包头医学院微生物学与微生物检验实验指导之实验5 金黄色葡萄球菌的检测
3页1、实验5 金黄色葡萄球菌的检测目的要求1、 掌握金黄色葡萄球菌检测的基本程序2、 熟悉金黄色葡萄球菌检测的基本方法与步骤。器材和试剂1样品 可疑奶粉 2培养基及试剂 普通营养琼脂平板、血琼脂平板、却普曼琼脂平板、7.5%NaCl肉汤培养基、甘露醇发酵管(微)、甲苯胺蓝DNA琼脂平板、葡萄糖微量发酵管、新鲜抗凝血浆(人或兔)。3其他 接种环、接种针、载玻片、革兰染液、香柏油、擦镜液、生理盐水。步骤和方法一、检验程序1:10奶粉稀释液 7.5%NaCl肉汤增菌 直接计数 血平板和却普曼琼脂平板 观察菌落特征,革兰染色镜检 血浆凝固酶试验、甘露醇试验 耐热核酸酶试验、肠毒素测定等二、检验方法1、样品的采取和送检(1)散装或大型包装的乳品检样:用灭菌刀、勺取样。在移采另一件样品前,应将用过的刀、勺清洗灭菌。采样时应注意不同的部位、使样品有代表性。样品仿品放入灭菌器内,及时送检。(2)小型包装的乳品检样:应采取整件包装,奶粉1瓶或1包。采样时应注意包装的完整性。(3)成批产品质量的检样:采样量一般以1的比率抽取,应注意代表性,不足千件者抽取1件。2、检样处理(1)罐(瓶)装乳粉:将罐或瓶表面先用温
2、水洗净,再用点燃的酒精棉球消毒瓶或罐的上表面,然后用灭菌的开罐器打开罐或瓶面,以无菌手续称取25g检样,放入装有玻璃珠的三角烧瓶内,然后徐徐加入225ml温热的灭菌生理盐水,(先加少许使乳粉调成糊状,再全部加入,以免奶粉结块)。振摇均匀,使充分溶解后即为1:10稀释液。(2)袋装乳粉:可用75%的酒精棉球擦拭消毒袋口后,以无菌手续开封取样。以后操作同罐(瓶)装乳粉。3、 增菌培养:用无菌吸管吸取上述稀释液5ml加入7.5%NaCl肉汤或胰酪胨大豆肉汤45ml培养基内,置37温箱培养24h。再肉汤中呈浑浊生长,胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清,菌量多时呈浑浊生长。4、 分离培养:直接取可疑奶粉或增菌培养物划线接种至血平板或却普曼琼脂平板,经37孵育18-24h后观察菌落。取可疑菌落做革兰染色镜检。根据形态染色特性,然后进一步做生化反应鉴定。5、 生化反应(1)触酶试验:本试验用于初步区别葡萄球菌和链球菌,前者为阳性,后者为阴性。(2)血浆凝固酶试验:1)原理:致病性葡萄球菌产生的一种能凝固人和兔血浆的蛋白质。可分为两种: 结合型血浆凝固酶直接作用于血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表
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