人表皮调节素(EREG)化学发光免疫检测试剂盒.pdf

1st Edition, revised in Apr, 2014 （ 本试剂盒仅供体外研究使用 ，不用于临床诊断！） 人表皮调节素 (EREG)化学发光免疫检测试剂盒 使用说明书 Human EREG (Epiregulin) CLIA Kit 产品 货 号： E-CL-H0111c 使用前请仔细阅读说明书如果有任何问题，请通过以下方式联系我们： 全国免费 400-660-4808 销售部 027-87385095 技术部 027-87645690 电子邮箱（销售） Perry@ 电子邮箱（技术） techsupport@ 客服 1037150941 网址 联系时请提供产品货号（见试剂盒标签），以便我们更高效地为您服务 Copyright ©2012 Elabscience Biotechnology Co.,Ltd All Rights Reserved Elabscience 1st Edition, revised in Apr, 2014 人表皮调节素 (EREG)化学发光免疫检测试剂盒 使用说明书 产品 货 号： E-CL-H0111c （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断 !） 声明： 尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。

本产品适用于体外定量检测 人 血清、血浆或其它相关生物液体 中天然和重组 EREG 浓度 使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分 ！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司 试剂盒组成： 中文名称 英文名称 规格 保存条件 CLIA 酶标板 Micro CLIA Plate 8×12 / 8×6 * 4℃ /-20℃ # 冻干标准品 Reference Standard 2/1 支 * 4℃ /-20℃ # 标准品 &样品稀释液 Reference Standard & Sample Diluent 1 瓶 20mL/12mL * 4℃ 浓缩生物素化抗体 Concentrated Biotinylated Detection Ab 1 支 120μL/70μL * 4℃ /-20℃ # 生物素化抗体稀释液 Biotinylated Detection Ab Diluent 1 瓶 10mL/6mL * 4℃ 浓缩 HRP 酶结合物 Concentrated HRP Conjugate 1 支 120μL/70μL * 4℃ (避光 ) 酶结合物稀释液 HRP Conjugate Diluent 1 瓶 10mL/6mL * 4℃ 浓缩洗涤液 （ 25×） Concentrated Wash Buffer (25×) 1 瓶 30mL/16mL * 4℃ 发光 底物 A 液 Substrate Reagent A 1 瓶 5mL/3mL * 4℃ (避光 ) 发光底物 B 液 Substrate Reagent B 1 瓶 5mL/3mL * 4℃ (避光 ) 封板覆膜 Plate Sealer 5/3 张 * 产品说明书 Manual 1 份 质检报告 Certificate of Analysis 1 份 特别说明 ： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于 4℃ ，需长时间存放或多次使用建议存于 -20℃ . 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理 : 本试剂盒采用双抗体夹心 CLIA法。

用抗 人 EREG抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人 EREG会与包被抗体结合，游离的成分被洗去依次加入生物素化的抗 人 EREG抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素抗 人 EREG抗体与结合在包被抗体上的 人 EREG结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分 被洗去加入 发光 底物混合液 ， 发光 底物 在辣根过氧化物酶的催化下 发出荧光，用化学发光免疫分析仪测定化学发光值（ CL）， 人 EREG浓度与化学发光值之间呈正相关， 通过绘制标准曲线计算出样品中 人 EREG的浓度 1st Edition, revised in Apr, 2014 3 样品收集 : 1. 血清：全血样品于室温放置 2小时或 4℃ 过夜后于 1000×g离心 20分钟，取上清即可检测， 收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管 2. 血浆：抗凝剂推荐使用 EDTA-Na2， 样品采集后 30分钟内于 1000×g离心 15分钟，取上清即可检测 避免使用溶血，高血脂样品 3. 组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9的重量体积比，比如 1g的组织样品对应 9mL的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录推荐在 PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充 分研磨为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融最后将匀浆液于 5000×g 离心 5~10分钟，取上清检测 4. 细胞培养上清： 取细胞培养上清于 1000×g离心 20分钟，除去杂质及细胞碎片取上清检测 5. 其它生物样品： 1000×g离心 20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考： 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除 7. 样品收集后若在 1周内进行检测的可保存于 4℃ ，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于 -20℃ (1个月内检测 )，或 -80℃ （ 6个月内检测），避免反复冻融 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（ 建议先做预实验，以确定稀释倍数 ） 试验所需自备物品 : 1. 化学 发光免疫分析仪 2. 高精度移液器， EP管及一次性吸头： 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃ 恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作 : 1. 请提前 20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释 (1:25)未用完的放回 4℃ 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用 40℃ 水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过 50℃ ，使用时洗涤液应为室温） 当日使用 3. 标准品 : 加入标准品 &样品稀释液 1.0mL至冻干标准品中，静置 10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀（浓度为 1000pg/mL）然后根据需要进行倍比稀释 （注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释） 建议配制成以下浓度： 1000、 500、 250、 125、 62.5、 31.25、 15.625、 0ng/mL，标准品 &样品稀释液 直接作为空白孔 0pg/mL如配制 500pg/mL标准品：取 0.5mL1000pg/mL的上述标准品加入含有 0.5mL标准品 &样品稀释液的 EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推 4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以 100μL/孔计） ，实际配制时应多配 1st Edition, revised in Apr, 2014 4 制 100-200μL 使用前 15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体 (1:100)成工作浓度。

当日使用 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以 100μL/孔计） ，实际配制时应多配制100-200μL 使用前 15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩 HRP酶结合物 (1:100)成工作浓度当日使用 6. 发光底物工作液： 实验前计算当次实验所需用量（以 100μ L/孔计），实际配制时应多配制100-200μ L使用前 15分钟， 将发光底物 A液和 B液等体积混合当日使用 标准品稀释方法图例： （以 500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如 200μL/管） 1 2 3 4 5 6 7 8 Tube 1000 500 250 125 62.5 31.25 15.625 0 pg/mL 洗涤方法 : 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液 350μL，注入与吸出间隔 60秒 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液 350μL， 浸泡 1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体 ，在厚的吸水纸上拍干 操作步骤 : 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。

空白孔加标准品 &样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀给酶标板覆膜， 37℃ 孵育 90 分钟 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤每个孔中加入 生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜， 37℃ 温育 1 小时 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干 4. 每孔加 酶结合物工作液 （临用前 15 分钟内配制） 100μL，加上覆膜， 37℃ 温育 30 分钟 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3 1st Edition, revised in Apr, 2014 5 6. 每孔加 混合好的 发光底物工作液 100μ L，酶标板加上覆膜 37℃ 避光孵育 5 分钟 7. 立即用 化学发光免疫分析仪测定各孔的化学发光值 应提前打开 化学发光免疫分析仪 电源，预热仪器，设置好检测程序 8. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。

注意事项 ： 1. 保存： 试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放 在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果 2. 酶标板： 刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样： 加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“ 预温育 ” 时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性每次的加样时间最好控制在10分钟内推荐设置复孔 4. 温育： 为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度 5. 洗涤 ：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水 6. 试剂配制： Concentrated BiotinylatedDetection Ab及 Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此 使用前 1000转 /分离心 1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。

取用前，请用移液器小心吹打 4-5次。