精华土壤中放线菌的筛选即其抗菌谱的测定实验论文.doc

SHANDONGＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ试验论文土壤中产抗生素放线菌的挑选及抗菌谱的测定作者：天奇666666 2021 年 06 月精品.目录摘要 31、引言 42、试验材料与方法 42.1材料 42.1.1 土壤样品 42.1.2 培育基 42.2 试验方法及步骤 52.2.1 放线菌的分别及正确土壤稀释浓度的挑选 52.2.2 放线菌纯化培育 52.2.3 储存备用菌株 52.2.4 供试菌液配置 52.2.5进行拮抗试验 53、试验结果与分析 63.1试验结果表（表二） 63.2试验照片 63.3试验结果分析 74、结论与争论 74.1结论 74.2争论 85、参考文献 8精品.摘要本次试验选取了学校八个采样点进行采样，通过土壤悬液稀释进行固体培育基涂布培育，分别纯化出对其他微生物有拮抗作用的放线菌，使用牛肉膏蛋白胨固体培育基和PDA培育基进行抗菌谱测定；本次试验以双管齐下的方式分别进行主试验与次试验，保证了试验重复性并极大节约了时间，试验过程分两批进行，主试验通过培育细菌与真菌菌液，涂布牛肉膏蛋白胨固体培育基平板分别出了五珠无拮抗作用的放线菌，次试验通过点接的PDA培育基的方式分别出一株对枯草芽孢杆菌有抗性而对黑曲霉有稍微抗性的放线菌菌珠；关键词：土壤、放线菌、拮抗作用精品.1、引言 土壤----作为生物生存一种基本的资源，其中隐藏着庞大的微生物资源，特殊是以能产生多样的次级代谢产物而著称的放线菌，争论土壤沉积微生物，不仅可以发觉新的放线菌资源，同时也可能发觉新型活性产物，在医药、食品、化工、环保等行业意义庞大； 放线菌是具有庞大有用价值的一类微生物, 目前从微生物中发觉的大约 8 000 种生物活性物质中, 近 70 % 是由放线菌产生的；放线菌是一群革兰氏阳性、高〔 G + C〕 mol% 含量〔 >55% 〕 的细菌；放线菌因菌落呈放线状而的得名；它是一个原核生物类群，在自然界中分布很广，主要以孢子繁衍，其次是断裂生殖；与一般细菌一样，多为腐生，少数寄生；2、试验材料与方法2.1材料2.1.1 土壤样品 理工大西校区西门邻近校区内随机取8个采样点,采样点的挑选以农田土壤、常常疏松的的种植土壤以及含有机质较为丰富的为主；精品.2.1.2 培育基 高氏合成一号培育基：溶液与试剂、可溶性淀粉、NaCI、KNO3 、K2 HPO4 3H2 O MgSO4 ．7 H2 O 、FeSO4 ．7 H2 O， 琼脂，1mol/LNaOH, 1mol/LHCI； 仪器与其他用具：试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，培育基分装器，天平，高压蒸汽灭菌器，PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布等 牛肉膏蛋白胨培育基：牛肉膏、蛋白胨、NaCl PDA培育基：新奇土豆；琼脂；葡萄糖、电磁炉；锅（带盖）；漏勺；刀、烧杯纱布；玻璃棒；天平；称量纸；蒸馏水2.1.3 供试菌种 大肠杆菌、黑曲霉、金黄葡糖球菌、啤酒酵母菌、枯草芽孢杆菌、毛霉（菌种来自试验室课程试验老师）2.2 试验方法及步骤2.2.1 放线菌的分别及正确土壤稀释浓度的挑选 称取 5g 处理后土壤样品, 制成分别稀释成 10^-3、10^-4、10^-5倍的土壤样品悬浮液, 充分振荡, 静置 20 min 后, 分别将适量上清液吸入高氏合成一号平板上, 并用三角环涂匀称, 置于 28℃恒温组织培育箱内培育 2~ 4 d, 观看和鉴定各类微生物的显现情形, 确定正确土壤稀释浓度, 并将其中的放线菌挑出；2.2.2 放线菌纯化培育精品. 将已经分别的放线菌纯化在高氏一号固体培育基上、放在37℃的恒温培育箱中进行2—4天培育，中间定期观看生长状况，防止污染；2.2.3 储存备用菌株 将已纯化的放线菌挑入高氏一号斜面上进行储存，保留备用；2.2.4 供试菌液配置 将供试菌种〔毛霉、黑曲霉、枯草芽孢杆菌、金黄葡萄球菌〕在超净工作台内用接种环点接至牛肉膏蛋白胨液体培育基试管中，放进28℃摇床中隔夜培育；2.2.5进行拮抗试验 第一次试验（主试验）将培育皿用记号笔分成五等分，将菌液涂布在培育皿（牛肉膏蛋白胨固体培育基）上，将以分别纯化出的四种放线菌（后又长出一种记为5号）编号，点接在已涂布的培育皿上，留有空白；在28℃恒温培育箱中培育2—4天，观看抑菌圈测量半径； 其次次试验（次试验）培育皿分成两等份，将5、6（6号为一珠有抑菌圈的菌株）点接在PDA培育基上，同时将真菌（黑曲霉）点在放线菌四周，隔天将细菌点在放线菌四周；在恒温箱中培育2-4天，观看抑菌半径，并测量； 稀释倍数重叠率/ %10^-18210^-270精品.10^-31310^-40 （表一） 土壤稀释倍数与菌落重叠率（微生物学杂志）3、试验结果与分析3.1试验结果表（表二）1234 5 6金黄葡萄球菌\____\\——=大肠杆菌\——\\——=啤酒酵母菌=——\=————毛霉\——\\——=黑曲霉\——\\——+押宝枯草杆菌=——==——++——没有抑制作用；++抑制；+抑制不明显；=没做；\污染3.2试验照片精品. 图一 图二 图三 图四 图五3.3试验结果分析3.3.1由表二和图四可知，6号放线菌对枯草芽孢杆菌产生拮抗作用，而且抑菌圈比较明显，对于在有放线菌的位置，其枯草芽孢杆菌的芽孢沿着与放线菌位置相反的方向繁衍，且在放线菌中心的位置，内侧形成光滑的弧线状；对于拮抗作用比较强的放线菌在与枯草芽孢杆菌共培育时产生其单培育时没有的物质【2】；6号放线菌在与黑曲霉共培育的过程中，黑曲霉的申展方向沿与放线菌相反的方向，其生长状态为以中心为最小部分的扇子状，黑曲霉自始至终没能将放线菌掩盖，并且保持着较为短的生长距离；3.3.2由表二和图一可知金黄葡萄球菌、大肠杆菌、毛霉和黑曲霉的拮抗试验中1、3、4号放线菌产生了污染；3.3.3表二可知5号放线菌对全部供式菌种没有拮抗作用，2号对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、毛霉、黑曲霉没有抑制作用；图五可知没有拮抗的放线菌和金黄色葡萄球菌挤在一起，故没有抑制作用；4、结论与争论4.1结论山东理工高校西校区土壤内含有大量放线菌，但具有拮抗作用的菌株可能比较少，本次试验所培育数量并不多，却发觉了6株放线菌，但仅有一株对细菌有拮抗作用，放线菌作为一种能产生抗生素的重要菌种，在争论其新种类，开发新型抗生素具有重大意义；而要找出具有拮抗作用的放线菌，可能需要跟多的供式菌种，或许在本次挑选出的那些没有抑制作用的放线菌，会对其他的菌种产生作用，所以每一种放线菌对不同的供式菌都会有其相应的作用，只是需要人类时间的验证，而将每一种放线菌对应到一种或几种供试菌并产生作用是人类研发放线菌的一个重大课题；精品.4.2争论试验过程中发觉了各种放线菌生长速度不一，有些只需一天即可长成可见菌株，而有些就需要更多时间，所以对时间不久的平板不能很快扔掉而需要准时储存；并发觉了细菌生长速度远大于放线菌，表达于对细菌没有抗性的放线菌如同时和细菌处于一起时，在细菌生长完成后，放线会从细菌中心长出；假如对细菌有拮抗作用的放线菌，在细菌完成生长之后快速占据细菌空间；5参考文献1 王静，杨澄然，郭芳芳，姜伟等，一株放线菌的分子鉴定与抗菌谱争论【J】安徽农业科技2021.39（34）2 黄兵，刘宁，放线菌与枯草芽孢杆菌的共培育及其对活性次生代谢产物的影响【J】生物工程学报2021.4.09如有侵权请联系告知删除，感谢你们的协作！精品。