植物生物学实验10植物种子生命力的快速测定讲课资料.ppt

实验十、种子生命力的快速测定南京师范大学 生命科学学院植物生物学实验（二）植物生物学实验（二） 种子生命力 指种子的萌发能力 种子生命力测定的常规方法 发芽实验、浮力实验 种子生命力快速测定的常用方法BTB法、TTC法、红墨水法以及荧光法、纸上荧光法、电导率测定法、冷冻测定法等二、知识背景三、测定方法 BTB法 TTC法 红墨水法 荧光法BTB法试剂 0.1% BTB 溶液： 0.1g溶解于煮沸煮沸过的自来水自来水100mL中，用滤纸滤去残渣溶液若呈黄色，可滴加稀氨水或NaOH溶液，使之呈现蓝色或蓝绿色，棕色试剂瓶中保存 BTB琼脂凝胶：取1g琼脂煎碎后加入100mL 0.1%BTB溶液中，用小火加热并不断搅拌待琼脂完全溶解后，趁热倒在干燥洁净的培养皿中，使之为一均匀的薄层，冷却后备用BTB法材料与设备 恒温箱、培养皿、小麦或绿豆BTB法步骤 浸种：将待测种子在30温水中浸种24h 倒平板：取预先加热融化的BTB琼脂凝胶倒入培养皿，静置冷却，使之形成凝胶薄层 显色：取吸胀的种子，整齐地将胚向下胚向下埋于准备好的BTB琼脂凝胶培养皿中，间隔距离在1cm1cm左右然后将培养皿置于恒温培养箱中30-35培养1h。

BTB法步骤 1h后，记数种胚附近出现的黄色晕圈的活种子数，计算活种子的百分率 2、TTC法原理 凡是有生命活力的细胞均具有呼吸作用，从而都有氧化氧化还原反应还原反应，而死细胞则无此反应 TTC（氯化三苯四氮唑）可渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被辅酶（NADH2或NADPH2）上的氢还原，此时无色的TTC便转变为红色的红色的TTFTTF（三苯基甲曁），并吸附在活细胞的表面，根据活细胞着色的深浅可定性的判断种子活力的有无与大小 该方法在国际间、地区间交换种子最为常用 注意：染色部位为生活种子生活种子的胚胚细胞TTC法试剂 0.5%TTC溶液：0.5gTTC（酒精溶解酒精溶解后）定容至100ml， 棕色瓶棕色瓶44保存 若溶液变成红色，表示已被氧化不能再用TTC法材料与设备 恒温箱、培养皿、玉米种子、刀片TTC法步骤 浸种：同BTB法 显色：取吸胀的种子适量，用刀片沿胚的中心线纵切为两半，将每一种子的半粒置于培养皿中，另半粒待用 加入适量的0.5%TTC溶液（以浸没种子为度），置于30恒温箱中；1h后，倒去染色液，观察现象 计算活种子的百分率将待测种子在30温水中浸种24h3、红墨水法原理 活细胞的原生质膜具有选择透性选择透性，红墨水中的染色成分大红G不能进入细胞；因而胚不被红墨水染色。

死亡的种胚细胞原生质膜丧失选择透性，大红G进入胚细胞并染色 注意：生活种子的胚细胞不不染色红墨水法试剂 5%红墨水：以市购红墨水为原液，用自来水配制成5%的红墨水溶液 红墨水法材料与设备 恒温箱、培养皿、玉米种子、刀片红墨水法步骤 浸种：同BTB法 显色：将TTC法中剩余待用的一半种子置于另1只培养皿中，加入适量的5%红墨水液（以浸没种子为度） 15min15min后倒去红墨水，用自来水冲洗多次，直至冲洗液为无色为止观察现象，判断种子活力的有无和大小 计算活种子的百分率 将待测种子在30温水中浸种24h红墨水法活种子死种子4、荧光法原理植物种子中常含有一些物质，能在紫外线照射下产生荧光，如黄酮类、香豆素类、酚类等在衰老过程中： 荧光物质的结构、成分往往发生变化，因而改变荧光的颜色可借助直接观察荧光来鉴定种子的生命力适用于禾谷类、松柏纲等植物的种子 细胞膜透性增加，导致浸种后荧光物质外泄，可通过观察荧光物质的渗出情况判断种子的生命力适用于十字花科植物的种子荧光法材料与仪器 玉米种子 紫外光灯，不产生荧光的滤纸荧光法步骤 随机取20粒种子，用刀片将玉米种子沿中心线切为两半，使其切面朝上放在滤纸上，置于紫外光灯下照射观察。

有生命力的种子将产生明亮的蓝蓝色、蓝紫蓝紫、蓝绿蓝绿 色荧光死亡种子往往呈黄黄色、褐褐色，并暗淡无光 观察、计数，计算活种子的百分率荧光法观察孔紫外分析仪电源选择波长思考题1、试比较TTC法、BTB法、红墨水法及荧光法，测定的结果是否相同? 为什么? 哪一种方法更准确？它们与种子的实际萌芽率是否一致？如若有偏差，理论上应为偏高还是偏低？为什么？1. 2、BTB法测定种子发芽率时，若用煮死的种子做比较，有时也发现 在种子周围出现黄色晕圈，为什么？ 5. 3、如果用以上各方法来进行实验观察没有完全成熟的种子，将会有怎样的结果？思考题纸上荧光法 原理：凡有生活力的种子和已经死亡的种子，它们的种皮对物质的透性是不同的，而许多植物的种子中又都含有荧光物质利用对荧光物质的不同透性来区分种子的死活，方法简单，特别是对十字花科植物的种子，尤为适用 死种子活种子冷冻测定法打破种子休眠。