血清4-羟基壬烯醛、人软骨糖蛋白-39、肾损伤分子-1诊断早期糖尿病肾病的临床意义研究-1.docx

血清4-羟基壬烯醛、人软骨糖蛋白-39、肾损伤分子-1诊断早期糖尿病肾病的临床意义研究血清4-羟基壬烯醛、人软骨糖蛋白-39、肾损伤分子-1诊断早期糖尿病肾病的临床意义研究 余世纪 苏晓清 王桂良 [摘要]目的 探討血清4-羟基壬烯醛（4-HNE）、人软骨糖蛋白-39（YKL-40）、肾损伤分子-1（KIM-1）在糖尿病肾病（DN）早期肾损伤中的临床价值，并分析4-HNE、YKL-40、KIM-1与肾损伤指标、血糖水平、血脂水平的相关性方法 选取20XX年1～7月萍乡市人民医院内分泌科收治的89例2型糖尿病（T2DM）患者，根据24 h尿蛋白排泄率（UAER）结果分为正常蛋白尿组/单纯糖尿病组（NA组）、微量蛋白尿组（MI组）和大量蛋白尿组（MA组）另选萍乡市人民医院体检科的53例健康体检者作为健康对照组（NC组）采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组血清中的4-HNE、YKL-40、KIM-1浓度结果 MA组的血清4-HNE、YKL-40、KIM-1高于MI组，差异有统计学意义（P [关键词]糖尿病肾病;尿白蛋白;脂质过氧化;氧化应激;生物标志物 [Abstract] Objective To investigate the clinical value of serum 4-hydroxynonenal （4-HNE）， serum human chondroglycoprotein-39 （YKL-40） and kidney injury molecule 1 （KIM-1） in early renal injury of diabetic nephropathy （DN）， and to analyze the correlation of 4-HNE， YKL-40 and KIM-1 with renal injury index， blood glucose and lipid level. Methods A total of 89 patients with type 2 diabetes mellitus （T2DM） hospitalized in the Department of Endocrinology of Pingxiang People′s Hospital from January to July in 20XX were selected， and the patients were divided into normal albuminuria group or only diabetes group （group NA）， microalbuminuria group （group MI） and macro albuminuria group （group MA） according to the 24 h urinary protein excretion rate （UAER）. In addition， 53 healthy patients in the Physical Examination Department of Pingxiang People′s Hospital were selected as the normal control group （NC）. Serum concentrations of 4-HNE， YKL-40 and KIM-1 were determined by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. Results The serum 4-HNE， YKL-40 and KIM-1 in the group MA were higher than those in the group MI， with statistically significant differences （P [Key words] Diabetic nephropathy; Urinary albumin; Lipid peroxidation; Oxidative stress; Biomarker 糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）的慢性并发症之一，据统计，DM患者40%以上可出现肾损害，DN的治疗已成为一个日益严重的挑战，通过积极干预控制血糖刻不容缓[1]。

Wang等[2]的研究显示，血液动力学异常、高血糖诱导的代谢紊乱和炎症因子之间相互作用构成了DN的病理生理学基础，故推测DN发病及进展与血糖长期升高及活性氧（ROS）有关临床调查发现[3]，DN存在相对较长的无临床表现期，继而在无DN相关临床表现的情况下通过尿液检测出尿微量蛋白（UmALB），最终导致终末期肾病（ESRD）尽管目前临床上大多以检测UmALB作为DN的早期诊断方法，但UmALB并不敏感，并且在伴有组织损伤和炎症的DM患者尿液检测可出现UmALB肾穿刺是DN诊断的金标准，但其为一种侵入性检查方法，因此临床应用受限[4]故需寻找新的诊断指标检测早期DN，减少ESRD发生 相关研究表明，DM大鼠随肾脏损伤逐渐加重，血清4-羟基壬烯醛（4-HNE）表达水平逐渐升高，并提示脂质过氧化参与DN进展[5];Han等[6]研究认为血清人软骨糖蛋白-39（YKL-40）参与了DN肾脏损伤的过程，且与尿蛋白排泄率（UAER）成正相关;而血清肾损伤分子-1（KIM-1）能较快反映DN早期肾脏损伤[7]目前，研究血清4-HNE、YKL-40、KIM-1表达水平在早期DN诊断中的临床意义的相关研究较少。

本研究主要观察血清4-HNE、YKL-40、KIM-1对评价DN肾脏早期病理损害的临床意义，并分析血清4-HNE、YKL-40、KIM-1与肾损伤检测指标、血糖水平、血脂水平的相关性，现报道如下 1资料与方法 1.1一般资料 选取20XX年1～7月萍乡市人民医院内分泌科收治的89例2型糖尿病（T2DM）患者，其中男43例，女46例;年龄28～77岁，平均（57.08.8）岁患者均通过连续两次24 h尿蛋白定量检查，结果以两次平均值计算24 h UAER，根据24 h UAER结果将患者分为正常蛋白尿组/单纯糖尿病组（NA组，UAER 另选萍乡市人民医院体检科的53例健康体检者作为健康对照组（NC组），其中男27例，女26例;年龄27～70岁，平均（55.09.8）岁 各组的性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性本研究已经萍乡市人民医院医学伦理委员会审核批准 1.2纳入及排除标准 纳入标准：①DM患者均为参照1999年世界卫生组织糖尿病专家委员会制定的诊断标准确定的T2DM患者，且病程 排除标准：①存在其他因素所致的肝、肾脏疾病，严重的心脑血管疾病、1型糖尿病、肿瘤、妊娠、合并炎症及晨起剧烈运动的患者;②吸烟者;③近期有糖尿病酮癥酸中毒、高渗性昏迷者。

1.3方法 1.3.1试剂与仪器 ①4-HNE、YKL-40、KIM-1检测试剂盒购于上海极威生物科技有限公司，均按照试剂盒说明操作;②全自动蛋白分析仪（贝克曼库尔特型号xxxx00）;③全自动生化分析仪（贝克曼库尔特 LX20）;④全自动糖化分析仪（成都柯尼特科技有限公司型号Premier Hb9210）;⑤酶标仪、洗板机（雷杜生命科学股份有限公司型号RT-6100、RT-3100） 1.3.2样本采集 研究对象均空腹12 h采集静脉血3 ml，3000 r/min离心10 min;收集血清冻存于-80℃冰箱 1.3.3相关指标浓度测定 ①采用ELISA法检测各组血清标本中的4-HNE、YKL-40、KIM-1浓度;②采用免疫比浊法检测UmALB;③HbA1c：高效液相色谱法;④UAER：双缩脲法;⑤空腹血糖（FPG）：葡萄糖氧化酶法;⑥血清肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、TG采用酶法测定 1.4观察指标 ①观察四组的肾损伤指标，主要包括BUN、SCr、24 h UAER及UmALB;②比较四组的血糖及血脂指标水平，血糖指标主要包括FPG及HbA1c，血脂指标包括LDL、HDL、TG;③比较四组的血清4-HNE、YKL-40、KIM-1表达水平。

1.5统计学方法 采用SPSS 24.0统计学软件对数据进行分析，定性资料以频数表示，组间比较采用χ2检验;符合正态分布的计量资料以均数标准差（xs）表示，多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA），差异有统计学意义再行SNK法多重比较;不符合正态分布的以中位数M（P25，P75）表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis H非参数检验，差异有统计学意义再行Nemenyi法多重比较;相关性采用Pearson相关系数表示，以P 2结果 2.1四组肾功能指标的比较 MI、MA组患者BUN高于NA、NC组，差异有统计学意义（P0.05）;NA组与NC组BUN比较，差异无统计学意义（P>0.05）;MI、MA组患者SCr、UAER及UmALB高于NA、NC组，MA组患者SCr、UAER及UmALB高于MI组，差异有统计学意义（P0.05）（表1） 2.2四组血糖及血脂指标水平的比较 NA、MI、MA组的FPG、HbA1c高于NC组，差异有统计学意义（P0.05）;MA组的LDL低于NC组，差异有统计学意义（P0.05）（表2） 2.3四组血清4-HNE、YKL-40、KIM-1水平的比较 NA、MI、MA组患者的血清4-HNE、YKL-40、KIM-1水平高于NC组，MI、MA组患者的血清4-HNE、YKL-40、KIM-1水平高于NA组，MA组患者的血清4-HNE、YKL-40、KIM-1水平高于MI组，差异均有统计学意义（P 2.4临床生化指标与4-HNE、YKL-40、KIM-1的相关性分析 SCr、UmALB、UAER、FPG、HbA1c与4-HNE、YKL-40、KIM-1成正相关（r=0.428、0.349、0.390，0.501、0.446、0.491，0.478、0.409、0.461，0.414、0.502、0.497，0.584、0.558、0.607;P 3讨论 高糖状态可使细胞氧化应激、脂质过氧化水平升高，而脂质过氧化的亚稳态醛可作为第二信使，刺激多种细胞产生炎症甚至细胞凋亡，提升氧化应激水平[8]，致ROS过表达，刺激细胞膜上磷脂双层的多不饱和脂肪酸结构上的氢以诱发脂质过氧化，使4-HNE过表达，影响细胞信号转导，从而导致细胞凋亡和肾脏病理损伤[9-10]。

Chen等[11]研究显示，当4-HNE处于低浓度时可能发挥抗氧化作用，降低氧化应激对肾脏造成的损伤此外，高糖状态时，血清4-HNE与肾脏损伤程度成正相关[12]，故DN早期通过检测4-HNE可避免发生肾脏不可逆损伤 YKL-40由单核细胞向巨噬细胞分化产生，活化的巨噬细胞具有分泌YKL-40的功能，当血脂水平升高合并斑块血管时，巨噬细胞和血管平滑肌细胞（VSMCs）中存在YKL-40表达[13]VSMCs通过外源性信号诱导迁移至细胞内膜，而YKL-40通过刺激VSMCs迁移和重组，以调节血管内皮细胞的形态[14]，促进分支小管的形成此外，Rathcke等[13，15]的研究显示，YKL-40表达水平与内皮功能障碍程度成正相关，参与早期内皮功。