生物药物分析实验课讲义
17页1、实验 胃蛋白酶片的测定实验目的:掌握以胃蛋白酶测定法测定胃蛋白酶片中胃蛋白酶的效价。实验原理:精密称取本品适量,加盐酸溶液制成每 1mL 中约含 0.2-0.4 个单位的溶液,照胃蛋白酶测定法,测定胃蛋白酶的效价。实验部分:1 .材料与设备血红蛋白试液、三氟醋酸溶液、盐酸溶液紫外可见分光光度计2 .操作步骤1) . 供试品溶液的制备取本品 5 片,置研钵中,加盐酸溶液少许,研磨均匀,移至250mL 量瓶中,加上述盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,精密称取适量,用上述盐酸溶液稀释制成每1mL 中约含 0.2-0.4个单位的溶液,作为供试品溶液。 2) . 对照品溶液的制备精密称取酪氨酸对照品适量,加盐酸溶液稀释制成每1mL 中约含 0.5mg 的溶液,作为对照品溶液。3)供试品的测定取大小相同的试管6 支,其中 3 支精密加入对照品溶液1mL ,另 3 支精密加入供试品溶液 1mL ,置 37 0.5水浴中,保温5 分钟,精密加入预热至37 0.5的血红蛋白试液 5mL ,摇匀,并准确计时,在37 0.5水浴中反应10 分钟,立即精密加入5%三氟醋酸溶液 5mL ,摇匀,滤过,取续滤液备用。另取
2、试管2 支,各精密加入血红蛋白试液5mL ,置 37 0.5水浴中保温10 分钟,再精密加入 5%三氟醋酸溶液5mL ,其中一支加供试品溶液 1mL ,另一支加上述盐酸溶液1mL ,摇匀,滤过,取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照, 照紫外-可见分光光度法,在 275nm 的波长处测定吸光度, 按下列公式计算,即得。注意事项:思考题:实验 三磷酸腺苷二钠片总核苷酸含量测定实验目的:掌握以胃蛋白酶测定法测定胃蛋白酶片中胃蛋白酶的效价。实验原理:精密称取本品适量,加盐酸溶液制成每1mL 中约含 0.2-0.4 个单位的溶液,照胃蛋白酶测定法,测定胃蛋白酶的效价。实验部分:1 .材料与设备血红蛋白试液、三氟醋酸溶液、盐酸溶液紫外可见分光光度计2 .操作步骤1) . 供试品溶液的制备取本品 5 片,置研钵中,加盐酸溶液少许,研磨均匀,移至250mL 量瓶中,加上述盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,精密称取适量,用上述盐酸溶液稀释制成每1mL 中约含 0.2-0.4个单位的溶液,作为供试品溶液。 2) . 对照品溶液的制备精密称取酪氨酸对照品适量,加盐酸溶液稀释制成每1mL 中约含 0.5mg 的
3、溶液,作为对照品溶液。3)供试品的测定取大小相同的试管6 支,其中 3 支精密加入对照品溶液1mL ,另 3 支精密加入供试品溶液 1mL ,置37 0.5水浴中,保温5 分钟,精密加入预热至37 0.5的血红蛋白试液 5mL ,摇匀,并准确计时,在37 0.5水浴中反应10 分钟,立即精密加入5%三氟醋酸溶液 5mL ,摇匀,滤过,取续滤液备用。另取试管2 支,各精密加入血红蛋白试液5mL ,置 37 0.5水浴中保温10 分钟,再精密加入 5%三氟醋酸溶液5mL ,其中一支加供试品溶液 1mL ,另一支加上述盐酸溶液1mL ,摇匀,滤过,取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照, 照紫外-可见分光光度法,在 275nm 的波长处测定吸光度, 按下列公式计算,即得。注意事项:思考题:实验七 药物的一般杂质检查一、实验目的:1. 掌握药物的一般杂质检查原理与实验方法。2. 熟悉一般杂质检查项目与意义。二、实验原理:药物的一般杂质: 是指在自然界中分布较广泛, 在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质,如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、铁盐、重金属等。1. 比色法(colorim
4、etry)是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比浊法是指测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法,本法主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质。a、酸碱度检查:是用药典规定的方法对药物中的酸度、碱度及酸碱度等酸碱性杂质进行检查。 检查时应以新沸并放冷至室温的水为溶剂。 不溶于水的药物, 可用中性乙醇等有机溶剂溶解。常用的方法有酸碱滴定法,指示剂法以及pH直测定法。b、 氯化物检查法: 氯化物在硝酸溶液中与硝酸银作用, 生成氯化银沉淀而显白色浑浊,与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比较,测定供试品中氯化物的限量。反应离子方程式:Cl-+ Ag + f AgCl J (白色)c、铁盐检查法:三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氟酸盐生成红色可溶性的硫氧酸铁络 离子,与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。反应离子方程式:Fe3+ + 3SCN- f Fe ( SCN 3 (红棕色)。2.限量计算:杂质限量=(V标准XC标7隹)/W小) X 100%式中V标准为标准液体积,C标 准为标准液浓度,W羊为样品取样量。三、实验内容
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