括激素和天然有机附加物。 完全培养基:指在基本培养基的基础上另外附加激素或天然有机附加物所组成的培养基。,15,2.2.1 培养基的构成 2.2.1.1 水 2.2.1.2 无机盐类 大量元素化合物 微量元素化合物 2.2.1.3 有机营养成分 糖类 维生素类 氨基酸类,16,2
3、.2.1.4 植物生长调节剂 1、生长素类 常用类型:NAA,2,4-D,IBA,IAA 功能 培养基中常用浓度:10-710-5mol/L或 0.110mg/L,2、细胞分裂素类 常用类型:6-BA,KT.TDZ,2-ip 功能 培养基中常用浓度: 10-710-5mol/L或0.110mg/L,17,18,3、组织培养时,植物激素的使用规律 在生长素存在的条件下,细胞分裂素的作用有加强的趋势,但二者在使用上有一定的顺序关系,处理顺序不同,培养物的分化状态也不同。规律如下: 先用生长素处理,后用细胞分裂素处理,有利于细胞分裂,但细胞不容易分化,容易产生多倍体细胞。, 先用细胞分裂素处理,后用生长素处理,细胞分裂也分化。 用生长素和细胞分裂素同时处理,细胞脱分化后分化频率提高。但二者的使用浓度比值可以决定器官分化方向:生长素/细胞分裂素比值高时,有利于根分化,抑制芽形成。反之,有利于芽分化,抑制根形成。比值适中时,促进愈伤组织的形成和生长。,19,20,2.2.1.5 天然有机添加物质 椰汁:CM 100150ml/L 酵母提取液:YE 0.01%0.5% 番茄汁:5% 10% 马铃薯
4、汁:100g/L 200g/L 香蕉泥(汁):150mg/L 200mg/L,2.2.1.6 培养基的pH值 灭菌前pH值调控范围:pH=5.75.8 pH对培养基凝固的影响 pH调节剂 2.2.1.7凝固剂 琼脂: 用量范围:310g/L 影响琼脂凝固的因素 Gelrite:植物凝胶 2.2.1.8 其他添加物 活性炭(AC)、维生素C、抗生素等,21,22,2.2.2 基本培养基的选择 2.2.2.1 基本培养基的类型 高无机盐含量的培养基 代表类型:MS,LS,BL,ER 硝酸钾含量较高的培养基 代表类型:B5,N6,SH 中等无机盐含量的培养基 代表类型:Nitsch,Miller,H 低无机盐含量的培养基 代表类型:White,WS,HE,2.2.2.2 基本培养基的选择 MS培养基 B5培养基 N6培养基 改良的White培养基 WPM培养基 培养基是否适合所培养的植物,必须通过试验进行筛选。,23,24,2.2.3 培养基的配制 母液稀释法 2.2.3.1 培养基母液的配制和保存 1、基本培养基母液的配制 单配法 混配法 按照避免难溶性沉淀形成的原则和物质种类的不同,将基
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