实验三丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用.ppt

实验三实验三丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用争性抑制作用争性抑制作用争性抑制作用一一 实验目的实验目的（（Experimental Objectives）：）： 1．掌握竞争性抑制作用的概念和特点 2．了解影响酶活性的其它因素 3．分析实验现象  二、实验原理(Experimental Principles)：： 影响酶活性的因素： 温度 pH值 激活剂 抑制剂 对酶活性的抑制作用分类对酶活性的抑制作用分类 不可逆性抑制作用 竞争性抑制作用 反竞争性抑制作用可逆性抑制作用非竞争行抑制作用竞争性抑制作用竞争性抑制作用 抑制剂抑制剂(I)(I)与底物与底物(S)(S)的的结构相似结构相似，能与底，能与底物物竞争竞争酶的酶的活性中心活性中心，从而阻碍酶底物复，从而阻碍酶底物复合物的形成，使合物的形成，使酶酶的的活性降低活性降低。

这种抑制这种抑制作用称为竞争性抑制作用作用称为竞争性抑制作用•反应模式反应模式+IEIE + SE + PES[S]>>[I]：：高浓度的底物可解除抑制竞争性抑制作用特点竞争性抑制作用特点1、I I结构常与结构常与S S结构类似结构类似2、I/SI/S与酶的与酶的结合部位相同结合部位相同: :酶的活性中心酶的活性中心3、[S]↑[S]↑可以可以降低降低甚至消除甚至消除抑制抑制作用作用4、( (表观）表观）KmKm值增大，值增大，VmVm值不变值不变抑制剂抑制剂↑↑ 1/V1/V 1/[S]1/[S] 无无氧氧•丙二酸丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶琥珀酸琥珀酸琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶FADFADH2延胡索酸延胡索酸甲烯蓝（甲烯蓝（MBMB））甲烯白（甲烯白（MBHMBH2 2））+FAD+FAD三三、、实验材料、主要仪器和试剂实验材料、主要仪器和试剂（（Equipments , Materials and Agents）） •（一）主要仪器：离心机、恒温水箱•（二）主要试剂：•1．0.2mol/L 琥珀酸•2．0.02mol/L 琥珀酸•3．0.2mol/L 丙二酸•4．0.02mol/L 丙二酸•上述四中溶液调节pH值为7.4。

•5．0.02%甲烯蓝•6．1/15mol/L的Na2 HPO4 四、操作步骤四、操作步骤（（Operating Procedure）） 1 酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g左右，加入1/15mol/L的Na2 HPO4溶液5ml研成糊状后，再加入5ml1/15mol/L的Na2 HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中，2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其它试管备用 2、取试管5支，按照下列表格操作：  3、各管混匀后，沿试管的内壁加入石蜡油（隔绝空气），放置到37℃水浴中保温，观察各管甲烯蓝的褪色情况，并记录褪色的所需要的时间，解释其现象 五五、、结果与分析结果与分析：：（（Results and Analysis ）） 根据实验的现象，观察得到的结果，并解释其相关的实验现象为什么滴石蜡油？六六、、思考题思考题：：(Questions) 什么叫酶的竞争性抑制作用？举例说明在医学上的应用 七七.注意事项：注意事项：(Notices)1．注意密切观察颜色变化2．加入各种试剂要注意看清标签，不能混用各试剂瓶瓶盖。