PE液相色谱现场培训教材-chromera
65页1、PerkinElmer4For tin BetterPerkinElmer公司液相色谱现场培训教材i 页PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材Flexar LC-Chromera美国珀金埃尔默仪器(上海)有限公司PerkinElmer4FortAiBEttETPerkinElmer公司液相色谱现场培训教材第一部分:液相色谱基本工作原理及基本知识第二部分:液相色谱仪标准化操作流程SOP第三部分:液相色谱软件(Chromera)操作第四部分:液相常见问题第一部分:液相色谱基本工作原理及基本知识液相色谱工作原理:是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作 用力而达到相互分离,从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方 法结合,实现混合物中各组分的分离与检测。两相中有一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase),即色谱柱;有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase),流动相 又叫洗脱剂或溶剂。液相色谱仪实际照片如下:图1-1常见配置Flexar LC高效液相色谱仪外观#
2、 |页Perkin Elmer4PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材_/Aaj# |页废液图1-2高效液相色谱仪系统示意图样品组分分离示意图RE6POZ6EIsolventTIME图1-3样品组分分离示意图Perkin Elmer4PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材图1-4 Flexar LC色谱泵结构示意图1 .液相色谱在各个行业的应用在医药行业:药物中有效成分的含量、相关物质分析、药代分析、药物中间体的分析等;在环境保护工作中:可用来监测土壤,大气和水的质量;在食品工业中:可用于各种营养成分、非法添加剂、兽药、农药等的监控分析;在农业上可用来监测农作物中残留的农药;在石化上可用于各种添加剂、高聚物分子量等测定;生命科学上用于氨基酸、多肽、蛋白质及核酸等的分析;在公安用于鉴别药物中毒或毒品类型.2 .液相色谱的各个组成部分 由以下五大系统组成:高压色谱泵、进样器、色谱柱、柱温箱、检测记录系统。组分能否分开,关键在于色谱柱;色谱泵以恒定流速驱动流动相进入色谱柱从而保证了色 谱分离的过程,所以色谱柱和色谱泵是液相色谱仪的核心。2.1 部分:色谱泵专利的设计一溶剂自动
3、补偿Flexar系列泵是目前世界上唯一能自动进行溶剂压缩性补偿的传输泵,能自动记录 并计量在混合过程中由于溶剂体积收缩而出 现的任何量的变化。当溶剂压缩性改变时, 系统将立即发生作用并自动予以调整。专利 的设计使得每次泵冲程中的任何溶剂混合都 能进行自动溶剂补偿,因此,Flexar系列泵 混合流动相和人工预混合所得出的分析结果 基本一致。独特的设川双柱塞正压吸入式恒流泵,使吸液过程在正 压下进行,从而避免负压吸入空气的可能 性,泵内不易产生气泡。最优的耐压性能全流速范围010mL/min,均可耐压至 6100psi。# |页PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材Perkin Elmer4For tht Better2.2部分:进样器分手动进样器和自动进样器两种图1-5 Flexar自动进样器外观(左)及内部图图1-6六通阀工作示意图图1-6手动进样器六通阀横剖面图# |页Perkin Elmer4FurtAiBEttET手动进样器使用注意事项:手柄不能停留在 Load和Inject中途!否则会暂时堵住了流路, 流路中压力骤增,再转到进样位,过高的压力在柱头上引起损坏,所以应尽快
4、转动阀。在 HPLC系统中使用平头注射器针头外侧紧贴进样器密封 管内侧,密封性能好,不漏液,不 引入空气;也防止了针头刺坏密封组件及定子。过滤样品溶液,防止微粒阻塞进样阀和减 少对进样阀的磨损。每次结束后应冲洗进样器,通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流 动相冲洗,在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗;进样前,用无纤维纸擦净注射器针头 的外侧。2.3 部分:色谱柱是液相色谱分离的核心,也是液相色谱系统中 最常用的消耗品之一。在使用色谱柱之前,一定要先仔细阅读色谱柱的说明书(不同的色谱柱,使用 要求差距很 大)!不当的使用会 严重缩短色谱柱的寿命!任何色谱柱都有液体流动 方向,不能反用!最 常用的BrownLeeC& C18反相色谱柱通常使用要求:流动相的pH范围:2.57.5;使用 温度:80c以下;操作压力:小于4000psi;保存溶剂:100%甲醇。表1-1色谱柱直径与最佳流速关系色谱柱直径最佳流速1.0mm50uL/min2.1mm200uL/min3.2mm500uL/min4.6mm1.0mL/min图1-7 BrownLee色谱柱的实物图注意:图中色谱柱 方向的箭头
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