结核感染T细胞检测T-SPOT简介与临床应用

1、汇报人：XXX 单位：XXX结核感染T细胞检测（T-SPOT.TB）简介与临床应用结核病T-SPOT临床应用ABC目录A结核病1结核-定义u 肺结核（pulmonary tuberculosis）是结核分枝杆菌复合群（mycobacterium tubercuolsis complex,简称结核分枝杆菌或结核菌）引起的慢性肺部感染性疾病，占各器官结核病总数的80%-90%，其中痰中排菌者称为传染性肺结核病。1结核-流行病学u 结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，WHO已将其列为重点控制的传染病之一。据WHO估计全球有1/3人口已感染了结核杆菌，每年约有 800万感染者发展为活动性结核病。u 中国是世界上22个结核病高疫情国家之一，患者总数仅低于印度而居世界第二位。2000年全国第四次结核病流行病 学抽样调查结果为：活动性肺结核患病率为367/10万，菌阳及涂阳肺结核患 病率各为160/10万及122/10万。1结核-危害u 结核病可侵及全身各器官，其中肺结核为最常见类型，约占85%，菌阳，尤其涂阳肺结核患者是主要传染源，是防治的主要对象。在肺外结核病中，淋巴结结核、结核性胸膜炎、骨

2、关节结核、泌尿生殖系结核病较多见，此外，还有结核性脑膜炎、结核性心包炎、肝、脾结核、脑结核等。u 结核病常因各种不同的相关症状而首诊于综合医院临床各科，据统计，80%以上肺结核患者首诊于综合医院。在内科日常诊疗工作中，无论是长期发热、慢性咳嗽、咳痰、咯血、胸腹腔、心包腔积液及肺部异常阴影等的病因学诊断，结核病是常需注意 鉴別的重要病种之一。1结核-分类2001年7月我国卫生部公布了新的【结核病分类】(WS196-2001)，将结核病分为：u 原发性肺结核；u 血行播散性肺结核；u 继发性肺结核；u 结核性胸膜炎；u 其他肺外结核。1结核-分类u 原发性肺结核乃是指初次感染结核分枝杆菌而发病者，包括原发综合征及胸内淋巴结结核。血行播散性肺结核乃是由于机体免疫功能低下，变态反应性增高，肺内原发灶、胸内淋巴结或其他脏器病变内的大量结核分枝杆菌于短期内进入血液循环而引起肺部乃至全身播散性结核病，共包括急性、亚急性及慢性血行播散性肺结核。继发性肺结核乃是指原发感染后体内潜伏病灶内的结核杆菌因免疫功能低下等各种诱因重新繁殖、病变活动而发病内源性“复燃”，少数患者也可因再次感染结核分枝杆菌而发病外源

3、性再染。1结核分枝杆菌u 结核分枝杆菌（M.tuberculosis），俗称结核杆菌（tubercle bacillus），是引起结核病的病原体。1882年由德国细菌学家郭霍（Robert Koch，1843-1910）发现并证明为人类结核病的病原菌，该菌可侵犯全身各器官，但以引起肺结核最多见。结核病是一种古老的疾病，全球广泛分布，是细菌感染性疾病致死的首位原因。1结核分枝杆菌-特性u 专性需氧。最适温度为37，低于30不生长。u 结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。结核菌在含氧40%50%并有5%10%CO2和温度为365，合适PH值为6.87.2的条件下生长旺盛。在一般培养基中每分裂1代需时1824小时，营养丰富时只需5小时。1非结核分枝杆菌（NTM）u 非结核分枝杆菌病是指感染了NTM，并引起相应器官或组织病变。u 迄今为止，共发现NTM菌种154种，NTM可以侵犯人体肺脏、淋巴结、骨骼、关节、皮肤和软组织等组织器官并可引起全身播散性疾病。人可从环境中感染NTM而患病，水和土壤是重要的传播途径。u NTM病发病率明显增长，其发病约占结核病的十分之一。

4、已成为人们关注的重要课题。1结核感染接触活动性结核病患者暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除-没有症状,结核杆菌仍旧存在而不能被侦测 - X-光/ CT 扫描显示正常-没有抗体应答-诊断困难-传统的结核感染检测只有 TST（PPD）机体被感染受机体免疫力抑制没有临床症状终身处于感染状态潜伏感染有临床症状具有传染性-结核杆菌可以通过涂片、培养检测出-胸部的 X-光或 CT 扫描显示异常 -肺外结核难以诊断 (特别是儿童)活动性结核5%5%再次激活BT-SPOT2T-SPOTu 结核感染T细胞斑点检测（T-SPOT.TB）是采用-干扰素释放（IGRA）原理，结合酶联免疫斑点技术（ELISPOT），对机体进行结核杆菌感染检测的方法。u 寻找患者体内是否存在结核致敏的T淋巴细胞。2T-SPOTu 分析流程2T-SPOTu 阴性结果意义 排除结核感染排除结核病帮助临床鉴别诊断u 阳性结果意义结核感染结合临床综合判断怀疑2T-SPOTu 假阴性感染阶段不同（窗口期）；少数免疫系统功能不全/基础疾病的情况，如HIV感染者、肿瘤患者、婴幼儿等；样本不正确保存与运输、实验非正常操作 u 假阳性假阳性可

5、能是堪萨斯、苏氏、戈登或海分枝杆菌4种环境分枝杆菌（NTM）感染引起的2T-SPOT-原理u 原理：干扰素释放试验u 方法：酶联免疫斑点法u 抗原： ESAT-6与CFP 10-干扰素释放实验（IGRA）2T-SPOT-原理u 原理：干扰素释放试验u 方法：酶联免疫斑点法u 抗原： ESAT-6与CFP 10酶联免疫斑点技术（ELISPOT）2T-SPOT-特点u 细菌学检查：涂片染色、培养、药敏鉴定 : 是结核病诊断的金标准，但涂片阳性率低，培养又耗费时日u 分子生物学检查： PCR、基因芯片等： 虽然快速、灵敏，但操作烦琐、技术要求高u 结核抗体诊断：诊断价值有限，但其简便、快速，可以作为结核病的辅助诊断方法之一u PPD（TST）实验：传统的结核感染检测方法，对于接种过卡介苗(BCG)或环境分枝，杆菌感染的受试者会出现一定的假阳性结果，对于使用激素或免疫抑制剂的受试者会出现一定的假阴性结果相比结核病的常规诊断方法2T-SPOT-特点u 内窥镜诊断：纤维支气管镜、胸腔镜：侵入性大，患者接受性差u 影像学诊断：胸片、CT、MRI、PET：具有一定的主观性u 病理学诊断：具有侵入性，标

6、本获取不易相比结核病的常规诊断方法2T-SPOT-特点u 特异性好，不受卡介苗（BCG）接种和环境分枝杆菌影响u 灵敏度高，在免疫力低下/受抑制人群中有很高的检出率u 标本的获取，肺外结核u 快速，24小时报告结果相比结核病的常规诊断方法2T-SPOT-原理国内临床数据T-SPOT.T-SPOT.TBTB合合 计计试验组试验组对照组对照组阳阳 性性6246243030654654阴阴 性性3131478478509509合合 计计65565550850811631163灵敏度=95.3%；特异性=94.1%；阳性预测值=95.4%；阴性预测值=93.9%2T-SPOT-优势ELISAELISPOT相同点均属于IGRA ，细胞免疫范畴，检测致敏的淋巴细胞，均需要过夜孵育不同点常规ELISA实验；不提取细胞，只对全血体积标准化；酶标仪读取结果，为浓度值；免疫斑点法；提取细胞，对细胞数量进行标准化；计数斑点个数，为细胞反应频率值；优点第一天无细胞处理，简便方法学灵敏度高；非血标本检测；无需标准曲线，无额外试剂浪费；细胞的提取和计数做到标准化，去除血清中的感染因素缺点灵敏度稍差，背景干扰，没有

7、做到真正的标准化，需要标准曲线，细胞提取和计数，操作过程较多2T-SPOT-优势灵敏度高2T-SPOT-优势临床应用u 非血标本的检测：临床应用广，适用于多种体液标本u 临床意义较大，病灶部位淋巴细胞聚集性高，疾病诊断u 配置细胞悬液，细胞保持营养环境，保持活性u 细胞提取，保证参与反应的细胞数量不会过多或是过少u 可去除体液中更复杂的背景干扰u 诊疗指南和专家共识：国内外多个指南给出应用方向（风湿、消化）（指南中提到的IGRA均不包括国内项目）u 免疫力低下人群检出率更好（应用人群拓展：儿童、移植、肾透析）2T-SPOT-优势结果读取斑点数u 结果直观，无需再做标准曲线，无试剂浪费u 代表的是阳性反应细胞，比干扰素浓度更能反应机体感染情况u 与疾病程度成正比（统计学上），多数文章有报道其他u 实验要求，采血、及孵育时间u 抗原专利，在国际上发表文章不会涉及知识产权问题u 科研性强：斑点数（和疾病相关性）的研究，非血的研究u 客户类型：标杆性医院多，使用频率高，可参考的数据量大（案例、文章多）C临床应用3临床应用u 呼吸系统疾病与结核的鉴别诊断u 菌阴肺结核的辅助诊断u 胸水/心包积液

8、的鉴别诊断u 胸片阴影待查患者的结核排筛u 不明原因发热患者的结核感染排筛u 特殊人群（如矽肺）的结核排筛呼吸科中的应用3临床应用Plos One ( March 13, 2012)（3.73分）导致假阳性结果的可能性分析：肺部疾病组最大的因素为年龄，肺外疾病组为结核史3临床应用u 不明原因发热患者的结核感染排筛u 免疫力低下患者肺外结核的辅助诊断u 卡介苗接种人群的结核感染筛查u HIV感染者并发结核的筛查感染科中的应用3临床应用3临床应用3临床应用u 生物制剂/免疫抑制剂治疗前后的结核筛查（如抗TNF药物的使用）u 大剂量激素治疗前后的结核筛查u 自身免疫性疾病与结核的鉴别诊断u 发热待查患者的结核排筛风湿科中的应用3临床应用Respirology (2010) 15, 6036223临床应用发病率 /100.000 患者/年Dixon W G et al. Ann Rheum Dis 2010;69:522528.Tubach et al. Arthritis & Rheum 2009; 60: 1884-1894发病率 /100.000 患者/年 抗TNF药物与结核3临床应用u 1、克罗恩病（CD）与肠结核（ITB）的鉴别诊断u 2、腹水待查患者结核的鉴别诊断u 3、生物制剂/大剂量激素治疗患者的结核筛查u 4、不明原因发热患者的结核感染排筛消化科中的应用3临床应用u 儿童发热的结核感染排筛u 原发性结核的鉴别诊断u 儿童肺外结核的鉴别诊断（卡介苗接种致使PPD的诊断效能下降，儿童肺结核干咳、不排痰等）儿科中的应用谢谢观看

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