细菌形态理化鉴定
21页1、细菌形态理化鉴定1形态学特性22生理生化特性实验21、尿素酶(Urease)实验22、氧化酶(Oxidase)实验33、过氧化氢酶的测定34、甲基红(Methyl Red)实验45、V-P实验46、含碳/氮化合物的运用47、葡萄糖的氧化发酵实验(O-F实验)58、糖或醇类发酵实验69、硝酸盐(Nitrate)还原实验710、靛基质(Imdole)实验(吲哚实验)711、三糖铁(TSI)琼脂实验812、氨基酸脱羧酶的测定813、硫化氢(H2S)实验814、柠檬酸盐或丙酸盐的运用915、运用丙二酸盐实验916、葡萄糖酸盐的氧化918、-半乳糖苷酶(ONPG)的测定1019、耐盐性实验1020、卵磷脂酶的测定1021、石蕊牛奶的反映1122、酪素水解实验(酪蛋白水解)1123、酪氨酸水解1224、苯丙氨酸脱氨实验1225、产糊精结晶实验1226、从甘油产生二羟基丙酮1227、厌氧硝酸盐产气1228、马尿酸盐水解实验1329、对叠氮化钠的抗性1330、氰化钾实验1331、对溶菌酶抗性的测定1332、在pH5.7营养肉汤上的生长1333、需氧性试样1434、明胶(Gelatin)液化实验1435
2、、淀粉水解实验1436、生长温度的测定1537、形成芽孢的培养基1538、O/129的敏感性实验151形态学特性1.1菌落形态培养到24h后观测平板上单菌落形状、大小、颜色与突起特性。1.2细胞形态光学显微镜观测菌体的形态、大小、运动性等。1.3革兰氏染色取无油迹的干净载玻片,滴上一滴无菌蒸馏水,用接种环挑取少量菌苔,于水滴边沿轻轻涂几下。自然风干,在火焰上通过几次,固定涂片。滴加结晶紫液,染1min,用水冲净结晶紫液。滴加碘液冲净残水,并覆盖约lmin。用水冲去碘液,将片上的水甩干。滴加95%乙醇液脱色约20-30s,并立即用水冲净乙醇。用番红液染l-2min。用水洗净番红,风干,用显微镜油镜观测涂片。1.4芽孢染色取培养24h左右的菌体涂片、干燥、固定。滴加3-5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿使沸腾,切忌使染液蒸干,必要时可添加少量染液。加热时间从冒蒸汽时开始计时约4-5min。倾去染液,待载玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。用蕃红水溶液复染lmin,水洗。待干燥后,置油镜观测,芽孢呈绿色,菌体呈红色。1.5荚膜染色按常规取菌涂片,空
3、气中自然干燥。用1%的结晶紫水溶液染色2min。以20%的硫酸铜水溶液冲洗,用吸水纸吸干残液。干后用油镜观测。菌体染成深紫色,菌体周边的荚膜呈淡紫色。2生理生化特性实验1、尿素酶(Urease)实验有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子的氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶,由于不管底物尿素与否存在,细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。实验措施:挑取1824h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中,摇均,于361培养10,60和120min,分别观测成果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面,不要达到底部,留底部作变色对照。培养2,4和24h分别观测成果,如阴性应继续培养至4天,作最后鉴定,变为粉红色为阳性。培养基配制措施:蛋白胨:1 g ;NaCl:5 g ;KH2PO4 :2 g ;葡萄糖 1 g ;琼脂:15 g;酚红:0.012g;蒸馏水 1000 ml。除酚红外,溶解上述成分,并调节PH为6.86.9,然后加入酚红批示剂,使培养基呈橙黄色,分装,115灭菌20min。待培养基冷至50左右,加入预先过滤除菌的20%尿素水溶液,使其终浓度为2%。实验措施: 挑取
4、1824h待试菌培养物大量穿刺接种于琼脂斜面,不要达到底部,培养14d观测成果,如为阴性应继续培养一下,作最后鉴定,变为粉红色为阳性。2、氧化酶(Oxidase)实验氧化酶亦即细胞色素氧化酶,为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶,氧化酶先使细胞色素C氧化,然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,产生颜色反映。实验措施:在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂12滴,阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色深紫色,Ewing氏改善试剂呈蓝色。阴性者无颜色变化。应在数分钟内鉴定实验成果。注意事项:(1) 盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化,溶液应装在棕色瓶中,并在冰箱内保存,如溶液变为红褐色,即不适宜使用。(2) 铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反映,若用它来挑取菌苔,会浮现假阳性,故必须用白金丝或玻璃棒(或牙签)来挑取菌苔。(3) 在滤纸上滴加试剂,以刚刚打湿滤纸为宜,如滤纸过湿,会防碍空气与菌苔接触,从而延长了反映时间,导致假阴性。3、过氧化氢酶的测定过氧化氢酶又称接触酶,能催化过氧化氢分解水和氧。1 试剂:310过氧化氢(H2O2)2 菌种培养:将测试菌种接种于合适的培养基斜面上,
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