蒋玲丽-临床PCR实验室常见问题及整改措施 上海市临床检验中心

临床PCR实验室常见问题分析及整改措施上海市临床检验中心 蒋玲丽2019.3.25人员资质督察内容存在问题整改措施1.负责人应至少具有中级专业技术职称、1.未取得上岗证的 1.及时参加培训医学检验或相关专业背景。有从事分子诊断工作的经历。2.操作人员应具备相关资质并经过有资质的培训机构培训合格取得上岗证后方可上岗。至少具有 2 名本单位在职检验/检查人员。人员独立操作；取得上岗证；2.病人报告单上的 2.规定报告审核检测人员和审核人 操作规程。员与实际不一致；3.试剂公司人员参与检测。3.签发分子病理报告的医师应至少具有中级病理学专业技术职务任职资格，并有从事分子病理工作的经历。至少1名。4.签发分子遗传报告的医师应至少具有中级遗传学专业技术职务任职资格，并有从事分子遗传工作的经历。至少1名。2人员能力评估督察内容存在问题整改措施1.应每年评估员工 1.缺培训计划或 1.制定培训制度，每年制定针对性培训的工作能力。对新进员工在最初 6 个月内应至少进行 2次能力评审，保存评估记录。针对性计划。计划，培训并记录。2.培训形式可以多样：讲座、自学、观看示例、现场检测。3.效果评估形式：口头提问、笔试、现场操作演示、合格证、培训小结。2.缺培训记录或效果评估记录。3.缺新进人员岗前培训记录。2.当职责变更时，或离岗 6 个月以上再上岗时，或政策、程序、技术有变更时，应对员工进行再培训和再评估，合格后才可继续上岗，并记录。4.制定员工能力评审内容和方法,定期评审员工的工作能力，并保存胜任的证据：直接观察常规工作过程和程序、直接观察设备维护和功能检查、监控检验结果的记录和报告过程、核查工作记录、评估解决问题的技能、检验特定样品（留样等）。4.再上岗缺再培训和再评估记录。5.缺员工能力评审记录。3人员管理督察内容存在问题整改措施应建立全部人员相 1.实验室技术人员档案 实验室应分册建立技术关的教育背景、专 内容过于简单：只有学 人员技术档案，档案至业资格、培训、经 历、职称、PCR上岗证 少应包括以下内容：历及能力记录档案。书复印件。教育和专业资质、证书或执照的复印件、以前的工作经历、岗位描述、新员工入岗前介绍、岗位培训、能力评审等资料，并定期更新。2.未及时更新。4设施和环境条件督察内容存在问题整改措施应实施安全风险评估，有些临床实验室没有限制措施，安装门禁或贴标识加以限如果设置了不同的控 可以随意出入。制区域，应制定针对性的防护措施及合适的警告。制和控制；非检测人员进出登记。5设施和环境条件督察内容存在问题整改措施1.涉及基因扩增检验的 缓冲间大门敞开；部分缓 1.实验时随手关门冲间相通；物品交叉使用实验室分区。2.开展下一代测序2.缓冲间相同的实验室应封锁通道（NGS）技术的实验室设置遵循“工作有序、互不干扰、防止污染”的基本原则。3.开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断的实验室，标本制备区不能与其他项目的标本制备区共用。3.各区物品可粘贴区域标识。注明科研未根据项目相应增加区域 根据使用技术的要求相应增（如杂交法和芯片法等；加区域新项目如NIPT、药物）试剂准备区形同虚设（无 试剂分装应在试剂准备区操作移液器等）未安装冲眼器或不能正常 II区安装冲眼器并保证正常4.分子病理实验室应设置独立的标本前处理区，包括切片区和脱蜡区。出水移动紫外车缺或已坏未及 各实验区配备移动紫外车并时更换 保证正常使用状态使用状态67实验时不关门8增加项目后增加区域9NIPT项目增加区域10样本污染？生物安全？11储存设施督察内容存在问题整改措施用以保存临床样品和 1.冰箱温度记录无范围或范围 1.根据试剂储存要求设置范围。试剂的设施应设置目 设置不合实际。标温度和允许范围，并记录。实验室应有温度失控时的处理措施并记录。2.未真实记录或记录不正确。2.根据温度计显示温度真实记录。超过范围及时处理。12冰箱温度范围不合适13冰箱温度记录依据不合适；无范围。14不能满足试剂储存15设施维护和环境条件督察内容存在问题整改措施不同的实验区域 1.清洁用具混用，无标识。1.各区清洁用具做好标识。应当有其各自的 2.无相应的消毒记录。2.配备相应的消毒用品（消毒清洁用具以防止 3.有记录无相应的消毒用品。片、酒精等）。消毒后做好记交叉污染。工作结束后应立即对工作区进行清洁，必要时进行消毒及去污染。录。16设施维护和环境条件督察内容存在问题整改措施应依据所用分析 1.无温湿度范围。设备和实验过程 2.未实时记录。的要求，制定环设计合适的表格并记录境温湿度控制要求并记录。应有温湿度失控时的处理措施并记录。17温度25湿度50%无温湿度范围18设施维护和环境条件督察内容存在问题整改措施分子检验各工作区域应有明确的 实验室检验流 1.文件规定流向要求。标记。进入基因扩增实验室各工 程设计满足单 2.实际操作按规定操作。作区应按照单一方向进行，即试 一方向要求但剂贮存和准备区样品制备区 实际操作未满扩增区扩增产物分析区。不同 足要求。的工作区域宜使用不同的工作服（如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不应将工作服带出。19设备管理应保存主要设备的档案，档案内容应包括：设备标识、型号、序号或其它唯一性识别、到货日期和投入运行日期、目前放置地点、接收时的状态、仪器使用说明书或其存放处、证实设备可以使用的设备验证报告、校准和/或检定报告、维护、损坏、故障或维修的记录。20仪器名称制造商名称设备型号出厂编号实验室设备编号接受日期接收状态启用日期目前放置地点本次校准日期校准单位下次校准日期迄今所进行的维护今后维护计划备注建议仪器接收时建立档案21设备督察内容存在问题整改措施从事RNA检测，宜配备70的冷 1.标本制备区未使 根据项目要求选冻设备。需要时，配备高速冷冻离 用含滤芯吸头。用设备耗材，做心机。标本制备区使用的一次性加样器吸头应带有滤芯。PCR试验用容器应可密闭，不同工作区域内的设备、物品不能混用。组织标本前处理区的设备通常应包括切片机、裱片机、切片刀、电热恒温箱、脱蜡缸、水化缸及HE染色缸等。好设备区域标识。2.采用有粉手套。3.部分可移动小设备不同区域混用。4.RNA检测项目未配备冷冻离心机。222324科研仪器明确标识25仪器明确标识状态26设备校准和计量溯源督察内容存在问题整改措施实验室应建立设备的校准程 1.缺校准程序。1.根据仪器的实际使用要序，相应程序中至少应包括 或缺校准详细 求，制定实际使用量程的需校准的设备、校准单位、内容。检定或校准计划，并写入校准周期、校准参数、校准参数符合相关检验目的和要求等内容。需内部比对、校准的辅助设备，实验室宜根据国家计量部门或生产厂商的规定制定比对或内部校准操作规程和要求。SOP中。2.缺年度校准计划。2.制定内部比对操作规程，并可实施。包括比对结果的判读等。3.缺内部比对操作规程。3.根据程序每年制定校准计划。27设备校准和计量溯源（外部校准）督察内容存在问题整改措施应按国家法规要求对强检设 1.仪器投入使用前未进行校 1.校准SOP中制定仪器校准参数、校准周期、判断标准备进行检定。准或未定期校准或部分未校应定期对测序仪、基因扩增仪、杂交仪、加样器、微量分光光度计、温度计、恒温设备、离心机和生物安全柜等进行校准。有合格的校准报告，并对校准参数实施评估。当校准给出一组修正因子时，应确保之前的校准因子得到正确更新。2.校准未覆盖检测量程（移液器、恒温金属浴）2.实验室检测人员提出校准要求3.校准不符合要求设备仍使用3.实验室审核校准报告4.校准报告中数据错误未发4.尽量提供原始数据，尤其是有些厂家校准或检定的仪器。现5.未引用校准因子（例温度计、恒温金属浴）6.缺原始记录（扩增仪）28注1：测序仪校准参数宜至少包括：缓冲液液路、光路、反应温度。注2：扩增仪校准参数宜至少应包括：温度示值误差、温度均匀度、平均升温速率、平均降温速率、样本示值误差和样本线性，技术性能指标应满足JJF1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范的要求。注3：高速冷冻离心机校准参数宜包括：转速和温度（适用时）。注4：恒温金属浴的校准宜包括：温度示值误差和温度均匀度，并覆盖常用的检测温度。注5：移液器的检定应包括：容量允许误差和测量重复性，计量性能要求应符合JJG646-2006移液器检定规程的规定。29如何判断符合不符合！？30容量允许误差（%）容量允许误差（%）标称容量 检定点（l）（l）标称容量 检定点（l）（l）重复性（%）重复性（%）0.10.5120.020.012.020.012.012.020.012.08.010.010.06.0212.08.04.012.08.04.08.04.03.08.04.03.06.04.02.06.04.02.04.02.01.54.02.01.5201020210.2110.06.0254050102552526.00.5110.06.02040554.0112.08.06.054.0255010108.04.031容量允许误差（%）容量允许误差（%）标称容 检定点量（l）（l）标称容量 检定点（l）（l）重复性（%）重复性（%）10508.03.02.04.02.01.54.02.01.53.02.01.54.01.51.02.01.01.02.01.01.01.51.01.01005002.01.01.01.51.00.51.00.50.61.00.60.61.00.50.51.50.50.20.50.20.20.50.20.210001002002503001002010002501002002525005000125025005001252505025005000100050001000015030010000JJG646-2006检定规程有允许范围的要求，应写入SOP！32金属浴校准报告33金属浴校准报告34移液器校准在100 l，500 l和1000 l三个校准点的准确度和精确度完全一致！校准数据不真实！35一个医院两次的校准报告！校准数据不真实！36不符合校准报告未经分析，并仍在使用。37授权了经销，但未授权校准资质。38设备校准和计量溯源（内部比对）督察内容存在问题整改措施分析设备和 1.无相应的内部比对操作规 1.完善操作规程2.保留用于比对的仪器的校准报告并保证校准合格，并在比对时引入校准因子。3.用于比对的仪器应覆盖需要比对仪器的量程。4.内部比对记录信息最少应包括：比对设备编号、用于比对设备的校准信息（校准日期、校准有效期、校准单位）、比对时间、标准设备实测数据、比对设备实测数据、判断标准、结论、比对人、比对日期、科室负责人。辅助设备的内部校准应符合 CNAS-CL 31内部校准要程2.用于比对的仪器未校准（移液器-无相应校准过的天平；温度计-无相应校准过的温度计）求。3.用于比对器具量程不适合4.无记录、记录信息不全或记录不真实5.比对时未引入比对器具的校准因子。39用于比对的温度计量程不合适！40仪器编号？人员？标准？41仪器编号重复？记录可靠性？42用于比对的温度计在比对-20时应该引入校准因子！43用于内部温度计校准44比对设备编号比对环境记录详细的比对记录原始信息记录比对结论比对日期、比对人员、科室负责人等45设备维护与维修督察内容存在问题整改措施设备故障后，应首先分析故障原 1.缺部分仪器 根据仪器说明书制定每台仪器因，如果设备故障可能影响了方 的保养计划 的保养计划，并写入SOP中，法学性能，故障修复后，可通过 2.缺维修后验 并编入使用记录表中。合适的方式进行相关检测验证 证。（a）可校准的项目实施校准验证，必要时，实施校准；（b）质控物检验，其检验结果在允许范围内；（c）与其他仪器或方法比对。（d）以前检验过的样品再检验。留样再测判断标准：按照项目稳定性要求选取最长期限样品。定性项目：选择阴性和弱阳性样品各1份，测量结果与预期结果一致。定量项目：选取5 份样品，覆盖测量区间，至少 4 份样品测量结果偏倚7.5%。46试剂耗材管理督察内容存在