镉对小鼠肝脏毒性作用探讨.doc

镉对小鼠肝脏毒性作用探讨摘要：目的 了解镉对小鼠肝脏的毒性作用，并探讨其对肝脏组织的毒作用机理方法 健康成年清洁级昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，临用前以生理盐水配制CdCl2溶液，CdCl2染毒剂量分别为0.05、0.1、0.2mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液（10mg/kg体重），对照组注射生理盐水（10mg/kg体重），连续染毒三天，处死，取肝称重并制备肝匀浆，测量其肝脏系数、匀浆蛋白浓度、天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）和超氧化物歧化酶活性（SOD）及肝脏过氧化脂质讲解产物丙二醛（MAD）的活性结果 染毒组小鼠上述各指标与对照组相比均有差异，但无统计学意义结论 尚不能论证镉对肝脏组织有损伤作用关键词：镉；肝脏；毒性作用；小鼠引言：镉在环境中广泛持久存在,对人和动物造成极大的健康危害急性镉暴露可损害机体多种靶器官组织肝脏是镉急性中毒损伤的主要靶器官之一鼠急性中毒后，镉主要蓄积于肝脏镉有很强的亲硫性在肝脏中，镉易与巯基结合而诱导金属硫蛋白生成镉-硫蛋白，因而金属硫蛋白对急性镉中毒有应急保护作用，但若镉在短期内大量转运到肝脏，便导致肝内金属硫蛋白相对不足，不能与镉有效结合而引起肝功能障碍，这可能是镉引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一【1】。

通过本次实验了解镉对小鼠肝脏的毒作用，并探讨其对肝脏组织的毒作用机理，从而对镉的毒性损害作用做出评价1、材料与方法1.1实验试剂氯化镉（CdCl2、AR、中国上海新化工厂生产，GB1285-77，批号890401）、蒸馏水、0.9%生理盐水、蛋白浓度试剂（南京建成）、GOT测试剂盒（南京建成）、GPT测试剂盒（南京建成）、MDA测试剂盒（南京建成）、SOD测试剂盒（南京建成）1.2实验仪器电子天平（感量 0.1g）、SIGMA 2K15型冷冻高速离心机、注射器、剪刀、镊子、滤纸、玻璃匀浆器、冰浴容器、水浴箱、量筒、烧杯、试管、移液管、移液枪、VIS-7220N型分光光度计1.3实验动物健康成年清洁级昆明种小鼠40 只，雌雄各半，体重20～27g，由福建医科大学动物实验中心提供1.4实验方法1.4.1分组与染毒将40只小鼠随机分为4组，临用前以生理盐水配制CdCl2溶液，CdCl2染毒剂量分别为0.05、0.1、0.2mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液（10mg/kg体重），对照组注射生理盐水（10mg/kg体重），每天定时称量体重后染毒，连续染毒三天1.4.2处死与肝脏提取第4天分别称量小鼠体重后颈椎脱臼法处死，处死后立即取出肝脏并剥离周围脂肪及结缔组织，用生理盐水洗净后用滤纸吸干，称肝重，记录数据并计算脏器系数。

1.4.3肝匀浆制备取肝组织0.2g，置于玻璃匀浆器中并加入2ml0.9%生理盐水，在冰水浴下研磨成10%肝匀浆，移至试管中并按小鼠编号分别标号备用1.4.4蛋白浓度、ALT、AST、MDA及SOD活性测定1.4.4.1取上述所制的肝匀浆用3000r/min离心15分钟，取其所得上清液备用0.1ml与0.9ml 0.9%生理盐水混合均匀备用1.4.4.2蛋白浓度测定：采用Lorry法；ALT、AST测定：GOT、GPT检测试剂盒，比色法；MDA测定：采用硫代巴比妥酸（TBA）法即MDA检测试剂盒，比色法；SOD测定：SOD检测试剂盒，比色法；脏器系数：称重法1.5计算1.5.1肝匀浆蛋白浓度计算：蛋白质浓度=（测定管-空白管）/（标准管-空白管）×标准管浓度（0.563g/L）1.5.2组织匀浆中总SOD活力计算：定义：每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）计算公式：组织匀浆中SOD活力（U/mgprot）=｛（对照管吸光度-测定管吸光度）/对照管吸光度｝÷50%×（反应液总体积/取样量（ml））÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml） ＊mgprot为毫克蛋白数1.5.3组织中AST、ALT活力计算：组织中AST、ALT活力（U/mgprot）=通过标准曲线得的匀浆活力÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml）1.5.4组织中MDA含量计算：组织中MDA含量（nmol/mgprot）=（测定管OD值-标准空白管OD值）/（标准管OD值-标准空白管OD值）×10(nmol/ml) ÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml）1.5.5肝脏系数的计算：肝脏系数=[肝脏重量（g）/体重（g）]×100%1.6实验数据处理与结论建立Excel数据库，分别输入各组实验数据，运用SPSS16.0 统计软件,采用方差分析法进行统计处理。

表1 小鼠染毒前后体重差CdCl2(mg/kg)生理盐水合计0.0500.1000.2001-0.35-1.30-2.60-2.702-0.70-2.70-0.90-2.603-0.47-2.003.90-1.304-1.30-0.50-0.20-2.6051.023.50-1.200.8062.520.60-0.400.7071.600.900.100.7081.501.10-1.500.3092.804.001.500.80103.291.600.100.80排除异常值之后例数101091039平均值0.9910000.520000-0.566667-0.5100000.125897标准差1.6182122.2039361.1640451.5947481.765236方差2.6186104.8573331.3550002.5432223.116056方差分析1变异来源SSdfMSFP总变异118.41038组间17.87735.9592.075>0.05组内100.533352.872按照方差分析法，各实验组之间及实验组和对照组比较差异无统计学意义（P﹥0.05）表2 四种方案处理后小鼠肝脏系数CdCl2(mg/kg)生理盐水0.0500.1000.20010.050.050.060.0520.060.070.050.0530.040.050.050.0540.050.050.050.0650.040.040.050.0560.060.050.060.0570.050.040.050.0780.050.050.050.0890.050.050.050.05100.050.040.060.06方差分析2变异来源SSdfMSFP总变异0.00217639组间0.00025730.0000861.606658>0.05组内0.001919360.000053按照方差分析法，各实验组之间及实验组和对照组比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。

表3 四种方案处理后小鼠肝脏匀浆蛋白浓度（g/L）CdCl2(mg/kg)生理盐水合计0.0500.100.2013.3552.9622.3252.93726.0244.52810.6414.22330.7582.3425.9124.32846.8728.79111.7104.58457.6107.3389.2781.573610.0254.606-0.2825.12176.0744.3916.2732.58685.7025.0508.8607.27195.6606.5573.8955.295103.5602.5904.8006.563排除异常值之后例数101091039平均值5.5644.9167.0774.4485.493标准差2.5452.1083.2031.7552.538673方差6.4774.44210.2603.0796.444862方差分析表3变异来源SSdfMSFP总变异244.90538组间36.88312.292.068>0.05组内208.025355.94按照方差分析法，各实验组之间及实验组和对照组比较差异无统计学意义（P>0.05） 表4 四种方案处理后小鼠肝脏匀浆SOD活力值（U/mgprot）CdCl2(mg/kg)生理盐水合计0.0500.100.201-4.51434.2457.82231.48223.11415.1636.81120.0513126.04033.38515.96617.670414.9531.1598.77518.510512.7271.05110.85052.267610.15619.249-109.27918.540716.54121.66612.79832.663817.85414.31411.79213.452910.82017.18225.74517.2841029.50735.85520.93115.802排除异常值之后例数8109936平均值14.45919.32713.49920.60617.108标准差7.61612.5166.3346.7699.0019方差57.998156.66240.12245.81981.0344方差分析表4变异来源SSdfMSFP总变异2836.20335组间332.7253110.9081.4177>0.10组内2503.47783278.2337按照方差分析法，各实验组之间及实验组和对照组比较差异无统计学意义（P﹥0.10）。

图1表5 四种方案处理后小鼠肝脏匀浆AST酶活力（U/mgprot）CdCl2(mg/kg)生理盐水合计0.0500.1000.200146.93652.99070.50343.219221.98727.81317.47530.1843205.77055.05825.70433.491422.983-0.97314.854。