细菌标本片的制备及染色.docx

细菌标本片的制备及染色目的要求 能利用不同的材料进行细菌标本片的制备，会进行常规染色，并认识细 菌的不同染色特性仪器及材料 酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美蓝染色液、革兰氏 染色液、瑞氏染色液、染色缸、染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜纸、 细菌培养物（大肠杆菌、葡萄球菌等）、细菌病料、无菌镊子和剪刀、特种铅笔等方法与步骤 4大步：涂片T干燥T固定T染色（一）病料触片、美兰染色1•触片（抹片）用剪刀和镊子将剪刀和镊子在火焰上灼烧灭菌，稍冷却后，用镊子固定病料一角，剪刀剪下，将 切面在玻片上涂抹或压印剪刀和镊子用完后一定要灭菌；整个操作过程始终在酒精灯附近进行2•干燥触片涂面向上，置火焰上方约20cm处加热干燥3•固定 固定的方法因染色方法不同而异美兰染色和革兰氏染色用火焰固定1） 火焰固定 是最常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上方约10cm处来 回通过数次，以手背触及玻片微烫手为宜2） 化学固定 血片、组织触片用瑞氏或姬姆萨氏染色时，用甲醇固定固定的目的是使菌体蛋白质凝固，形态固定，易于着色，并且经固定的菌体牢固黏 附在玻片上，水洗时不易冲掉兼有灭菌作用。

4・染色 在经火焰固定的抹片上,滴加美蓝染色液覆盖整个涂面，染色2〜3min，水洗，晾干或吸水 纸轻压吸干，镜检结果：病料和细菌都呈蓝色二）细菌培养物涂片、革兰氏染色1•涂片取洁净的玻片一张，把接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌后，取1〜2环的 无菌生理盐水，放于载玻片的中央，再将接种环灭菌，冷却后，无菌操作从固体细菌培 养物上挑取菌落或菌苔少许，与生理盐水混匀，作成直径1cm的涂面接种环使用前后都需灼烧灭菌整个操作过程始终在酒精灯附近进行若为组织病料，则用烙刀和接种环进行涂片方法为：用烙刀在病料表面某处进行 烧烙T烙刀灭菌后在烧烙处切口 T接种环灭菌后从切口处伸入取病料T将病料涂于玻 片上做成涂面2•干燥触片涂面向上，置火焰上方约20cm处加热干燥3・固定 火焰固定 玻片涂面向上，在火焰上方约10cm处来回通过数次，以手背触 及玻片微烫手为宜4•染色 紫T碘T酒T红(1) 在固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，染1〜3min，水洗2) 加革兰氏液媒染，作用1〜2min，水洗3) 加95%乙醇(精)脱色约30s至1min，脱至稀薄部分基本无色，水洗4) 加稀释石炭酸复或沙黄水溶液复染30s左右，水洗，吸干后镜检。

结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色;革兰氏阴性菌呈红色。