包头医学院微生物学与微生物检验实验指导之实验2培养基制备技术
3页1、实验2 培养基制备技术目的要求1. 掌握培养基制备的基本过程。 2熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。器材和试剂1.试剂 牛肉膏、氯化钠、蛋白陈、琼脂粉、抗凝绵羊血、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、葡萄糖、乳糖、甘露醇、柠檬酸钠、硫酸镁、磷酸二氢铵、硝酸钾、硫代硫酸钠、柠檬酸铁、硫酸亚铁、尿素、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红、酚红、lmol/LNaOH、lmol/LHCl。2.器材 5OOml锥形瓶、5OOml量筒、lOml、5ml和1ml吸管、精密pH试纸、华氏试管、硅胶塞、天平、高压蒸气锅、血清凝固器、脱脂棉、滤纸、漏斗、无菌平皿。步骤和方法1.培养基制备的基本过程 包括调配成分、溶解、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、质量检查和保存。(1)调配成分:按培养基组成准确称取各成分用量,放人锥形瓶或大容量烧瓶中,加一定量蒸馏水,使其充分混合。应注意染料、胆盐和指示剂等应在矫正pH后加入。(2)溶解:将调配好的混合物在沸水浴或流动蒸气灭菌器中,使其完全溶解。不可将培养基装在铜铁容器中加热,因培养基中含铜量超过0.3mg/L时,细菌不易生长;含铁量超过0.14mg/L时可抑制细菌毒素的产生。(3)矫
2、正pH:一般将培养基的pH凋至7.27.6左右。经高压灭菌后其pH可发生0.10.2变动。若用NaOH矫正,高压灭菌后pH下降0.l0.2;若用NaCO3矫正,高压灭菌后pH升高0.1一0.2。(4)滤过澄清:自配的培养基通常有一些混浊或沉淀,需滤过澄清后方可使用。液体或半固体培养基常用滤纸过滤,固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。(5)分装:1)基础培养基:一般分装于锥形瓶灭菌后备用,以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等;2)琼脂斜面:通常在熔化后分装于试管,量约为试管高度的1/41/3,加塞后灭菌,趁热摆成斜面,斜面长度约为试管长度的2/3,且保持试管下端有lcm柱高;3)半固体培养基:分装量为试管容量的1/41/3,加塞灭菌后趁热直立凝固;4)琼脂高层培养基:分装量为管长的2/3(接种厌氧菌用),灭菌后趁热直立凝固;5)琼脂平板无菌分注:先将灭菌琼脂熔化后冷却至5O0C左右,以无菌操作倾注于灭菌平皿内(内径90mm的平皿约1315ml),水平旋转平皿,待琼脂凝固后将平皿翻转,置40C保存备用。(6)灭菌:1)由耐热物质配制成的培养基(如普通营养琼脂等)常用高压蒸
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