酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法.ppt

微生物学实验微生物学实验实验三实验三实验三实验三 酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法酵母菌形态的观察和显微镜直接计数法 刘刚 执 教 单单 位位 生命科学学院生命科学学院生命科学学院生命科学学院v观观察察酵酵母母菌菌的的形形态态，，学学习习区区分分酵酵母母菌菌死死活活细细胞的实验方法胞的实验方法v掌握酵母菌的一般形态特征掌握酵母菌的一般形态特征v明确血球计数板计数的原理明确血球计数板计数的原理 v掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法 实验目的实验目的实验原理实验原理v美兰染色检测酵母菌死活细胞的原理：美兰染色检测酵母菌死活细胞的原理：§美兰在氧化态时为蓝色，在还原态时为无色活的美兰在氧化态时为蓝色，在还原态时为无色活的酵母细胞具有还原能力，能使美兰保持为还原态，酵母细胞具有还原能力，能使美兰保持为还原态，因此染色后死的为蓝色、活的为无色因此染色后死的为蓝色、活的为无色v酵母菌细胞计数的原理酵母菌细胞计数的原理:§将菌液放在已知体积计数室将菌液放在已知体积计数室(1mm2×0.1mm)，，计数计数室薄，因此每个细胞都可以被看到。

体积确定，因室薄，因此每个细胞都可以被看到体积确定，因此数完所有细胞后就知道单位体积的细胞个数此数完所有细胞后就知道单位体积的细胞个数一、一、酵母菌形态的观察酵母菌形态的观察 （美蓝浸片的观察）（美蓝浸片的观察）v1. 在载玻片中央加一滴在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌苔放液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌苔放染色液中，混合均匀染色液中，混合均匀v2. 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上v注意：盖玻片不宜平放，以免产生气泡影响观察注意：盖玻片不宜平放，以免产生气泡影响观察v3. 将玻片放置约将玻片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜观察分钟后镜检，先用低倍镜观察后用高倍镜观察酵母菌的形态，并根据颜色区别后用高倍镜观察酵母菌的形态，并根据颜色区别死活细胞死活细胞 三三.实验步骤实验步骤:v作业作业 画图说明你所观察到的酵母菌的形态特画图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，并说明死细胞和活细胞分别为什么颜色。

征，并说明死细胞和活细胞分别为什么颜色 三三.实验步骤实验步骤:二．二．显微镜直接计数法显微镜直接计数法v1. 菌悬液的制备：以无菌水将酿酒酵母制成浓度适菌悬液的制备：以无菌水将酿酒酵母制成浓度适中的菌悬液中的菌悬液v2. 镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物，则需清洗，吹干后才能计数行镜检，若有污物，则需清洗，吹干后才能计数v3. 加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小再用无菌滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液一般计数室均能充满菌液v注意：取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有注意：取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生气泡产生 三三.实验步骤实验步骤:二．二．显微镜直接计数法显微镜直接计数法v4. 显微镜计数：加样后静止显微镜计数：加样后静止5分钟，然后将血球计数板置分钟，然后将血球计数板置于显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再用高倍镜进行于显微镜下，先用低倍镜找到计数室，再用高倍镜进行计数。

计数v在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度再在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度再计数一般样品稀释度要求每个中格内计数一般样品稀释度要求每个中格内15-20个菌体为宜个菌体为宜每个计数室选每个计数室选5个中格（可选个中格（可选4个角和中央的一个中格）个角和中央的一个中格）中的菌液进行计数中的菌液进行计数v注：位于格上的菌体一般只数上方和右边线上的（计上注：位于格上的菌体一般只数上方和右边线上的（计上不计下，计右不计左）若遇酵母出芽，芽体大小与母不计下，计右不计左）若遇酵母出芽，芽体大小与母细胞一样大时，即作为两个菌体计算细胞一样大时，即作为两个菌体计算 三三.实验步骤实验步骤:二．二．显微镜直接计数法显微镜直接计数法v5. 清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水龙头清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行凉干上用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行凉干 三三.实验步骤实验步骤:v作业作业 将结果记录于表中将结果记录于表中P112，表，表1下次实验：培养基的配制与灭菌下次实验：培养基的配制与灭菌 三三.实验步骤实验步骤:。