实验诊断学-病原微生物检查

1、温州医学院检验医学院 温州医学院附属第一医院,临 床 病 原 体 检 测,石 亮,P441,临床病原体检查目的,明确感染是否发生以及病原体的类型。 提供体外微生物药物敏感实验的结果。 密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，及时向行政主管部门报告。 配合相关机构进行流行病学调查。,本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、病毒性肝炎检测 五、院内感染,一、细菌检验标本采集与送检的基本原则,1.注明被检人姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源及检验目的、抗生素使用情况。 2.尽量在抗生素使用前采集标本。 3.在采集血液、脑脊液、穿刺液等标本时，应严格执行无菌操作，避免杂菌污染。 4.立即送到实验室，某些细菌还应注意保温、保湿。 5.盛标本容器须经灭菌处理，勿用消毒剂。,参考P463,二、常见标本的采集：血液与骨髓,1.采血部位多为肘静脉，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采集血标本，无菌操作。 2.每瓶采血量为510ml左右， 培养基与血液之比以10:1为宜， 以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。 3.选择寒战发热之初采血。对已用抗菌药物而又不

2、能停药者，应在下次用药前采血。 4.每例建议不同时间不同部位采血3次，注意区别 感染菌和皮肤污染菌。,尿液标本的采集,1.中段尿采集：最常用的方法。采样前须消毒尿道口将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。 2.导尿管采集尿液：可减少污染，但易引起逆行感染。不可从集尿袋下端管口留取标本。 3.膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厌氧菌培养或婴幼儿。,粪便标本的采集,1.挑取有脓血粘液部分的新鲜粪便约23克盛于灭菌容器中送检，也可用拭子挑取粪便插入Cary-Blair运送培养基中送检。 2.对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子采集送检。,呼吸道标本的采集,1.自然咳痰：清水反复漱口后用力咳嗽，从呼吸道深部咳出,以清晨第一口痰为好。 2.气管镜下采集法、气管穿刺法：下呼吸道病原学的理想标本，可减少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。 3.应及时送检和处理(1小时)，放置时间长可导致肺炎链球菌，流感嗜血杆菌等的检出率明显下降。,脑脊液等无菌体液标本的采集,1.严格无菌条件下采集标本。 2.尽量采集多的标本送检。 3.尽快送检或床旁接种可 提高阳性

3、率，特殊标本 需保温送检。如脑膜炎奈瑟菌、 肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等。,其它标本的采集 (伤口、烧伤创面、脓肿等),1.无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物，立即送检。 2.对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检，也可以切开排脓时用无菌拭子采样。 3.生殖道标本包括尿道口分泌物、外阴糜烂物、宫颈口分泌物、前列腺液等，应注意保温。,三、检查方法,1.直接涂片、镜检：初步诊断但阳性率低。如抗酸染色找结核杆菌。,阴道毛滴虫,革兰氏染色,2.分离、培养、鉴定：金标准较费时（3天）,同时可进行药物敏感试验。 3.血清学检查：如肥达氏试验、军团菌抗体检查等。抗体检测应进行双份血清检测，两次抗体效价相差4倍以上有现症诊断价值，但无早期诊断意义。 （但IgM有早期诊断意义）,主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、病毒性肝炎检测 五、院内感染,耐药性及发生机制,1.当前临床分离的常见细菌 (1)革兰阴性菌 大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等，占70%

4、。 (2)革兰阳性菌 葡萄球菌、肠球菌、肺炎链球菌、卡他布兰汉菌等，占30%。,滥用抗生素的后果耐药,2.耐药机制 (1)耐药基因的整合子系统 (2)产生灭活抗生素的水解酶或钝化酶 (3)改变抗生素作用的靶位 (4)细菌膜的外排泵出系统 (5)生物膜的形成，提高耐药性,3、药物敏感试验,(1)K-B纸片琼脂扩散法：最常用，操作相对方便 (2)稀释法 包括琼脂稀释法和肉汤稀释法 可获得最小抑菌浓度（MIC），但较麻烦 (3)E试验 ：结合稀释法和扩散法，价格昂贵,4.重点耐药菌株监测试验 (1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的筛选 (2)氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌 (HLAR)筛选 (3)耐青霉素肺炎链球菌(PRSP)筛选 (4)染色体型-内酰胺酶AmpC酶的检测 (5)超广谱内酰胺酶(ESBL)检测,5.病原菌耐药基因的检测 (1)适全生长缓慢的细菌如结核分枝杆菌 (2)对病原菌的耐药具有确证意义 (3)考核其它耐药性检查方法的金标准,可能成为未来耐药性检查的主导方法。,本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、病毒性肝炎检测 五、

5、院内感染,一、流行病学和临床类型,流行病学特征 新的病原体不断被发现，如SARS病毒、禽流感染病毒等。 老传染病死灰复燃 如结核、梅毒、霍乱等 多重耐药菌株不断出现 器官移植、放/化疗、侵入性医疗检查或治疗导致医院感染发生率不断增加,二、检查项目和临床应用,1.细菌感染：细菌培养是最重要的确诊方法 2.病毒感染：常用血清学检查，如HIV 3.真菌和寄生虫感染：形态学检查,本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、病毒性肝炎检测 五、院内感染,病毒性肝炎检测 P452,甲型肝炎(粪口途径)： IgM抗体：特异性早期诊断指标,提示HAV现症感染 IgG抗体：出现于恢复期且长期存在,提示既往感染,甲、乙、丙、丁、戊、庚、输血传播病毒肝炎,乙型肝炎 1.最常用的定性检测 乙肝两对半 常用测定方法：ELISA法 2.乙肝DNA定量PCR检测：病毒复制的指标 正常:HBV DNA103 Copies/ml 拉米夫定(贺普丁）、干扰素治疗效果的主要指标。,丙肝病毒标志物 RNA病毒 血液传播 1.抗HCV-IgM 近期感染指标 2.抗HCV-Ig

6、G 已有感染，不作为感染早期指标 3.HCV-RNA： 阳性提示HCV复制活跃,直接指标,其它 丁肝为缺陷病毒，依赖HBV,本章主要内容 一、标本采集、运送和检测方法 二、细菌耐药性检查 三、临床感染常见病原体检查 四、病毒性肝炎检测 五、院内感染,医院感染常见病原体检测,院内感染的概念：入院时无症状，在入院48小时后 发生的感染，或出院后48小时发生的感染。,患者或陪护人员,医护人员,环境或医疗器械,三大环节：传染源，传播途径，易感人群,医院感染的特点 感染源和病原体：感染源主要是患者、医务人员、医院环境、医疗器械等。最常见病原体是细菌，以革兰阴性杆菌为主 易感人群：常见于免疫力低下的住院患者。多发生于具有基础性疾病或接受侵入性治疗的患者。 常见临床类型：下呼吸道感染（机械通气）为最常见医院感染类型，其它如尿路感染（插管）、手术切口感染、胃肠道感染、血液感染（静脉留置和透析常见）、皮肤和软组织感染等。 病原体：条件致病菌和机会致病菌 传播方式：接触传播多见,医院感染的常见细菌,1.鲍曼不动杆菌 呼吸道感染常见 2.大肠埃希菌 泌尿道感染常见 3.铜绿假单胞菌 呼吸道和烧伤常见 4.金

7、黄色葡萄球菌 皮肤和软组织化脓 5.肺炎克雷伯菌 呼吸道感染,掌握 临床常见病原体检测标本的采集运送原则、要求及方法； 熟悉 病原体耐药性发生机制、药敏试验及耐药菌监测试验； 掌握 乙肝两对半的意义及常见模式； 掌握 院内感染。,本 章 重 点,考试时间：12年12月28日晚18:30 考试题型：判断题10分（10道题），单选题70分（70道题），不定项选择题9分（6道题）。名解6分（2道题），简答5分（1道题）。 考试内容：平时上课老师PPT的内容，课本中没讲到的内容不作为考试要求。,期末考试注意事项,K-B 法,back,E-试验,1.测定方法 OX纸片法：苯唑西林 FOX纸片法：头孢西丁 2.MRS 对所有内酰胺类耐药,OX,OX,FOX,FOX,OX,MRS筛选试验,FOX,HLAR的筛选,CN120,AMP,1.测定方法 纸片法 2.CN120：高浓度庆大霉素 AMP：氨苄西林,ESBLs双纸片确证试验,1.CTX/CA比CTX抑菌 圈或CAZ/CA比CAZ 5mm即为阳性 2.若ESBLs阳性,对青霉素类、所有头孢菌素类及单环类抗菌素耐药,CTX,CTX/CA,CAZ,CA

8、Z/CA,注:CTX为头孢噻肟;CTX/CA为头孢噻肟/棒酸 CAZ为头孢他啶;CAZ/CA为头孢他啶/棒酸,AmpC酶检测,FOX,FOX：头孢西丁 2. 若AmpC酶阳性，对青霉素类、第一、二、三代头孢菌素、单环类及头霉类抗菌素耐药,乙肝的传播途径,我国HBSAg阳性率约为8。 经血传播 胎源性传播 医源性传播 性接触传播 生活密切接触传播(共用剃须刀、牙刷等),乙肝两对半,HBsAg：感染HBV后12月出现，若急性发病后3个月 不转阴，易转为慢性。是乙肝病毒感染的标志。 HBsAb：为保护性抗体，表明患者已产生了一定的免 疫力。 HBeAg：表明乙肝处于活动期，肝细胞受损状态，有 较强传染性。 HBeAb：抗-HBe的出现意味着大部分乙肝病毒被消 除，传染性显著降低，病情出现好转。 HBcAb：阳性者代表正在感染或以往感染过乙肝病毒。,HBcAg(核心抗原)存在于肝细胞内，血中不易检测。 当肝细胞破坏，HBcAg释放出来，被酶水解成HBeAg，所以HBeAg提示肝细胞损伤。,常见模式 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb,大三阳 + - + - + 小三阳 + - - + + 未感染 - - - - - 有免疫力 - + - - - 急性感染 + - - - + 感染恢复期 - + - +(-) -(+) 乙肝恢复期 - - - + +,back,本 章 重 点,掌握 临床常见病原体检测标本的采集运送原则、要求及方法； 熟悉 病原体耐药性发生机制、药敏试验及耐药菌监测试验； 掌握 乙肝两对半的意义及常见模式； 掌握 院内感染。,

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