层析 chromatography
101页1、生命科学学院:陈晓明(C) 2009层析技术( 命科学学院:陈晓明(C) 2009一、简介1、层析法也称色谱法,是1906年俄国植物学家将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子,各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开,由此得名为 “ 色谱法 ”( 。后来无色物质也可利用吸附柱层析分离。生命科学学院:陈晓明(C) 20092、层析法是目前广泛应用的一种分离技术,是分离各种生物大分子的主要手段之一, 是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。3、 40年代:两位英国科学家 析), 他们首先提出了色谱塔板理论, 获得了 1952年的诺贝尔化学奖。由此, 层析技术 成为分离生化物质的关键技术。生命科学学院:陈晓明(C) 20094、按照不同的标准层析法有不同的分类。根据层析峰的位置及峰高或峰面积 ,可以定性及定量。5、由于层析法具有分辨率高、灵敏度高、选择性好、速度快等特点,因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析,尤其适用于生物样品的分离分析。6、在层析法实验技术有 凝胶层析法、离子交换层析法 、高效液相层析法、亲和层析法、聚焦层析法等生命科学学院:陈晓明(C) 2009生命科学学
2、院:陈晓明(C) 2009二、原理及概念层析技术是一类 物理分离方法 ,根据待分离混合物中各组分物理化学性质的差别 ,使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中 ,由于各组分随流动相前进的速度不同 ,从而得到有效分离 。生命科学学院:陈晓明(C) 2009基本概念固定相 :固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质(如吸附剂,凝胶,离子交换剂等),也可以是液体物质(如固定在硅胶或纤维素上的溶液),这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附,溶解,交换等作用。流动相 :在层析过程中,推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等,都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂,薄层层析时称为展层剂。层析系统都由 两个相组成 : 固定相与流动相 ,生命科学学院:陈晓明(C) 2009分配系数( 配系数 是指在一定的条件下(如温度、压力),某种组分在固定相和流动相中含量(浓度)的比值,分配系数是层析中分离纯化物质的 主要依据 ,常用 溶质在固定相中的浓度, 质在流动相中的浓度生命科学学院:陈晓明(C) 2009 示其溶质在固定相中浓度大 ,在洗脱过程中溶质出现较晚 示某溶质在流动相中浓度大,故在
3、洗脱液中出现较早 有相似的 则表明两组分层析峰会发生重叠,分离效果差生命科学学院:陈晓明(C) 2009分配系数主要与下列因素有关: 被分离物质本身的性质 固定相和流动相的性质 层析柱的温度。生命科学学院:陈晓明(C) 2009不同的层析机理,其 吸附层析 中 分配层析 中 离子交换层析 中 亲和层析 中 命科学学院:陈晓明(C) 2009迁移率 ( 是指:在一定条件下 ,在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值 。 常用 对迁移率 的概念 。 相对迁移率是指:在一定条件下 , 在相同时间内 , 某一组分在固定相中移动的距离与某一标准物质在固定相中移动的距离之比 值 。 常用 晓明(C) 2009分配系数与迁移率的关系 表明该组分与固定相结合力大,迁移率小;反之则结合力小,迁移率大 之,会减少, 同物质的分配系数或迁移率是不同的。分配系数或迁移率的差异程度是决定几种物质采用层析方法能否分 离的先决条件。其差异越大,分离效果越理想。生命科学学院:陈晓明(C) 2009操作容量 :在特定条件下,某种成分与基质反应达到平衡时,存在于基质上的饱和容量。每克(或毫升)
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