乙肝五项检测.docx

乙肝五项检测（ELISA法）一、 检测目的：乙型肝炎病毒标志物（HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb）检测二、 测定分别采用双抗体（抗原）夹心法和竞争法HBsAg、HBsAb原理：采用单克隆抗-HBs（HbsAg）包被反应板，加入待测标本， 同时加入多克隆抗-HBs-HRP（HBsAg-HRP）,当标本中存在HBsAg（ HBsAb ）时，该 HBsAg（ HBsAb）与包被抗-HBsAg（ HBsAb）结合并与抗-HBsAg-HRP （HbsAb-HRP ）结合形成抗-HBsAg（ HBsAb ）-抗-HBsAg-HRP（ HBsAb-HRP） 复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应HBeAg原理 采用抗-HBe包被反应板 加入待测标本 伺时加入抗一HBe-HRP， 如待测样本中抗HBeAg时，就与包被抗-HBe、抗一HBe-HRP结合形成复合物，加 入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应HBeAb原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反应板，加入待测标本，同时加入 HBe-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBe含量高，则抗一HBe-HRP 与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。

HBcAb原理：采用基因工程重组HbcAg包被反应板，加入待测标本，同时加入 HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBe含量高，则抗一HBe-HRP 与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深三、操作步骤：1、将试剂从冷藏室中取出，30 分钟后平衡至室温方可开启使用2、用蒸馏水将 PBST 浓缩液 20 倍稀释，作为洗液3、将微孔条固定于支架上，按序编号4、按具体使用试剂盒说明书加样、孵育、洗板、显色9、用酶标仪读数，取波长450nm,先用空白调零，然后读取各孔OD值样品OD值/阴性对照平均OD >2.1,判断为阳性，否则为阴性阴性对照OD 值低于 0.05 作 0.05 计算，高于 0.05 按实际 OD 值计算五、注意事项：1、 冷藏环境中取出的试剂盒应在室温平衡 30 分钟后方可使用2、 使用试剂前摇匀，并弃去 1-2 滴后垂直滴加3、 结果判定必须在反应终止后 10 分钟内完成4、 不同批号的试剂不可混用5、 待测标本不可用 NaN 防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释6、 本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理六、 生物安全防护：1、 在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。

2、 如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理3、操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）4、HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性煮沸100°C10分钟、高压蒸汽灭菌121C15分钟或干热160C2小时均可灭活HBV5-10g/L次氯酸钠30 分钟，1: 4000福尔马林37C72小时，0.5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性七、临床意义：乙肝病毒血清标志物的临床意义（即常说的乙肝五项或称两对半）序号HBsAg表面抗原 抗-HBs HBsAb表面抗体HBeAg E抗原 抗-HBe HBeAb E抗体 抗-HBc HBcAg核心抗体 临床意义出现率9种常见模式1 过去和现在未感染过HBV1-30%2 —— +⑴ 既往感染未能测出抗-HBs ; （2）恢复期HBsAg已消，抗-HBs尚未出 现；⑶无症状HBsAg携带着5-10%3 - - - + + （1既往感染过HBV ;（2）急性HBV感染恢复期；（3）少数标本仍有传染性①HBV感染已过；②抗HBs出现前的窗口期2-10%4 - + - - - （1）注射过乙肝苗有免疫；⑵既往感染；③假阳性1-6%5 - + - + +急性HBV感后康复。

0.5-5%6 + - - - +⑴急性HBV感染；（2）慢性HBsAg携带者；（3）传染性弱10-15%7 - + - - +既往感染，仍有免疫力HBV感染，恢复期5-15%8 + - - + + （1）急性 HBV感染趋向恢复；（2）慢性HBsAg携带者；⑶传染性弱即俗称的“小三阳” 5-10%9 + - + - +急性或慢性乙型肝炎感染提示HBV复制，传染强即俗称的“大三阳” 30-40%16种少见模式10 + —— ⑴ 急性HBV感染早期，急性HBV感染潜伏期；（2）慢性HBV携带者， 传染性弱11 + - - + -⑴慢性HBsAg携带者易转阴；⑵急性HBV感染趋向恢复12 + - + --急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强13 + - + + +⑴急性HBV感染趋向恢复；（2）慢性携带者14 + + - - - （1）亚临床型HBV感染早期；（2）不同亚型HBV二次感染15 + + - - +⑴亚临床型HBV感染早期；⑵不同亚型HBV二次感染16 + + - + - 亚临床型或非典型性感染17 + + - + + 亚临床型或非典型性感染18 + + + - +亚临床型或非典型性感染早期。

HBsAg免疫复合物，新的不同亚型 感染19 - - + --⑴ 非典型性急性感染；⑵见于抗-HBc出现之前的 感染早期，HBsAg 滴度低而呈阴性，或呈假阳性20 - - + - + 非典型性急性感染21 - - + + +急性HBV感染中期22 - + - + - HBV感染后已恢复23 - + + --非典型性或亚临床型HBV感染24 - + + - +非典型性或亚临床型HBV感染25 - - - + -急性HBV感染趋向恢复7种罕见模式26 + + + + +①一种亚型的H BsAg及异型的抗H Bs（常见）；②血清从H BsAg 转化为抗HBs的过程（少见）27 - + + + -28 - + + + +29 - - + + -30 + - + + -31 + + + - -32 + + + + -乙肝五项检测（胶体金法）一、检测目的乙型肝炎病毒标志物（HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb）检测二、测定HBsAg、HBsAb、HBeAg均采用双抗体（原）夹心法原理HBeAb、HBcAb采用竞争法原理三、操作步骤具体方法参照试剂盒说明书举例如下：在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书．使用前将试剂板和血清／血浆标本 恢复至室温(20~30%)。

从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复 至室温)，在丨小时内应尽快地使用1. 将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清／血浆标本，逐滴垂直加入 于试剂板的五个加样子L中(每孔22. 加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在 15 分钟时读取测试结果在 20分钟后读取的结果无效．由于前三个项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗体(原)夹心法原理，后两个项 日HBeAb、HbcAb使用竞争法原理因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不 同的．请注意区别l .HBsAg、HBsAb、HbeAg(1) 阳性(+):两条红色条带出现一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)阳性 结果表明：标本中含有待测物质2) 阴性(一)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现阴性结 果表明：标本中检测不出待测物质3) 无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质 损坏在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试如果问题仍 然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系4) 注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可 显现出颜色深浅的现象。

只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有 非常弱的色带也应该判为阳性结果2 HBeAb、HBcAb(1) 强阳性(+):仅质控区(c)出现一条红色条带•在测试区(T)内无红色条带出现 阳性结果表明：标本中含有待测物质2) 弱阳性(+):质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带 出现阳性结果表明：标本中含有待测物质3) 阴性(一):两条红色条带出现一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(c)阴 性结果表明：标本中检测不出待测物质4) 无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质 损坏在此情况下，应重新测试如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品， 并与当地供应商联系五、注意事项I•请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定 无效2. 乳胶法乙肝五项检测试剂板(血清/血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的 存在，不能确定血样中病毒的含量3. 由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检 测结果可能有错误对可疑结果应作相应的进一步检测六、生物安全防护1. 在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。

2. 如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理3. 操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）4. HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性煮沸100°C10分钟、高压 蒸汽灭菌121C15分钟或f热160C2小时均可灭活HBV°5~ 10g /L次氯酸钠30 分钟，1: 4000福尔马林37C72小时，O 5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性七、临床意义1. HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态2. HBsAb阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期，或既往曾感染过HBV,现在已恢复， 而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAb阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，即 接种免疫成功的指标3. HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝 细胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预 测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性 的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿，其感染的阳性率为70%~90%4. HBeAb阳性 滲见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制， 病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出 HBeAb ;在日BsAg和HBsAb阴性时，如能检出HBeAb和HhcAb，也能确诊为乙 型肝炎近期感染。

5. HBcAb—IgG阳性:高滴度表示正在感染｝低滴度则是既往感染过HBV的指标， 具有流行病学的意义6. HBcAb—IgM阳性：是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示 检验对象血液有较强传染性同时，HBcAb—IgM阳性还见于慢性活动性乙型肝炎乙肝表面抗原检测（胶体金法）一、检测目的乙型肝炎病毒标志物HBsAg检测二、测定HBsAg采用双抗体（原）夹心法原理三、操作步骤具体方法参照试剂盒说明书举例如下：在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书．使用前将试剂板和血清／血浆标本 恢复至室温(20~30%)从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复 至室温)，在 l 小时内应尽快地使用1. 将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清／血浆标本，逐滴垂直加入 于试剂板的五个加。