实验二乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药
3页1、实验二乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药目前有机磷、氨基甲酸酯类农药是我国大量使用的杀虫剂,虽然这类农药与过去使用的有机氯农药相 比,降解速度较快,但在果蔬中的残留仍然较为严重。由于该类农药能抑制人体内乙酰胆碱酯酶的生理活 性,神经传导因此受阻,引起神经麻木乃至死亡,对人类安康造成极大危害。对于果蔬中的农药通常采用 气相色谱等方法进展分析,但分析时间长,操作步骤烦琐,适用于实验室分析。长期以来在大部分果蔬市 场中,通常采用乙酰胆碱酯酶抑制法进展快速检测,即以乙酰胆碱酯酶作为检测试剂,采用农药残留检测 仪,根据乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定果蔬样品中的残留农药。一、实验目的1. 理解果蔬中残留农药的分析方法;2. 掌握酶抑制分析方法的原理及操作方法;3. 理解农药残留性评价的意义。二、实验原理有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性,造成神经传导介 质乙酰胆碱的积累,影响正常传导,使昆虫中毒致死,酶抑制法就是根据这一昆虫毒理学原理,对农药残 留进展检测。以乙酰胆碱为底物,在乙酰胆碱酯酶ACHE的作用下,乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸,胆碱和二硫 双对硝
2、基苯甲酸DNTB产生显色反响,使反响液呈黄色于410nm处有最大吸收峰。根据酶促反响动力学原理,在没有有机磷和氨基甲酸酯类农药存在时,底物在酶的催化作用下发生水 解,反响速率可以用吸光度值随时间的变化率K0来表示。当有机磷和氨基甲酸酯类农药参加到酶的显色 体系中时,农药抑制了酶的活性,影响显色体系的反响速度,此时体系吸光度随时间的变化率为Kt,那么 有机磷和氨基甲酸酯类农药对酶的活性的抑制率Y的计算公式如下:Y = K0 Kt x 100%吸光度 AK0线的斜线的斜计算。定一次 点如下K0:空白样品的吸光度随时间变化曲 率值Kt:样品溶液的吸光度随时间变化曲 率值t1234567AA1A2A3A4A5A6A7其中K0和Kt都可通过以下过程进展推导和在样品的测量过程,选取每隔等步长时间测吸光度值,3分钟内共测定7个数据点。设数据表:那么线性回归所得At曲线的斜率K为:Z tA -1Z 七乙.K =Z t2 - |(Z t )2(A + 2A + 3A + 4A + 5A + 6A + 7A )-!(1 + 2 + + 7)x(A + A + + A )_1234567 7127(12 +
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