常见病毒鉴定剖析.ppt

第十八章 常见病毒鉴定,本 章 内 容,肝炎病毒,反转录病毒,疱疹病毒,肠道病毒,朊粒及其他病毒,学习目标及重点,学习目标： 掌握流感病毒、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、肠道病毒的主要生物学特点,各病毒的传播途径、临床检验和防治原则 区别乙型肝炎病毒常见抗原抗体的组成及其临床意义 五种肝炎病毒常用鉴定方法 解释流感病毒变异和流行的关系 了解朊粒的生物学特征 本章重点： ★流感病毒、肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、肠道病毒的生物学特性和致病性 ★常见病毒的检验方法,第一节 呼吸道病毒,呼吸道病毒一词并非是病毒分类学上的名称，而是指主要以呼吸道为侵入门户，首先在呼吸道粘膜上皮细胞中增殖引起呼吸道以及全身感染，造成呼吸道及其他器官损害的病毒的总称第一节 呼吸道病毒,一、流感病毒 流行性感冒病毒（influenza virus），简称流感病毒，是流感的病原体 甲（A）: 抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行 乙（B）: 对人类致病性较低 丙（C）: 只引起人类不明显的或轻微的上呼吸道感染，很少造成流行 （一）生物学特性 1.形态结构 （1）形态,（2）结构,核衣壳,,,第一节 呼吸道病毒,2.分型与变异 分型： 根据NP和MP的不同流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。

甲型流感病毒根据其表面HA和NA抗原性的不同，又分为若干亚型 变异：最主要的是抗原性变异:HA和NA 抗原漂移（antigenic drift） 抗原转变（antigenic shift）,第一节 呼吸道病毒,3.培养特性： 在鸡胚羊膜腔和尿囊腔中增殖 红细胞吸附试验（hemoadsorption test） 易感动物为雪貂 4.抵抗力： 抵抗力较弱 不耐热，56℃ 30分钟可灭活病毒 室温下很快丧失传染性,第一节 呼吸道病毒,（二）微生物学检验 1.标本：血清、咽漱液 2.鉴定： 电镜观察 ELISA检查患者咽漱液中的抗原 用单克隆抗体经免疫酶法 PCR技术、核酸杂交等方法检出病毒或进行分型,第一节 呼吸道病毒,（三）临床意义 传染源：患者、隐性感染者、被感染的动物 传播途径：飞沫，经呼吸道进入体内 致病机理：呼吸道上皮细胞感染增殖，病毒不入血，毒素样物质进入血液 症状：上呼吸道症状、发热、头痛、全身酸痛,第一节 呼吸道病毒,二、风疹病毒 （一）生物学特性 1．形态结构： 单股正链RNA病毒 有包膜，核衣壳为二十面体对称 一个血清型 人是唯一宿主 2．抵抗力： 抵抗力较弱 不耐热，56℃ 30分钟可灭活病毒 对紫外线、乙醚、氯化铯、去氧胆酸等均敏感,,,第一节 呼吸道病毒,（二）微生物学检验 1．标本：鼻咽分泌物、皮疹液、尿液，脑脊液、血液、骨髓等 2．鉴定 病毒培养 （CPE） 免疫学检测 红细胞凝集抑制试验 中和试验 补体结合试验 酶或荧光素标记单克隆抗体 病毒核酸检测：PCR或核酸杂交技术,,,第一节 呼吸道病毒,（三）临床意义 儿童是主要易感者、病后可终身免疫 呼吸道传播 局部淋巴节增殖后经病毒血症散播全身 可垂直传播导致胎儿先天性感染,第一节 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒 （一）SARS冠状病毒 1．生物学特性： （1）形态结构 不规则球形，核酸为非节段单正链RNA 直径60-220nm，有包膜 刺突糖蛋白S、小包膜糖蛋白E、膜糖蛋白M （2）变异性： 重组率高、容易发生变异,,第一节 呼吸道病毒,2.微生物学检验 （1）标本：鼻咽拭子、咽漱液、粪便等 （2）鉴定： 电镜技术 病毒培养：CPE 免疫学检测：IgM、IgG RT-PCR 基因芯片,第一节 呼吸道病毒,3.临床意义 （1）传播途径：严重急性呼吸综合征，飞沫、接触传播 （2）临床表现 可垂直传播导致胎儿先天性感染 （3）致病和免疫 免疫病理损伤是SARS致病的主要机制 （4）预防治疗,第一节 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒 （二）麻疹病毒 1．生物学特性： （1）形态结构 球形，核心为完整非节段单股负链RNA 有包膜、衣壳螺旋对称 不容易重组、不容易发生变异、只有一个血清型 （2）抵抗力： 较弱，对一般消毒剂、紫外线、 脂溶剂均敏感,,第一节 呼吸道病毒,2.微生物学检验 （1）标本：鼻咽拭子、鼻咽洗液、痰、血和尿等，双份血清 （2）鉴定： 电镜观察包涵体 病毒培养： 免疫学检测：双份血清检测抗体 RT-PCR,第一节 呼吸道病毒,3.临床意义 （1）传染源传播途径：患者是唯一的传染源，主要经过飞沫传播 （2）临床表现 以皮丘疹、发热及呼吸道症状为特征 （3）致病和免疫 麻疹病后可获得牢固免疫力，极少发生再感染,第一节 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒 （三）腮腺炎病毒 1．生物学特性： （1）形态结构 球形，核心为单股负链RNA 有包膜、衣壳螺旋对称 只有一个血清型 （2）抵抗力： 较弱，紫外线、脂溶剂均敏感,,第一节 呼吸道病毒,2.微生物学检验 （1）标本：发病早期唾液、脑脊液、双份血清 （2）鉴定： 病毒分离培养： 免疫学检测：双份血清检测抗体 RT-PCR,第一节 呼吸道病毒,3.临床意义 （1）传染源传播途径：人是唯一宿主，通过飞沫或唾液污染的食品、玩具进行传播 （2）临床表现 本病潜伏期约2～3周，病毒侵入呼吸道上皮细胞和局部淋巴结内增殖后，进入血流，然后经血流侵入腮腺及其它腺体器官如睾丸、卵巢、胰腺等。

临床表现主要为一侧或双侧腮腺肿大，伴发热、乏力、肌肉疼痛等青春期感染者易并发睾丸炎或卵巢炎，并发睾丸炎者可导致男性不育症，腮腺炎也是导致儿童期获得性耳聋的常见原因 （3）免疫 腮腺炎病后一般可获得终身免疫第一节 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒,第一节 呼吸道病毒,三、其他呼吸道病毒,第一节 呼吸道病毒,第二节 肝炎病毒,肝炎病毒是指引起病毒性肝炎的病原体 人类肝炎病毒有甲型、乙型、丙型、丁型和戊型和庚型病毒之分第二节 肝炎病毒,一、甲型肝炎病毒 （一）生物学特性 1.形态结构 属小RNA病毒科,线性单正链RNA，直径约为27nm，呈球形，二十面体立体对称、无包膜,HAV电镜图,第二节 肝炎病毒,2.抵抗力 耐受乙醚、氯仿等脂溶剂 耐酸：在pH3的酸性环境中稳定 不耐热：100℃ 5 min可使之灭活 在海水、淡水、毛蚶、泥沙中存活数天至数月,第二节 肝炎病毒,3.培养特性 易感动物：黑猩猩，狨猴，鹰面猴，短尾猴 允许性细胞：Vero、恒河猴胚肾细胞（FRHK-4）、人肝癌细胞株（PLC/PRF/S）等 在培养细胞中生长缓慢，无CPE,第二节 肝炎病毒,（二）微生物学检验 HAV-IgM检测：早期、快速诊断最可靠的血清学指标 HAV-IgG检测：主要用于了解既往感染史、疫苗免疫、效果评价或流行病学调查 分离培养：原代肝细胞或恒河猴胚肾传代株细胞对HAV敏感，生长缓慢，不引起细胞裂解,第二节 肝炎病毒,（三）临床意义 传染源：主要性患者和亚临感染者 传播途径：粪－口途径传播,第二节 肝炎病毒,二、乙型肝炎病毒,第二节 肝炎病毒,二、乙型肝炎病毒 （一）生物学特性 1．形态与结构,①小球形颗粒:直径22nm； ②管形颗粒:直径22nm，长度在50～700nm之间； ③大球形颗粒:即Dane颗粒，直径42nm。

第二节 肝炎病毒,第二节 肝炎病毒,即完整的HBV颗粒，也称Dane颗粒，直径约42nm，分为包膜和核心两部分包膜含HBsAg、糖蛋白和细胞脂肪，核心含核心蛋白（即乙型肝炎核心抗原，HBcAg）、环状双股HBV-DNA和HBV-DNA多聚酶第二节 肝炎病毒,小球形颗粒：直径约22nm 管状颗粒：直径约22nm，长度100～500nm这两种颗粒均由与病毒包膜相同的脂蛋白（即乙型肝炎表面抗原，HBsAg）组成，不含核酸，一般无传染性2.基因组 从感染HBV病人的血清中及感染肝脏提纯的病毒核心中分离出环状双股DNA，约3200bp，HBVDNA负链有四个开放区，分别称为S、C、P及X，能编码全部已知的HBV蛋白质S基因能编码主要表面蛋白C区基因包括前C基因和C基因，分别编码HBeAg和HBcAgP区最长，编码病毒体DNA多聚酶X区可能编码有154个氨基酸的碱性多肽第二节 肝炎病毒,3.抗原组成 （1）表面抗原HBsAg 存在于三型颗粒中,是HBV感染的主要标志 pres1和preS2抗原的检作为病毒复制的指标 抗-preS2抗体阳性常见于急性乙肝的恢复期，表示病毒正在或已经被清除 抗-HBs 保护性抗体（中和抗体） 乙肝痊愈（临床）或免疫成功（接种疫苗）的标志,第二节 肝炎病毒,（2）核心抗原HBcAg 仅存在于Dane颗粒中，刺激机体产生抗HBc（IgG、IgM） 可在感染的肝细胞核心部位的表面存在，表明病毒在复制 到血液中即被降解为HBeAg，一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc 抗-HBc 对机体无保护作用 抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志 抗HBc-IgG：持续时间长 凡有过 HBV感染者均可阳性，并可终身伴随,第二节 肝炎病毒,（3）e抗原HBeAg 仅存在于Dane颗粒中，HBeAg是HBcAg的降解产物，游离存在于血液中，为病毒复制及强传染性的指标，产生抗－HBe，是预后良好的征象 抗-HBe 随着HBeAg的消失而出现 抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低 保护作用,第二节 肝炎病毒,（4）PreS1、PreS2 与HBV-DNA成正比 是病毒复制的指标 抗-PreS1、抗-PreS2 在恢复期的早期出现 阳性提示病毒正在或已经被清除 是预后良好的指标,第二节 肝炎病毒,第二节 肝炎病毒,4.培养特性 动物接种：黑猩猩、鸭,第二节 肝炎病毒,5.抵抗力 具有顽强的抵抗力：它对低温、干燥、紫外线、对一般浓度的化学消毒剂，都能够耐受；常用的消毒剂，如酒精、来苏儿、碘酒等对它根本不起作用，不能杀死它们，所以家里有了乙肝病人就不要用这些消毒剂来消毒，但是HBV怕高热，如加热到100度，只要10分钟就可使其失去传染性。

HBV对0.5%过氧乙酸非常敏感，5%次氯酸钠也可用来杀灭HBV二）微生物学检验 1.标本：血清 2.鉴定 HBV抗原、抗体检测 血清HBV-DNA检测 血清DNA多聚酶检测,第二节 肝炎病毒,（三）临床意义 传染源：患者或无症状HBsAg携带者 传播途径：血液、血制品、母婴传播、性传播 乙型肝炎的临床表现呈多样性，可由无症状携带至急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎等病毒不仅存在于肝内，也存在于脾脏和血细胞等一般认为，病毒在细胞内增殖对肝细胞的直接破坏作用不大，而机体对肝脏的免疫病理损害才是引起肝炎发生的主要原因,第二节 肝炎病毒,三、丙型肝炎病毒 （一）生物学特性,第二节 肝炎病毒,1.形态结构 球形，单正链RNA 有包膜 2.抵抗力： 对有机溶剂敏感,,1.标本：血清或血浆 2.鉴定： 检测病毒抗体：用ELISA法检测抗-HCV 检测病毒RNA：因HCV在血液中含量很少，常用敏感的RT-PCR法,（二）微生物学检验,（三）临床意义 1.主要通过输血和血制品传播，其他如性接触传播、母婴传播 2.是引起输血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因 3.HCV感染极易转为慢性 4.无症状HCV携带者和慢性丙肝者多见 5.人群普遍易感，HCV感染的母亲所生婴儿感染率高 6.诱发肝外损伤：肾小球肾炎 7.无有效疫苗，免疫力不牢固,第二节 肝炎病毒,四、丁型肝炎病毒 （一）生物学特性 HDV是一种缺陷病毒由HBsAg构成其外壳，HDV定位于肝细胞核内，在血液中由HBsAg包被形成35-37nm颗粒，单负链环状RNA， 已知的最小的动物病毒,HDV结构模式图,第二节 肝炎病毒,（二）微生物学检验 1.HDAg是HDV感染的直接标志 2.抗-HD抗体检测 抗HDV-IgM：是HDV早期感染标志 抗HDV-IgG：是HDV既往感染的标志 慢性HDV感染时，两种抗体可长期共存 3.HDV-RNA HDV RNA是HDV存在及复制的一个有用指标,第二。