四川泸九中高考生物土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案新人教版

1、泸县九中高2011级13年春导学案4课题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标1 .研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。2 .能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数学习重点：对土样的选取和选择培养基的配制。难点：对分解尿素的细菌的计数。课堂组织形式：观看实验录像，课堂小组讨论展示、评价学法指导：提前自学预习，观看实验录像体验实验操作，标有A层完成的之要求A层学生完成。【预习案】一、理论基础1.筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。(3)配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养;的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。2 .统计菌落数目(1)测定微生物数量的常用方法有和。(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够

2、高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。3 .设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。二、实验设计实验设计包括的内容有：、和,具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1 .取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。2 .制备:准备牛肉膏蛋白月东培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白月东培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白月东培养基可以作为,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。3 .微生物的与观察将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250mL),充分摇匀，吸取上清液,转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102依次等比稀释至107稀释度，并按照由

3、107103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白月东培养基。将涂布好的培养皿放在30c温度下培养，及时观察和记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-10的颜色反应。4 .细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。三、实验操作(观看DVD1 .制定计划;先进行然后进行最后进行2无菌操作应注意什么问题？3.在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是。四、实验结果分析与评价1、一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目。这是因为。因此，统计结果一般用而不是活菌数来表示。2、对所需的微生物进行初步筛选，只是分离纯化菌种的第一步，要对分离的菌种进行一步的鉴定，还需要借助的方法。3.不同种类的微生物，往往需要不同的培养和培养。在实验过程中，一般每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以4、一般在相同的、下，同种微生物表现出一包括、等5、分解尿素的细菌能合成将分

4、解为使培养基的二因此在以为唯一的培养基中加入在培养某细菌后指示剂可以初步鉴定该细菌探究案【疑难点拨】问题探究1.PC破术使用而t高温的DNA聚合酶怎样得到（讨论）问题探究2.选择培养基选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的O培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。例1分析下面培养基的配方：KHPO、NaHPMgSO-7H20、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答：（1） 在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别和。（2）想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？问题探究3.如何统计菌落数目思考：从平板上的菌落

5、数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是（平均菌落数一涂布的稀释液体积）x稀释倍数。例2用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中.得到以下几种统计结果，正确的是（）A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230B.涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260,取平均值238C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和2墨6,取平均值163D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250,取平均值233问题探究4.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/Kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧型细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。问题探究5对照试验的设计1.讨论设计对照试验的目的例3用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是（）A.未接种的选择培养基B.未接种的牛

6、肉膏蛋白月东（全营养）培养基C.接种了的牛肉膏蛋白豚（全营养）培养基D.接种了的选择培养基问题探究6体验实验操作1学生阅读P23后讨论2观看实验DVDeIt；土壤中分解尿素的细菌的分离与计数3填写以下实验流程：配制土壤溶液一涂布平板与培养4实验过程1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。2）应在火焰旁称取土壤10g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,塞好棉塞。3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等问题探究7试验结果分析与评价：.完成试验报告册习题与讨论（小组讨论后交流）总结壤尿分菌分与土中素解的离分离筛选微生物的原理微生物计数方法与原理对照设置与重复设置人为而有利于目的菌株生长抑制或阻止其他微生物生长稀释涂布平板法显微镜直接计数计数，一实验设计实验方案一实验操作结果与分析检测案、选择题1 .PC破术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93c左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找（）A.土壤中B,海水中C.热泉中D.冷库中ABCDKHPO、NadHP。

7、、KHPO、NaHPQ、KHPO、N&HPQ、KH2PO、NadHP。、2 .下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是（）MgS07H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水MgS07H20、葡萄糖、琼脂、水MgS0-7H20、尿素、琼脂、水MgS0-7H20、牛肉膏、蛋白月东、琼脂、水;234,那么每克样品中的菌落数是（涂布3 .某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为平板时所用稀释液的体积为0.1mL1-()A.2.34X108B.2.34X109C.234D.23.44 .在做分离分解尿素白细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因（）由于土样不同由于培养基污染由于操作失误没有设置对照A.B.C.D.5 .关于土壤取样的叙述错误的是（）A.土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B.先铲去表层土3cm左右，再取样C.取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D.应在火焰旁称取土壤6 .下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是（）土壤取样称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1mL进行平板涂布

8、依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A.一一一B.一一一C.一一一D.一一一7 .下列关于测定土壤中细菌数量的叙述，正确的是（）A.一般选用103107倍的稀液分别涂布B.测定放线菌的数量，一般选用103、lO4和105倍稀释C.测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释D.当第一次测量某种细菌的数量，可以将101107倍的稀释液分别涂布到平板上培养8 .下列操作需要在火焰旁进行的一组是()土壤取样称取土壤稀释土壤溶液涂布平板微生物的培养A.B.C.D.9 .下列可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()A.以尿素为唯一氮源的培养基中加人酚红指示剂B.以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C.以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹出试剂D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩月尿试剂10 .统计菌落数目一般用稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个,来源于样品稀释液中的一个。计数时一般选择菌落数在的平板计数。11 .在做本课题实验时，一位同学在稀释倍数为106的培养基中涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212和256,该同学以

9、这3个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这一结果是否接近真实值？如果需要改进，如何改进？12 .在做本课题实验时，甲同学筛选出的菌落与其他同学不同，并且他在设计实验时并没有设置对照。思考下列问题：(1)你认为出现甲同学这种结果的原因可能是什么？(2)要帮助甲同学排除可能影响实验结果的因素，需要设置,实验方案有两种：一种方案是可以由其他同学用与甲同学进行实验，如果结果与甲同学一致，则证明甲同学,如果结果不同，则证明甲同学存在操作或的配制有问题。另一种方案是将甲同学配制的培养基在不加的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到。(3)由此问题你得出的启示是什么？(A层学生做)13.下面是发现和研究青霉素的过程：问题：在培养细菌的培养基中,发现青霉菌，在其周围没有细菌生长。没有青霉菌的培养基内布满了细菌。假设：实验：把青霉菌放入培养液内培养，一段时间后除去青霉菌，并用这种培养液培养细菌，观察细菌的生长情况。结果：这种培养液阻止了细菌的生长和繁殖。结论：青霉菌可产生一种阻止细菌生长繁殖的物质。请回答：该实验的假设是。以上实验还不足以论证以上结论，请在以上实验的基础上，补充相应的实验方法。学习报告：本课题还存在的问题、1.C2,A3.B4.A5.C6.C7.B8.D9.D10.A11.D

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