长春碱的提取分离.docx

1. 长春碱简介分子式：C46H58N4O9长春碱 R=CH；长春新硼R-CHO性质： 又称长春质，又名长春花碱「引噪类生物碱存在于夹竹桃科植物长春花中相对分子质量810.96，针状结晶（甲醇），熔点211-216.溶于醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿，几乎不溶于水和石油醚硫酸盐 C46H60N4O13S，熔点 284-285.2. 长春花简介学名：catharanthusroseus⑴基本资料：英文名：Madagascar periwinkle科属：夹竹桃科，长春花属别名：五瓣莲、日日草、山矶花形态特征：多年生草本，做一年生栽培，全草长30-50cm叶对生， 长椭圆状，基本楔形，短柄，全缘，两面光滑，主脉白色明显，长 3-6cm，宽1. 5-2. 5cm，先端钝圆，具短尖花单生或数朵腋生， 花筒细长，约3cm，花冠五裂片，花色为蔷薇红，纯白及白色，喉部 具红黄斑萼片线状气微，味微甘、苦花期春至深秋此植物， 喜欢温暖、稍干燥和阳光充足的环境，若生长在荫庇处，叶片会发黄、 落叶⑵药用历史及药用前景：长春花最早为观赏植物，也为南非、斯里兰卡和印度等的传统民 间用药，多用于治疗糖尿病，后被发现具有抗癌作用，现为国际上应 用最多的抗癌植物之一，在中国长春花作为药用，始于《植物名实图 考》，主要产于非洲及中国南方各省区。

随着当今世界肿瘤发病率日益增高，对抗肿瘤药物的需求与日剧 增，长春花具有显著而独特的抗肿瘤作用，已成为当今抗肿瘤的重要 药物，由于传统方法提取生物碱收率低，故化学合成和生物合成技术 已应用于该领域，今后在扩大长春花生物碱的来源和产量的同时，应 着眼于降低生物碱的毒性和增强对肿瘤细胞的靶向性，将长春花的抗肿瘤作用更好的用于临床3. 长春花中长春碱的提取首先取成熟的长春花地上全株，烘干，待用1） 所用试剂：苯6%酒石酸溶液 氯仿，氨水 无水乙醇，5%硫酸 甲醇 氧化铝蒸馏水 75%乙醇⑵基本思路：长春花 预处理 提取 A ► ►过滤 ,萃取 ,浓缩 ,溶解—.再浓缩 萃取层析一.提取——.成品一.精制（2） 具体流程：长春花全草干粉11： 0.3 （生药：水）拌匀加生药的1.5倍量苯冷渗渗出液6%酒石酸萃取酸水液氨水调节ph6〜7氯仿萃取氯仿液静置、脱水、减压蒸干总生物碱加1.5倍甲醇溶解、过滤异长春碱晶体甲醇滤液减压蒸干、抽松纯化总生物碱①加无水乙醇（2g/ml）⑤ ②加5%体积分数硫酸与无水乙醇的混 合液调节ph至3.8~4.1、放置生物碱硫酸盐结晶⑥ 加水溶解、加氨碱化、加氯仿提取氯仿液加无水硫酸钠、兑水、蒸干游离弱碱⑦ 氧化铝柱色谱层析，苯一氯仿（1:2）洗脱溶于无水乙醇加5%无水乙醇 与硫酸的混合液调节 ph 至 3.8~4.1， 放置硫酸长春碱I 溶于无水乙醇 加5%无水乙 醇与硫酸的混 合液调节 ph 至 3.8~4.1， 放置硫酸长春新碱⑧1⑧刖段（长春碱） 中段（长春次碱） 后段（长春新碱）具体说明：① 渗漉：长春花全草干粉（过80目筛孔），加自来水以1:0.3的比例拌匀，放置约0.5小时，投入预先放好苯的渗漉桶中浸没，加盖 密闭48小时后开始渗漉，随时添加苯以防表面流干。

② 萃取：收集生药粉5倍量的苯渗漉液，与6%的酒石酸在四支串连的玻璃管中，进行液液逆流萃取，当第一管的酸水PH为4时， 放出，换入新配置的酒石酸溶液继续萃取，直至苯液全部交换完， 放出1〜3管中的酸水液，置分液漏斗中③ 再萃取：先加入0.4倍的氯仿，然后加约14%氨水调节PH至6〜7,振摇，放出氯仿层，以后又用水溶液体积的0.2倍氯仿振摇3次， 氯仿提取液静置去水减压蒸干，然后加少量丙酮抽松，得总弱 生物碱④ 纯化：将总弱生物碱加1〜1.5倍甲醇溶解，放置过夜，滤去结晶，收集甲醇滤液减压蒸干、抽松⑤ 再纯化：将上一步得到的游离碱加0.5倍无水乙醇溶解成浓溶液，然后加5%硫酸乙醇溶液至PH3.8〜4.1，放置过夜，析出混合长春 碱硫酸盐滤出结晶⑥ 萃取提纯：将上步的结晶，加1.5〜2倍的蒸馏水溶解，移入分液漏斗中，先加1.5倍量氯仿，然后加约14%的氨水调节PH至8〜9, 摇晃，将游离碱提入氯仿，直至最后振摇的氯仿不呈现明显的生 物碱反应为止，共约提6次，氯仿提取液加无水硫酸钠干燥，滤出硫酸钠，滤液减压蒸干，得纯化游离弱碱⑦ 长春碱长春新碱的分离：将上述纯化游离弱碱，在真空干燥器中充分干燥后，按1g用30g氧化铝的比例，在氧化铝柱上层析分离， 洗脱溶剂为苯一氯仿混合液（相对密度1.30）。

⑧ 后处理：将前段洗脱液抽干（放入P2O5的真空干燥器中干燥 12小时以上），称重，加无水乙醇1.5〜2倍溶解，再加5% 的硫酸乙醇混合液调节PH至2.8〜4.1，密塞再25C下放 置48小时，析出长春碱硫酸盐结晶，滤出少量无水乙醇， 立即移至真空干燥器中干燥，即为硫酸长春碱粗品中段洗脱液为长春次碱及交叉混合物后段洗脱液经减压蒸干，置真空干燥器中干燥后称重， 加无水乙醇1.5〜2倍溶解，再加5%硫酸乙醇混合液调节PH 至3.8〜4.1 “（偏3.8），在25C下放置48小时，析出的晶 体即为长春新碱的硫酸盐粗品⑨精制：（补充）加蒸馏水和甲醇使硫酸长春碱粗品在60C左右全部溶 解，过滤，容器用甲醇洗涤，滤液合并，减压回收甲醇，立 即将150倍量预先加热至沸的无水乙醇加入，迅速摇匀后放 置，很快析出白色结晶，放置一段时间之后，滤出针晶，干 燥，既得硫酸长春碱精品，熔点284C硫酸长春新碱粗品加少量甲醇溶解，过滤，减压浓缩掉 部分甲醇，加入30倍量无水乙醇摇匀，放置过夜，滤出析 出的结晶，放置于干燥器中抽干，即为精制硫酸长春新碱， 熔点218〜220C4. 长春碱结构分析的一般思路：作为结构较复杂的吲噪类生物碱，长春碱的结构分析，必须采用多种 方法，统筹分析，面面俱到。

主要介绍各个方法在此的作用：⑴生物碱分子的化学裂解法：主要作用是了解N原子在分子中的结合状态，主要有Hofmann 降解法和Emde降解法⑵波谱分析：① 紫外光谱（UV）:主要用于分析分子结构中的共轭系统随 共轭体系的差别，紫外光谱各异② 红外光谱（IR）：测定分子结构中的特殊功能基，如：氨基、 酚羟基、羰基、芳烃基、酯基等，尤其是对不同化学环境羰基的吸收 峰特征性比较强以下对比硫酸长春碱和硫酸长春新碱的红外图：PhotaMark- Unregistered 'VersionVinbl^tine SulfateJOOO4000.0 3000,0 2000.0 1500.0 1000.0 500.0pB Cpajetion. of 泡SoIllUoui method (Dicasmcd as a sduiion in.讨]1£口小“旗 br顷iilik opu-l^lI plme.thickness of cell： 04 mm)硫酸长春碱红外光谱图PreparadGn of sampk: Soluticim method [measaJicd as a soliihos an chloroloxm! poc^sium bromide ofuicol pJ4Kc? tJiicfcoeis of ceJl: Q. ] mm)硫酸长春新碱红外光谱图③质谱：主要用途是：a：通过辨认图谱中的分子离子峰，可以了解化合物的分子量， 分辨质谱还可以推算分子式。

b：通过质谱裂解碎片的分析，可推算生物碱的结构类型，再结合其它波谱数据综合分析，最后确定结构式5.长春花中长春碱的含量分析:i=jI三m薄层扫描法及薄层一紫外分光光度法是常用的方法，两种方法测定结果基本一致，前法快速、灵敏、简便，后法不需特殊仪器设备6.参考资料：1. David E. Thurston抗癌药物的化学与药理学2. 徐怀德天然产物提取工艺学3. 韩公羽，沈企华，韩绍玫 中国人最应知道的植物药有效成分4. 杨红天然药物化学基础（供高职高专使用）5. 潘百红园林花卉学6. 国家中医药管理局科技教育司组织中药化学7. 祖元刚长春花生活史研究8. 中国医科大学学报1995.26（3）9. 赵中振，肖培根 当代药用植物典（第三册）10. 何凤梅 常用药与新药600种。