骨髓检查标准操作程序

1、文件编号：YCXZYYJYK_SOP_09月亮县 中医院 项 目 页码：第- 1 -页，共 5 页 版本：第 3 版，第 1 次修订 检验科检验科血液分析检验科血液分析 SOP 手册手册 生效日期：20180101 编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：20180101 SOP_09-2SOP_09-2 骨髓检查标准操作程序骨髓检查标准操作程序 一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。 二、适用范围：血液骨髓检验。 三、操作人员：检验科授权工作人员。 四、操作步骤： 血细胞形态学检查主要用于观察骨髓与血液中细胞数量和质量的变化，借以了解其造血 功能。对疾病的诊断、疗效的观察、预后等研究都具有重大价值。血细胞化学染色是在观察 形态的基础上进一步了解细胞化学成分，对血细胞各种生化成分及代谢产物作定性、定位和 定量的观察，临床上亦常用以协助诊断、鉴别诊断血液病和其他疾病。 1 骨髓象检查： 1.1 骨髓细胞形态检查步骤： (1) 骨髓取材： 骨髓穿刺部位：一般取胸骨、棘突、髂骨前嵴或后嵴等部位

2、。两岁以内小儿主张用胫 骨穿刺。穿刺部位不同，取材可能有明显差异。以胸骨穿刺最好，棘突次之，髂骨最 差。故必要时应多部位取材，以便能全面地了解骨髓情况。 吸骨髓液：一般不超过O.2ml，否则易于稀释。 骨髓取材满意的几项指标：抽吸骨髓时，患者有特殊酸痛感，骨髓液中应含有骨髓小 粒。显微镜下观察涂片，可发现骨髓特有细胞。 (2) 涂片检查： 涂片制备：要求涂片均匀，有头、体、尾三部分，血膜面积约1.5cm3cm，厚度以透 过血膜可看清字迹为限。选择骨髓小粒部分制作涂片，骨髓液量不宜过多。因骨髓的 凝固较快，涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色 质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。 涂片检查：一般体积大的细胞分布于涂片的上下边缘及尾部，计数时应该从体尾交界 处开始迂回向尾部移动。 (3) 染色：选用瑞氏(Wright)和姬姆萨(Giemsa)混合染色。具体方法：髓片两端用蜡笔划 线，必要时在血膜边缘较厚处用铅笔写明患者姓名及日期或编号。加染液35滴于涂 片上，静置1min(天热时间缩短)，然后加510滴磷酸盐缓冲液，使两液混匀，约 1015min，用水冲洗髓片

3、，冲洗时平放玻片，缓缓用流水冲洗(勿先倒去染料)，待干 镜检。 附注； 涂片要新鲜，涂片后立即进行染色，如特殊情况，一般不超过1周。否则，细胞蛋白质 文件编号：YCXZYYJYK_SOP_09月亮县 中医院 项 目 页码：第- 2 -页，共 5 页 版本：第 3 版，第 1 次修订 检验科检验科血液分析检验科血液分析 SOP 手册手册 生效日期：20180101 编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：20180101 变性，使染色偏碱。 染色时间长短与气温、细胞增生情况、染液的性能有关，要求将染色中的涂片在显微 镜下观察，待颗粒清楚、核浆分明、着色满意后才终止染色，冲洗晾干待检。 染色过深的涂片可用瑞氏-姬姆萨混合染液滴加于涂片上，马上冲洗。如过浅可重染， 先加缓冲液，再加染色液，混合后复染到需要的深度。 (4) 估计骨髓增生程度（骨髓涂片观察）：先在低倍镜下全面观察成熟红细胞与有核细胞 的大致比例，以确定增生程度。国内一般分为5级，判断标准如下： 增生极度活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为1：1，见于白血病、红白血病。 增

4、生明显活跃。：成熟红细胞与有核细胞之比约为10：1，见于白血病、增生性贫血。 增生活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为20：1，见于正常骨髓和某些贫血。 增生减低：成熟红细胞与有核细胞之比约为50：1，见于造血功能低下时。 增生严重减低：成熟红细胞与有核细胞之比约为300：1，见于典型的再生障碍性贫血。 (5) 粒、红比值计算：将粒细胞系统从原始到成熟阶段的总和与红细胞系统从原始到晚幼 红细胞总和相比，称为粒、红比值。 参考值：成人为24：1。粒红比值增高见于化脓性感染、类白血病反应、粒细胞 性白血病、红细胞生成受抑制等。降低见于粒细胞生成受抑制，如粒细胞缺乏症或红细 胞系统增生，如急性溶血或失血、缺铁性贫血等。 1.2 骨髓有核细胞计数（试管法）：用血红蛋白吸管吸取骨髓液20ml，放入装有1ml白细胞 稀释液的试管中，充分振荡2min，摇匀。按白细胞计数方法，数5个大方格细胞，其结果 乘以102，即得1l有核细胞数。 参考值：10180109L。增高见于骨髓增生性疾病（如白血病、溶血性贫血、脾功 能亢进）。降低见于骨髓增生不良性疾病（如再生障碍性贫血等）。 附注：骨髓穿刺时，勿混入血液

5、，取骨髓液时，先计数后涂片，防止凝固。 1.3 骨髓巨核细胞计数：取骨髓液作涂片，低倍镜检查找巨核细胞，寻找1.5cm3cm为一单 位面积，计数其巨核细胞。取材必须良好，涂片不宜过厚，以透过涂膜看到字迹为度。 参考值：巨核细胞参考值：735个。分类：原巨核细胞0；幼巨核细胞OO.05(O5%)； 颗粒型巨核细胞0.100.27(10%27%)；产板型巨型巨核细胞O.44O.60(44%60%)；裸 核型巨核细胞O.080.30(8%30%)。 幼稚型巨核细胞比例增加见于特发性血小板减少性紫癜的急性型。颗粒型巨核细胞比 例增加见于特发性血小板减少性紫癜的慢性型。 1.4 骨髓象分析：先在低倍镜下观察取材、涂片、染色是否满意，成熟红细胞与有核细胞的 大致比例，以确定增生程度。计数全片巨核细胞数，注意有无体积较大的细胞，如转移瘤 细胞、尼曼匹克细胞、高雪细胞等。后用油镜作分类计数，一般以体尾交界处为宜。在分 文件编号：YCXZYYJYK_SOP_09月亮县 中医院 项 目 页码：第- 3 -页，共 5 页 版本：第 3 版，第 1 次修订 检验科检验科血液分析检验科血液分析 SOP 手册手册

6、 生效日期：20180101 编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：20180101 类计数时，一张骨髓片计数200500个有核细胞。 特殊颗粒 嗜中性、嗜碱性、嗜酸性粒细胞 颗 有 嗜亚尼林兰颗粒 核仁 有 幼稚细胞 无 淋巴、单核、巨核、浆细胞 粒 无 核 无 红细胞 有 核仁 有 幼稚细胞 无 幼稚红细胞 1.5 骨髓象报告：应与临床及其它实验结果，特别是外周血的检验结果相结合，全面分析。 应提出以下方面所见： (1) 骨髓有核细胞增生情况。 (2) 粒、红比值。 (3) 粒细胞系统：观察粒细胞系统在全部骨髓细胞中所占比例。正常约占12左右 (50%60%)；各阶段细胞之间的比例，原粒2.96；早幼粒5.96；中、晚幼粒的 百分率依次增多，一般各15.96；成熟细胞中，杆状核多于分叶核粒细胞，嗜酸粒 细胞一般5.96，嗜碱粒细胞1%。写明各个细胞形态上有无异常。 (4) 红细胞系统：观察幼红细胞系统在全部骨髓细胞中所占有的比例。正常约占有核细胞 的15(20.95)左右。各阶段幼红细胞之间的比例，原始红细胞一般1%；早

7、幼红细 胞5%；中、晚幼红细胞平均各约为10.95。观察有无巨幼红细胞，成熟红细胞的形 态及大小有无异常，中心染色是否过浅，有无豪一周小体、卡波环、嗜多色性红细胞、 靶形红细胞、椭圆形红细胞及点彩红细胞等。 (5) 淋巴及单核细胞系统：注意细胞形态有无异常，各阶段的比例关系。淋巴系统百分率 约为20%，小儿偏高，有时可达40%，单核细胞一般4%。 (6) 其他细胞：浆细胞、网状细胞、组织嗜碱细胞、内皮细胞、吞噬细胞等的形态及比例。 (7) 巨核细胞总数、分类及形态，血小板形态及数目。 (8) 有无寄生虫，如有无疟原虫、利朵小体。 (9) 有无异常细胞。 最后提出诊断，如不能提出诊断意见，可描述形态学所见，以供临床参考。 2 细胞化学染色：过氧化物酶(POX)染色、苏丹黑B（SB）染色、中性粒细胞碱性磷酸酶 （NAP）染色、酸性磷酸酶（ACP）染色、糖原染色（高碘酸-雪夫反应PAS法）、酯酶染色、 铁染色的方法按全国临床检验操作规程执行。 文件编号：YCXZYYJYK_SOP_09月亮县 中医院 项 目 页码：第- 4 -页，共 5 页 版本：第 3 版，第 1 次修订 检验科检验科血液

8、分析检验科血液分析 SOP 手册手册 生效日期：20180101 编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：20180101 正常血细胞和急性白血病原始细胞的细胞化学染色反应 细胞类型 过氧化物酶 苏丹黑B 酯 酶 -NAE -NBE NCE 糖 原 PAS 酸性磷酸酶 ACP 幼稚粒细胞 +/+-/-+/+/+/+ 中性粒细胞 +-/-+/+ 单核细胞 -/+/+-/+ 淋巴细胞 -/-/-/+-/+ 幼稚红细胞 -/-/- 巨核细胞 -+-+ 急淋 -/+-+/+-/+ 急非淋(M1) +-+- (M2)+-/+-/+ (M3)+-/+-+/+ (M4)+/+-/+ (M5)-/+-/+ (M6)-+-+- (M7)-+-/-+ 注： 1. -为阴性；为弱阳性或极少数阳性；+为阳性；+为中等强度阳性；+为强阳性。 2. 局灶性不弥散； 在红白血病和幼红成熟障碍时为强阳性； 部分急淋时，有局灶性阳性； 典型 粗块状； 从M1到M5酯酶的组化反应适用于非红细胞、非淋巴细胞的单个核细胞； M6组化反应用于原 始红细胞，但原粒细胞也会出现POX、苏丹黑B阳性反应。 参考文献： 1 王永才，鲍忠厚主编. 血液病.血液.骨髓细胞学检查 大连医学院，1984： 2 .庄威远主编.临床血液学检验.高等医药院校协作教材 长春.吉林医学院，1988： 3.盛尔荃主编.临床血液细胞学图谱 成都：四川科技出版社，1986： 4 沈阳医学院主编临床血液学及细胞学图谱 北京：人民卫生出版社，1967： 4 叶应妩，王毓三主编全国临床检验操作规程 南京.东南大学出版社，1997： 5 朱忠勇主编实用医学检验学 北京：人民军医出版社，1992： 6 卫生部临床检验中心临床实验室质量管理 北京：2000： 文件编号：YCXZYYJYK_SOP_09月亮县 中医院 项 目 页码：第- 5 -页，共 5 页 版本：第 3 版，第 1 次修订 检验科检验科血液分析检验科血液分析 SOP 手册手册 生效日期：20180101 编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四 时 间：20180101时 间：20180101时 间：20180101

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