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人参三肽对脂多糖诱导小胶质细胞一氧化氮释放的保护作用

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文档编号：476920072

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1、人参三肽对脂多糖诱导小胶质细胞一氧化氮释放的保护作用本研究考察了人参三肽（PGP3）对脂多糖（LPS）诱导BV-2小胶质细胞炎症的抑制作用。利用MTT法观察人参三肽（0.1，1， 10，100 M M）对细胞存活率的影响；Griess 法检测一氧化氮（NO）的释放；酶联免疫法检测TNF-a的水平；并利用试剂盒检测了超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的水平。结果发现人参三肽在不影响细胞存活率的情况下，减少了活化小胶质细胞N0和TNF-a的释放，并提高了抗氧化水平。提示人参三肽可能通过提高抗氧化能力抑制LPS诱导的BV 2小胶质细胞NO释放，发挥抗炎作用。本研究为进一步开发人参治疗神经退行性疾病提供理论依据。人参三肽；小胶质细胞；神经炎症；一氧化氮S567.51 A 10.11974/nyyjs.20160631001人参根中成分复杂，目前的研究主要集中于人参皂苷成分上，蛋白质及多肽的研究相对较少。研究发现用人参蛋白成分具有调节血脂、降低疲劳、抗应激、增强免疫能力及抗癌的作用1-2。课题组前期研究发现人参肽类成分能够增强小鼠学习记忆能力，采用凝胶柱与HPL

2、C对人参多肽进行分离纯化，并测定了氨基酸序列，首次得到了结构明确的序列为Gln-Thr-Ser的人参三肽3。小胶质细胞异常活化能够介导神经炎症反应，在如老年痴呆、帕金森病等多种神经退行性疾病的发病过程中扮演了重要角色。过度活化的小胶质细胞以释放细胞因子如一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-a（TNF- a）和自由基等为主要特征，造成中枢神经系统（CNS）的损伤4。本实验通过建立体外LPS激活BV-2小胶质细胞异常活化的模型，主要考察了人参三肽的抗神经炎症及神经保护作用，为阐明其在以抑制小胶质细胞活化为靶点防治炎症相关的中枢神经退行性疾病中的应用提供实验依据。1实验材料1.1主要实验材料和试剂人参三肽（PGP3），来自吉林省中医中药研究院；BV-2 小鼠小胶质细胞株来自宁夏医科大学。脂多糖（LPS）购自美国Sigma公司；DMEM、胰酶、胎牛血清、MTT购于Gibco 公司；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2仪器与设备倒置显微镜，南京光学仪器厂；多功能酶标仪，GENE 公司；高速冷冻离心机，科大创新公司；电泳槽、蛋白转

3、印槽、电泳仪，美国Bio-rad公司。1.3实验方法1.3.1小鼠小胶质细胞系BV-2的培养细胞培养使用的玻璃器皿及器械（培养瓶，移液管等），经过120C高压灭菌35 min。以IMDM培养基作为基础配制成内含5%胎牛血清及50 M g/ml 2-巯基乙醇的细胞培养液。 BV-2小胶质细胞以约4X 105 cells /ml在5% CO2, 37C培养瓶中传代培养，至贴壁细胞约占培养瓶底面积50%60%, 以胰酶消化贴壁细胞，传代至另一培养瓶，选择第3-8代BV-2 细胞进行实验。1.3.2药物配制方法人参三肽均为粉末状，用DMSO溶解。配成母液，浓度为100 mM,储存于-20C。临用时用IMDM培养液将其进行稀释，依次稀释为0.1、1、10、100 M M。DMSO终浓度0.05, 采用Dunnetts双侧T检验；当p图l人参三肽（PGP3）对BV-2小胶质细胞成活率的影响（A）人参三肽对BV-2细胞存活率的影响（B）人参三肽对LPS激活的BV-2小胶质细胞存活率的影响2.2人参三肽对LPS激活BV-2小胶质细胞NO和TNF-a 释放的影响实验结果（图2）显示，人参三肽（10，100 M M）作用24 h后能够显著抑制LPS活化的小胶质细胞株BV-2的NO释放（P

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