常见蛋白质标签

1、常见蛋白质标签总结2008-12-08 22:06一、氨基酸标签(含小肽标签)A stretch of amino acids is added to the protein and enables the recovery of thelabelled protein by its unique affinity. Usually its easiest to add thetag toeither endof the protein to ensure its accessibility and not to disturb the protein folding组 氨酸标签(Histag)一般为6个组氨酸，用Ni2+ (Cu2+)亲和层析纯化FLAG tag:N-DYKDDK-C, recovered with specific antibodyHA tag:an epitope derived fromthe In flue nza protei n haemaggluti n (HA,禽流感病毒 血凝素)，e.g. N-YPYDVP-C, recovery with an H

2、A antibodyMYC tag:an epitope derived from the human proto-oncoprotein MYC, e.g.N-ILKKATAYIL- C, N-EQKLISEEDL-C, recovery with an MYC antibodySBP tag：Streptavidin Binding Peptide,链霉亲合素结合肽,38 amino acid tag(MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP)，更多参考在 SigmaCBP tag:钙调蛋白结合肽(CBP;26aa)钙调蛋白结合肽与钙调素结合是Ca2+依赖 的，这种结合不受标签所处的位置影响(N端和C端均可)，在中性pH条件下 使用2mM EGTA可以很方便的将目标蛋白洗脱下来。这一系统有如下优点：1特 异性很高，因为大肠杆菌没有可以和钙调素结合的蛋白；2与His标签相比可以 在强还原性条件下纯化。纤维素结合肽（CBD）：能与纤维素介质特异性的结合，可以在温和的条件下洗脱（乙二醇或低盐条 件）,pETCBD载体含有纤维素结合肽（CBD）的序列，可

3、方便构建。二、蛋白质标签Rather than adding only a few amino acids a whole protein is fused to the protein tobe purified or detected. The affinity of the attached protein enables the recovery oft he artificial fusion protein. As for the peptides, the protein tag is added to eitherend of the target protein.GST tag:the small glutathione-S-transferase （GST; 26 kDa） , recovery by affinityto substrate glutathione bound to a column, e.g, glutathione sepharoseMBP tag：麦芽糖结合蛋白（MBP;40kDa）载体：pMALIMPACT:Intein Mediated

4、Purification with an affinity Chitin binding Tag （几丁质结合 肽）硫氧还蛋白：Thioredoxins are proteins that act as antioxidants by facilitating thereduction of other proteins by cysteine thiol-disulfide exchange.Protein A：a 40-60 kDa MSCRAMM surface protein originally found in the cell wallof the bacteria Staphyloccus aureus. It has found use in biochemical researchbecause of its ability to bind immuno globulins. It binds proteins from many ofmammalianspecies, most notably IgGs. It binds with the Fc region o

5、fimmunoglobulins through interaction with the heavy chain.Protein A/G：D. Protein A/G also binds to all subclasses of mouse IgGbut does not bind mouse IgA, IgM or serumalbumin.GFP:绿色荧光蛋白（GFP;三、化学标签biotin-streptavidin （生物素链霉亲合素）linking amino acids, often lysines, tocofactor and vitamin biotin purification by tightbinding to streptavidin agarose or beads Streptavidin is much less soluble in water than avidin, and it lacks avidins extensiveglycosylation. Streptavidin has a mildly acidic isoelectric

6、point （pl） of 5.蛋白标签蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合 表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随 着 技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前， 这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。美国GeneCopoeia (复能基因)为客户提供50多种蛋白标签，可以满足客 户的不同需求，包括各种最新型的标签，女口：SNAP-TagFHaloTag叫AviTagTM八Sumo等;也提供齐全的各种常用标 签,如 eGFP、His、Flag 等等标签。以下是部分蛋白标签的特性介绍，更加详细的介绍可在查询克隆产品的结 果 12列表里面看到各种推荐的蛋白标签和载体。标签His6FlagGSTMBPHis-MBPHAeGFP/CFP/YFPMycHis-MycHis-AviTagSumoHis-SumoSNAP-TagHalo Tag纯化+t+促进溶解度+/ .+/ +抗体效价 +/ +细 胞标记+T rxHISHis6是指六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目

7、的蛋白的C末端或N 末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的 结构特征（结合配体）利于纯化。组氨酸残基侧链与固态的有强烈的吸引力， 可用于固定化金属螯合层析（IMAC），对重组蛋白进行分离纯化。使用His - tag 有下面优点：标签的分子量小，只有0.84KD,而GST和蛋白A分别为26KD和30。,一般不影响目标蛋白的功His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯 化，前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用，后者在纯化包涵体蛋白时特别有用， 用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白，使复性不受其它蛋 白的干扰，或进行金属螯和亲和层析复性；His标签融合蛋白也被用于蛋白质蛋白质、蛋白质 DNA相互作用研究；His标签免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射动物进行免疫并制 备抗体。可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。Flag标签蛋白Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDK），同时载体中构 建 的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。F

8、LAG 作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以F优点：FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通 常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游 研究。融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性 纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot. ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。融合在N端的FLAG,其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋 白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋 白相互作用等相关领域。MBP （麦芽糖结合蛋白）MBP （麦芽糖结合蛋白）标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因 编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP 标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果 蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。纯化：融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化。结

9、合的融合蛋白可用10mM麦 芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。结合亲和力在微摩尔范围。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100 或0.25%Tween20存在下不能有效结合，而其他融合蛋白则不受影响。缓冲 条 件为pH7.0 至I8.5,盐浓度可高达1M,但不能使用变性剂。如果要去除MBP融合部分，可用 位点特异性蛋白酶切除。检测：可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测。GST （谷胱甘肽筑基转移酶）GST （谷胱甘肽筑基转移酶）标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用 的转移酶，它的天然大小为26KD。将它应用在原核表达的原因大致有两个，一个 是因为它是一个高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性；另一 个是它可以在大肠杆菌中大量表达，起到提高表达量的作用。GST融合表达系统 广泛应用于各种融合蛋白的表达，可以在大肠杆菌和酵母菌等宿主细胞中表达。 结合的融合蛋白在非变性条件下用10mM还原型谷胱甘肽洗脱。在大多数情况 下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二体。GST标签可用酶学分析或免疫分析很方便的检测。标签有助于保护重组蛋白 免受胞外蛋白酶的降解并提高其稳定性。在大多数情况卜GST融合蛋白是完全或 部分可溶的。纯化：该表达系统表达的GST标签蛋白可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱 甘肽琼脂糖凝胶（Glutathione sepharose）亲和树脂进行纯化。GST标签蛋白可在 温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在变性 条 件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂 如：盐酸呱或尿素等。如果要去除GST融合部分，可用位点特异性蛋白酶切 除。检测：可用GST抗体或表达的目的蛋白特异性

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