白茶体外抗乙型肝炎病毒的研究.doc

1、白茶提取物体外抗乙型肝炎病毒的研究目录摘要1Abstract11 材料与方法21.1 试验材料21.2 试验试剂21.2.1 试验试剂和药品 21.2.2 主要试剂的配制 31.3 试验仪器 41.3.1 仪器设备41.3.2 细胞培养物品的清洗及灭菌消毒 41.4 试验方法41.4.1 HepG2.2.15细胞的培养41.4.2 WTE的细胞毒性试验（MTT法）51.4.3 WTE对HBV抗原抑制的体外试验62 结果与分析72.1 HepG 2.2.15细胞形态观察 72.2 WTE的细胞毒性试验（MTT法）72.3 WTE对HBV抗原抑制的体外试验83 讨论93.1 WTE对细胞生长的低毒性作用 93.2 WTE的抑制HBsAg、HBeAg表达的作用10参考文献 10附件 12致谢 14主要英汉缩略对照表英文缩写英文全称中文全称WTEWhite tea extract白茶提取物HBVHepatitis B Virus乙型肝炎病毒DMEMDulbeccos modification of Eagles medium Dulbecco细胞培养基DMSODimethyl sulfoxid

2、e二甲基亚砜ELISAenzyme linked immunosorbent assay酶联免疫吸附剂测定FBSFetal Bovine Serum胎牛血清PBSPhosphate Buffered Solution磷酸盐缓冲液HBsAgHepatitis B Surface Antigen乙型肝炎表面抗原HBeAgHepatitis B e-Antigen乙型肝炎E抗原HepG2.2.15人肝癌细胞系Hepes2-4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinylethanesulfonic acid 羟乙基哌嗪乙硫磺酸MTT3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐（噻唑兰）G418Geneticin 418筛选抗生素3TCLamivudine拉米夫定PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应ODOptical Density光密度值rpmround per mineter每分钟离心转数TC50The large

3、st Non-toxic concententration最大无毒浓度福建农林大学本科毕业论文摘要：本研究采用HepG2.2.15细胞模型，通过体外试验来研究白茶提取物（WTE）的抗乙型肝炎病毒功能，为进一步开发利用白茶资源提供理论依据，其研究结果表明：1.WTE抑制50%细胞生长的浓度（TC50）为665.5g/mL，高于其抑制病毒的200g/mL的浓度，提示WTE对HepG2.2.15细胞的毒性较低，适合开发成药物或保健品。2.WTE在200g/mL浓度时对HBsAg表达抑制率达到40.70%，对HBeAg表达抑制率达到39.94%。结果提示WTE在体外实验中能够较有效地抑制HepG2.2.15细胞中HBsAg、HBeAg的分泌，从而抑制病毒的复制及表达。关键词：白茶提取物；乙型肝炎病毒；HepG2.2.15细胞；细胞毒性试验；体外试验Abstract：This research used the vitro experiments to study the white tea extract (WTE) of anti-hepatitis B virus functions, b

4、ased on HepG2.2.15 cell models, in order to provide a theoretical basis for further development and utilization of the white tea resourses. The major results are as follows:1.WTE was a little cellulotoxic, its TC50 towards HepG2.2.15 cells was only 665.5g/mL,higher than the concentration of inhibiting virus (200g/mL);it pointed out that WTE had a low toxicity to HepG2.2.15 cells, which can be suitable for exploiting drugs and health products.2.When WTE concentration reached 200g/mL, the inhibiti

5、on ratio of HBsAg expression by WTE reached 40.70%, the inhibition ratio of HBeAg expression by WTE reached 39.94% .The results displayed that WTE could suppress HBsAg and HBeAg secretion efficiently in HepG2.2.15 cells in vitro experiments, in order to suppress the replication and expression of HBV.Key words: WTE; HBV; HepG2.2.15 cell; cytotoxicity experiment; vitro experiment白茶是我国的特种茶，六大茶类中的一颗璀璨明珠，我国是世界唯一的产地。“发如雪，似白眉，上下交错，素裹银装，熠熠生辉。美哉！雅哉！”这说的便是白茶1。因制法独特，仅有萎凋和干燥两道工序，成茶外表满披白毫，呈白色故称“白茶”。“神农尝百草，日遇

6、七十二毒，得茶而解”，2000多年前神农本草经的一句记载，奠定了茶在药用方面的地位2。现代的静态生物化学通过对茶的研究表明，茶叶中共有700多种的内含物质3，其中咖啡碱约占茶叶总干物质的20%-30%，还有糖类、水、维生素、酶、矿物质等多种成分2。几十年来，国内外大量的研究表明，茶叶含有人体所必需的化学成分，含有对某些疾病具有显著疗效的物质，茶叶具有抗癌、抗衰老、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血压、降血脂、抗菌、抗HIV、防蛀牙、延缓衰老等作用4,5,6,7。白茶同其他茶类一样具有一定的保健药用价值，而且由于其独特的加工工艺和内含物变化等不同，其三降三抗的效果优于其他茶类8。病毒性乙型肝炎（乙肝）是由乙型肝炎病毒（乙肝病毒，HBV）引起的传染病9。乙型肝炎病毒（HBV）具有明显的种属特异性，是目前所知道的最小的嗜肝DNA病毒，在易感染宿主细胞内易于附着、侵入和复制，并可长时间持续感染10。肝脏是HBV感染和复制的主要场所，故而肝细胞是HBV感染模型的首选细胞。目前用于HBV培养的细胞主要有人肝癌细胞系和HBV感染原代培养的肝细胞系两个模型11。人肝癌细胞主要有三个不同的细胞系建株：PLC/

7、CRF/5细胞系，HepG2细胞系，HepG2.2.15细胞系12。因HepG2.2.15细胞系可较长时间的维持HBV病毒的复制，故成为应用最广泛的乙型肝炎病毒细胞模型，常用于抗HBV感染基因治疗的研究13,14。慢性乙型肝炎是当前困扰人类健康最严重的问题之一，全球目前有4亿多慢性乙型肝炎病毒感染者，其中有超过75%分布在亚太地区，中国是乙型肝炎高发区，超过6亿人感染过乙肝病毒，慢性乙肝病毒携带者达10%以上15。慢性乙型肝炎的预后不良，将慢慢发展为肝硬化，最终可能发展为肝癌。乙型肝炎是导致急慢性肝炎、肝硬化、肝纤维化、肝癌的主要病因，对人类健康危害巨大，因此，寻找高效低毒的抗HBV药物已刻不容缓。长期以来，许多科学家和临床医学者对治疗慢性乙型肝炎的研究进行了不懈的努力，但仍然还没有一种治疗乙肝的特效药物16,17。近年来国内外许多研究已经证实了茶提取物的抗病毒作用。生命世界2006年第3期摘录：天天喝茶可提高免疫力。文章中指出，哈佛大学的研究发现茶饮料中含有L-茶氨酸，当它进入人体被肝脏分解后，会转换成乙胺，继而激活机体T细胞，增强人体的免疫力19。白茶中的氨基酸含量高于普通茶一倍，富含人体所需的13种氨基酸18。已有文献曾报道白茶有消炎、杀菌、抗病毒及抗氧化、抗突变的活性物质；白茶中茶氨酸具有很强的提高机体免疫力的功能，可使机体内免疫细胞干扰素分泌量提高5倍，茶氨酸在人体肝脏内分解为乙胺，调动名为“伽马-德耳塔T形细胞”作出抵御外界侵害的反应，继而由T形细胞促进干扰素的分泌，形成人体抵御外界感染的“化学防线”，极大地提高机体抵御外界侵害的能力19。本试验采用HepG2.2.15细胞模型，通过体外试验，来研究白茶提取物（WTE）的抗乙型肝炎病毒功能。1 材料与方法1.1 试验材料HepG2.2.15细胞株1.2 试验试剂1.2.1 试验试剂和药品DMEM高糖培养基（含L-Gln）：北京索莱宝科技有限公司；胰蛋白酶：北京索莱宝科技有限公司；胎牛血清FBS：美国Hyclone公司；二甲亚砜（DMSO）培养试剂：北京索莱宝科技有限公司；青链霉素混合液：南京凯基生物科技发展有限公司；PBS缓冲液：北京索莱宝科技有限公司；G418：上海生工生物工程有限公司；D-Hank，s：北京索莱宝科技有限公司；Hepes：北京索莱宝科技有限公司；MTT噻唑兰

《白茶体外抗乙型肝炎病毒的研究.doc》由会员M****1分享，可在线阅读，更多相关《白茶体外抗乙型肝炎病毒的研究.doc》请在金锄头文库上搜索。