检验医学专业实验III临床生物化学检验部分

1、分光光度法测量【理论依据】朗伯比耳定律：当溶液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律，当一束单色光通过一定浓度范围的稀 有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度c（g/l）或液层厚度b（cm）成正比。其定律表达式A=abc （a是比例系数）。当c的单位为mol/l时，比例系数用表示，则A=bc称为摩尔吸光系数。其单位为L/（mol*cm）。它是有色物质在一定波长下的特征常数。分光光度计性能检查波长检查：根据溴甲酚绿在610nm有最大吸收峰，检测722分光光度计的波长测定是否准确。方法：580nm630nm，每5nm测定一次溴甲酚绿（BCG）的吸光度，记录数据。线性检查：根据朗伯比尔定律，溶液吸光度与溶液的浓度成正比。用一种有色物质配成不同浓度，在一定波长及一定浓度范围内确知其服从比尔定律，检查仪器本身是否能够如实的反映有色物质的浓度变化。一、双缩脲法测定血清总蛋白【原理】：血清中蛋白质的肽键在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色化合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中

2、与铜离子形成紫红色的反映相似，故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，其吸光度与血清蛋白含量在一定范围内成正比，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。双缩脲试剂中，酒石酸钾钠的作用：结合Cu2+，防止其在碱性条件下形成CuO沉淀。KI的作用：防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析。【参考范围】健康成人：走动后为6483g/L，静卧时为6078g/L【临床意义】浓度增高见于：血浆浓缩（如急性脱水、外伤性休克、慢性肾上腺皮质功能减退） 、蛋白质合成增加（如多发性骨髓瘤）浓度减低见于：血浆稀释（静注过多低渗溶液、水钠潴留）、营养不良或消耗增加（长期低蛋白饮食或慢性肠道疾病；长期患消耗性疾病）、蛋白质合成障碍（肝功能严重受损、此事宜清蛋白减低最为显著）、蛋白质丢失（严重烧伤、大出血、肾病综合征、溃疡性结肠炎）。二、溴甲酚绿法测定血清清蛋白【原理】：溴甲酚绿（BCG）在pH4.2的环境中，在有非离子去污剂存在时，可与清蛋白（Alb）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰，其颜色深浅在一定范围内与清蛋白含量呈正比，与同样处理的清蛋白标准液比较，

3、可求得血清中清蛋白的含量。非离子去垢剂（Brij-35）的作用：提高蛋白质与染料的结合力及溶解度，提高呈色稳定性。【参考范围】成人为3555 g/L，A/G=1.21.5（1.0称为A/G比例倒置）【临床意义】 清蛋白的主要功能是调节血液的胶体渗透压。28g/L临床上出现水肿。浓度增高见于：严重脱水导致的血浆浓缩浓度降低见于：Alb合成不足/障碍（肝脏疾病，尤其是肝功能严重损害）、Alb的分布异常（门静脉高压）、蛋白质丢失（大出血、烧伤）、Alb摄入不足或消耗增加（见于营养不良、肠道肿瘤、肝功能受损、肾病蛋白尿、结核病伴慢性出血、恶性肿瘤等）。无清蛋白血症(analbuminaemia) ，极少见，患者血清中几乎无Alb相关：质控图绘制【原理】：质控图是一种具有质控界限的图形。以质控品测定结果计算均值和标准差（S），以2S为警告线，以3S为失控线绘制质控图。正常分布：正常分布规律：常见异常图形：一、乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯【原理】：血清甘油三酯（TG）经正庚烷-异丙醇抽提，然后用氢氧化钾皂化，所生成的甘油再被过碘酸钠氧化成甲醛，后者在铵离子存在下与乙酰丙酮反应，生成带荧光的黄色物

4、质即3，5-二乙酰-1，4-二氢二甲基吡啶，颜色深浅与血清甘油三酯浓度成正比。与同样处理的标准液比较，求得其含量。抽提：正庚烷-异丙醇-稀H2SO4皂化：KOH-异丙醇使TG水解生成甘油氧化：甘油 +过碘酸钠（酸性pH）甲酸+甲醛显色：甲醛+乙酰丙酮 （NH4+）3，5-二乙酰-1，4-二氢二甲基吡啶【理想范围】1.7mmol/L二、测定血清总胆固醇【原理】：血清脂类包括甘油三酯、胆固醇、胆固醇酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸。它们在血液中以脂蛋白（脂和载脂蛋白的复合体）的形式存在。用超速离心技术可把血浆脂蛋白分成四大族：CM、VLDL、LDL、HDL，用电泳技术可把血浆脂蛋白分成-脂蛋白、前-脂蛋白、-脂蛋白、CM。血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇FC和胆固醇酯（CE）两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。胆固醇酯 + H2O （胆固醇酯酶） 胆固醇 + 脂肪酸胆固醇 + O2 （胆

5、固醇氧化酶） 4-胆甾烯酮 + H2O2H2O2 + 4-氨基安替比林 （过氧化物酶） 醌亚胺 + H2O【理想范围】5.2mmol/L。升高：5.72mmol/L一、血清钙测定【原理】：血钙+邻甲酚酞络合铜（OCPC） （pH=11.0）紫红色络合物，这种紫红色络合物在575nm处有最大吸收峰，其吸光度与血清钙含量在一定范围内成正比，经与同样处理的钙标准液比较，即可求得血清钙含量。【参考范围】： 成人为1.101.34mmol/L，儿童大约比成人高0.05mmol/L【临床意义】：增高常见于：原发甲亢、恶性肿瘤、维生素D中毒、肾上腺皮质功能降低、骨髓增殖性疾病降低常见于：甲减、慢性肾衰、急性胰腺炎等二、血清磷测定【原理】：无机磷+钼酸铵 H+磷钼酸磷钼酸在650nm处有最大吸收峰，其吸光度与血清磷含量在一定范围内成正比，经与同样处理的磷标准液比较，即可求得血清磷含量。【参考范围】：0.962.10mmol/L【临床意义】血磷受饮食摄入磷的影响较明显，当摄人磷不足时，机体不会像缺钙那样立即动员骨磷人血，而是先出现血磷降低。血清无机磷升高：除见于维生素D 中毒（血钙、血磷均升高）和甲旁减

6、外，以肾滤过磷障碍（如肾衰竭）为常见。另外，也见于多发性骨髓瘤、糖尿病酮症酸中毒治疗前、乳酸性酸中毒、骨折愈合期、肢端肥大症和巨人症等。血磷降低见于：维生素D缺乏、高胰岛素血症、儿童型侏儒症、脂肪泻、甲旁亢和输注大量葡萄糖液后等。三、血清铁、总铁结合力测定【原理】：血清中的三价铁与运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原呈二价铁，与亚铁嗪直接作用生成紫红色复合物，在562nm处有吸收峰，与同样处理的铁标准液比较，可求得血清铁含量。总铁结合力（TIBC）：是指血清中运铁蛋白全部被铁饱和所能结合的铁量。将过量铁标标准液加到血清中，使之与未结合的运铁蛋白结合，多余的铁被碳酸镁粉吸附除去，然后测定血清中总铁含量，即为总铁结合力。为了防止外来铁的污染，实验用水必须经过去离子处理。玻璃器材必须用10%（体积比）的盐酸浸泡24h，取出后再用去离子水冲洗，方可运用。【参考范围】：血清铁：成年男性1130mol/L，成年女性927mol/L。血清总铁结合力：成年男性5077mol/L，成年女性5477mol/L。【临床意义】血清铁：增高见于红细胞破坏过多（如溶血性贫血）、红

7、细胞的再生或成熟障碍（如再障、巨幼贫）。减低见于缺铁性贫血、慢性长期失血、恶性肿瘤等。血清总铁结合力：增高见于缺铁性贫血、急性肝炎等。减低见于肝硬化、肾病、尿毒症和血色素沉着症等。家兔糖耐量（OGTT）试验口服葡萄糖耐量试验是一种葡萄糖负荷试验，用以了解胰岛细胞功能和机体对血糖的调节能力，是诊断糖尿病的确诊试验，广泛应用于临床实践中，对于处于其他疾病急性期的患者，可能需要重复进行以明确糖尿病的诊断。【葡萄糖耐量试验】：是检查人体血糖调节机能的一种方法。正常人在服用一定量葡萄糖后血糖浓度暂时升高，但在两小时内血糖浓度又恢复到空腹水平，称为“耐糖现象”。在服用一定葡萄糖后间隔一定时间测定血糖和尿糖，观察血糖水平以及有无尿糖出现，称为糖耐量试验。若因内分泌失调等因素引起葡萄糖代谢失常时，食入大量糖后血糖浓度可急剧升高，或升高极不明显，短时间内不能恢复原值者即为耐糖现象异常，临床常对症状不明显的患者用糖耐量试验来诊断有无糖代谢异常。【原理】葡萄糖+O2+H2O （GOD）葡萄糖酸内酯+H2O2H2O2+4-氨基安替比林 （POD） 红色醌类化合物【参考范围】空腹3.9-6.1mmol/L，1小

8、时血糖上升至高峰11.1mmol/L，2小时下降7.8mmol/L，3小时下降至空腹血糖。【结果判断】：正常为给糖后121小时血糖浓度迅速上升，2小时后恢复至空腹水平，如果服糖后2小时未降至正常水平，且尿糖阳性，即为糖耐量减低。【临床意义】：确诊糖尿病。了解血糖波动范围，分析糖尿病稳定程度。糖尿病患者空腹血糖与餐后3小时血糖值差距越小越稳定，反之则越不稳定。【注意事项】试验前每天碳水化合物摄入量不少于150克，有正常的体力活动至少3天。 过夜空腹1016个小时。 试验前8小时禁止吸烟、饮酒或咖啡，口渴可以饮水。 被试者应尽量注意休息，不做剧烈的体力活动，避免精神紧张，保持情绪稳定。 将75克葡萄糖溶于300毫升温开水中（或每千克体重口服1.75克葡萄糖，每克糖溶与2.5毫升水中），令受检者一次服下，5分钟内饮毕。 分别于服糖前及服糖后0.5、1、2、3小时各采取静脉血一次，并同时收集尿液标本，测定血糖、尿糖和胰岛素及C肽的数值。赖式法测定血清丙氨酸氨基转移酶【原理】：丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化L-丙氨酸与-酮戊二酸间的氨基移换反应，生成-丙酮酸和L-谷氨酸。经30min反应后，加入

9、2，4-二硝基苯肼终止反应，并与反应液中的两种-酮酸生成相应的2，4-二硝基苯腙（丙酮酸苯腙和 酮戊二酸苯腙）。在碱性条件下，两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在500520nm处差异最大，以等摩尔浓度计算，丙酮酸苯腙的呈色强度约为 酮戊二酸苯腙的3倍。据此可以计算丙酮酸的生成量。L-丙氨酸 + -酮戊二酸 （ALT）-丙酮酸 + L-谷氨酸-酮酸 + 2，4二硝基苯肼 （碱性条件）2，4-二硝基苯腙（红棕色，505nm）【参考范围】525卡门单位【临床意义】ALT在肝细胞中含量量较多，且主要存在于肝细胞的可溶性部分。一、当肝脏受损时，此酶可释放入血，致血中该酶活性浓度增加。ALT是肝细胞损伤的灵敏指标。急性病毒性肝炎时，转氨酶阳性率为80%100%；肝炎恢复期转氨酶正常。但如在100U左右波动或再度上升为慢性活动性肝炎。整整肝炎或急性坏死性肝炎时，再度上升的转氨酶在症状恶化的同时，酶活性反而降低，提示肝细胞坏死后增生不良。预后不佳。慢性活动性肝炎或脂肪肝时，转氨酶轻度增高（100200U），或在正常范围，且ASTALT。肝硬化、肝癌时，ALT有轻度或中度增高，提示可能并发肝细胞坏死，预后很差。其他原因引起的肝脏损害。如心功能不全时，肝淤血导致肝小叶中央带细胞的萎缩或坏死，可使ALT、AST明显升高；某些化学药物如异烟肼、氯丙嗪、苯巴比妥、四氯化碳、砷剂等可不同程度地损害肝细胞，引起ALT的升高其他可引起ALT不同程度增高的疾病或因素：骨骼肌损伤、多发性肌炎等二、 ALT活性降低见于：磷酸吡哆醛缺乏症。

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