实验三 齐墩果酸的提取.docx

实验三 齐墩果酸的提取、分离及鉴定一、实验目的1、掌握三萜皂苷元的提取、分离和鉴定技术，熟悉三萜皂苷的性质2、掌握两相溶剂水解方法3、掌握碱溶盐析法提取萜类化合物的方法 齐墩果酸又名庆四素，属五环三萜类化合物，广泛分布于植物界，已报道 其以游离态、酯、苷或兼有的形式存在于150多种植物中，而多数是以苷的形式 存在但含齐墩果酸的量超过 10％的甚少从刺五加、龙牙楤木中提得率超过 10％，纯度达 95％以上，是理想的药用资源，是一种天然产物化学成分，并己 证实其具有多种生物活性纯齐墩果酸是白色簇状结晶，无色、无味、无臭，熔点为308-310°C，不溶 于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿等有机溶剂据研究证实，齐墩果 酸具有消炎抑菌、增强免疫功能、降转氨酶、改善肝功能，纠正体内异常蛋白代 谢，防止肝硬化、降血糖、降血脂等多方面的临床药理作用，它对急性黄疸型肝 炎和慢性病毒性肝炎疗效显著，是国内研制的保肝、治疗肝炎的有效药物之一 此外，齐墩果酸还具有抗血栓形成、抗突变、抗艾滋病、抑制HIV-I的复制作用； 以及强心、利尿和抑制S180瘤株生长等作用，其毒性小，副作用低，安全范围 大齐墩果酸还因其有抗衰老、抗突变、清除自由基的作用，还可以作为化妆品 成分被广泛应用。

女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait•的干燥成熟果实，为常 用的扶正固本中药药理研究表明其促进免疫的主要有效成分为齐墩果酸、熊果 酸及乙酰齐墩果酸齐墩果酸以游离态和结合成苷的形式同存于女贞子中经检 测发现其齐墩果酸含量以幼果期（8月）含量最高，可达8.04％，随着发育成熟 下降到 2.5％左右其在果实中的含量分布为外中果皮＞全果实＞内果皮＞种仁 女贞子还含橄榄苦苷、D-甘露醇、硬脂酸、植物蜡等女贞子中主要有效成分：（1）齐墩果酸：C H O，白色针状结晶（95%乙醇），mp 305-306C可溶30 48 3于热甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等，不溶于水2） 熊果酸：C H O，白色针状结晶（95%乙醇），mp 286-287°C易溶于30 48 3二氧六环、吡啶可溶于热乙醇，微溶于苯、氯仿、乙醚，不溶于水3） 乙酰齐墩果酸：C H O，白色簇晶Mp 258C-260C溶于氯仿、乙32 50 5醚、无水乙醇，不溶于水齐墩果酸 R=H 熊果酸乙酰齐墩果酸 r=ococh3二实验原理根据女贞子中齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用酸水 解，氯仿萃取同步法提取齐墩果酸。

根据女贞子齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用碱溶 解，制备成钠盐形式，酸沉淀方法提取齐墩果酸三、 实验材料：1、器材：500ml圆底烧瓶、烧杯、水浴锅、滴管、球形冷凝管、索氏提 取器、250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、旋转蒸发器、硅胶G-CMG-Na 板、层析缸等；2、药品及试剂:：女贞子果皮粗粉50g、5%氢氧化钠溶液、浓硫酸、浓盐酸、 乙醇、丙酮、氯仿溶液、石油醚（沸程60-90C）、冰醋酸、乙酸乙酯溶液、无水 硫酸钠、乙酸酐四、 实验操作步骤：1、酸水解和氯仿同步提取法称取女贞子果皮粗粉25g，置于圆底烧瓶内，加15%盐酸溶液175 ml，氯 仿125 ml，70C水浴回流水解2h，过滤，分取氯仿提取液（在分液漏斗中进行， 注意：氯仿在下，水在上，因为氯仿密度1.4916比水大，用水洗至中性，用无 水硫酸钠脱水干燥、过滤，用过滤液）另存药渣用水洗至中性，抽干，干燥药 渣至含水量小于10%（摊平晾晒或低温烘干）将干燥药渣置于圆底烧瓶内，加 氯仿250 ml回流lh,合并二次氯仿提取液，取出2 ml留待薄层鉴识，其余减 压回收氯仿（用旋转蒸发器或常温挥干）至糖浆状，趁热转移至烧杯中，冷后成 半固状物。

女贞子果皮粗粉1 F氯仿提取液V回流回收氯仿至糖浆状2、分离与精制方法1:取上述半固状物，以少量石油醚洗涤.除去脂溶性较大的成分，即 有固体析出，抽干，得浅黄色析出物用1:100倍量（W/V） 95%乙醇90°C回 流10 min，过滤，滤液浓缩至小体积，放置，析出粗晶，抽滤得齐墩果酸粗品 反复用90%乙醇重结晶，可得较纯的齐墩果酸即方法1: 半固状物浅黄色析出物乙醇回流1 r齐墩果酸粗品1齐墩果酸 方法2:同方法1用石油醚处理得浅黄色析出物，加10倍量5%氢氧化钠溶液煮 沸10 min,放冷后抽滤，适量热水洗涤1〜2次，抽干得类白色析出物，用95% 乙醇C回流溶解，趁热过滤，盐酸调至pHl〜2,放置析晶抽滤得齐墩果酸粗 品，用正己烷-乙醇（1:1）重结晶，可得较纯的齐墩果酸浅黄色析出物氢氧化钠溶液煮沸V乙醇回流V齐墩果酸粗品V齐墩果酸3、鉴定a.呈色反应(1) 取本品约50mg，加氯仿2ml溶解后，加硫酸2滴，振摇，静止，氯仿 液自无色(或淡黄色)渐变为淡红色2) 取本品少量，加乙酸酐lml,微热使溶解，滴加硫酸1滴，即显紫红色， 放置后色渐变深3) 取本品少量，加香草醛的冰乙酸溶液(香草醛0.5g，加冰乙酸10ml溶 解，即得)0.2ml，加高氯酸0.8ml，置沸水浴中加热数分钟，显紫红色，加乙酸 乙酯2ml，紫红色溶入乙酸乙酯中，放置不变色。

b薄层色谱鉴别薄层板：硅胶G-CMG-Na板点样：女贞子氯仿提取液、自制齐墩果酸乙醇溶液、齐墩果酸对照品乙醇溶 液(1 mg/ml)展开剂：氯仿-丙酮(95:5)、环己烷-乙酸乙酯(8:2)任选一种显色：喷10%硫酸甲醇溶液，105°C烘至显色，日光和紫外光灯(365nm) 下检识观察记录：记录图谱及斑点颜色4、计算得率得率二得到的齐墩果酸成品（g） /称取得样品量（g） * 100% 五、注意事项1、 女贞子中齐墩果酸的含量因采收季节、产地不同有较大差异，可根据原 料含量酌增取材量2、 用石油醚洗涤应控制用量，以防主成分的损失，也可用适量苯替代六、思考题1、 采用果皮作原料的优点是什么?2、 两相溶剂水解法的原理是什么?3、 本实验中采用皂化反应有何意义?4、齐墩果酸和熊果酸在结构上有何差异？试述分离两者的方法。