淀粉酶菌株的筛选和诱变育种.doc

淀粉酶菌株的挑选和诱变育种 [摘 要]：本文章中我们利用试验菌株对于淀粉的特异性，用革兰氏碘液，利用平板法挑选出所需菌株和利用紫外线诱变育种，分别对要诱变的菌株进行不同时间的诱变，将在红光的照耀下将结果稀释不同倍数，涂到平板上进行暗室培育，48小时后观看，用碘液测酶活力； [关键词]：淀粉酶；挑选；诱变育种 前言: 一般情形下，我们要获得目的菌株，一是从自然界中分别纯化，活力普遍较低，较省时省力，二是通过育种的方法，获得目的菌株，而通过人工选育的菌株，就更满意于工业化生产的需要，为我们供应了更好地挑选；要获得所需的高产突变菌株，就要对菌株进行突变处理，精品.突变分为自发突变和诱导突变；因自发突变的频率较低，所以采纳诱导突变；所谓的诱变就是用物理或化学诱变剂处理匀称分散的细胞群，促使突变率大幅度提高；然后挑选出目的突变菌株，以供生产实践或科学试验用；诱变可由化学或物理因素引起，紫外线诱变是最简洁、最常用的一种，因此我们挑选采纳这种方法；紫外线诱变处理的有效波长为200~30010nm，最适为254nm〔此为核酸的吸取高峰〕；DNA和RNA的嘌呤和嘧啶吸取紫外光后，DNA分子形成嘧啶二聚体，即两个相邻的嘧啶共价连接，二聚体显现会减弱双键间氢键的作用，并引起双链结构扭曲变形，阻碍碱基间的正常配对，从而有可能引起突变或死亡.另外二聚体的形成，会阻碍双链的解开，因而影响DNA的复制和转录.总之紫外辐射可以引起碱基转换、颠换、移码突变或缺失，即是所谓的诱变； 通过本篇文章，能够让我们进一步明白从自然界中分别淀粉酶菌株的详细的挑选过程与方法并且懂得诱变育种的基本原理以及用诱变育种挑选高产目的菌种的基本方法； 正文一、淀粉酶菌株的挑选方案1.1菌种来源： 校内土壤1. 2培育基： 淀粉培育基：蛋白胨10g，NaCl 5g,可溶性淀粉2g,蒸馏水1000ml,琼脂16g 左右，121℃高压灭菌锅灭菌20min,待冷却至50℃左右时，于超净工作台倒入摇瓶如干； 1.3器材： 培育皿多个、1ml移液管1根、铲子1把、锥形瓶多个、高压灭菌锅、超净工作台、试管多支、摇床等；1.4灭菌： 将试验所用的培育基、培育皿、试管等进行高压灭菌；1.5试验步骤：1.5.1选定采土之后，铲去表面土层2至3cm，去3至10cm深层土壤10g,装入灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并进行记录，并且妥当储存；1.5.2称取土壤10g左右，放入盛有90ml蒸馏水并且带有玻璃珠的锥形瓶中，振荡约20min左右，然后静置5min,然后使土样和蒸馏水充分混合；对其进行浓度梯度的稀释10-6 左右； 精品.1.5.3用一支1ml的移液管从中吸取0.1ml土壤悬液加入含有淀粉培育基的无菌培育皿中，重复两次后，置37℃于培育箱中培育24小时左右；1.5.4进行初步挑选，在培育出的培育皿中匀称喷洒革兰氏碘液，有明显的透亮圈的菌落即为活性较高的淀粉酶菌株，说明该菌可以分解淀粉，可以产生淀粉酶；1.5.5进行复挑选，通过点将法将可以产生淀粉酶的菌株接种到相同环境的无菌培育基中，重复操作进行培育；1.5.6挑选菌落四周透亮圈和菌落直径之比值较大的菌落，进一步采纳精确检测法鉴定，选出较优良的菌株2到3株，并且移植到斜面培育基培育；二、淀粉酶菌株的诱变育种方案2.1.材料2.1.1菌种 大肠杆菌2.1.2试验药品 碘液、2%可溶性淀粉、标准糊精溶液、0.5mol/L乙酸、0.85%生理盐水、pH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；2.1.3试验仪器 培育皿、锥形瓶、高压灭菌锅、磁力搅拌器、离心机、20w紫外线、超净工作台、培育皿、胶头滴管等试验仪器；2.2方法2.2.1培育基的配置 淀粉培育基（可溶性淀粉 20g, 硝酸钾 1g, 磷酸氢二钾 0.5g, 氯化钠 0.5g, 硫酸镁 0.5g, 硫酸亚铁 0.01g, 琼脂 20g, 水 1000毫升，调整pH值到7.2～7.4；）2.2.2灭菌 将试验所用的培育基、培育皿、试管等进行高压灭菌； 2.2.3悬液的制备 取已培育20h的活化的枯草杆菌斜面一支，用10ml无菌生理盐水将菌苔洗下，并倒入盛有玻璃珠的锥形瓶中剧烈震荡精品.10min，以打碎菌块，离心（3000r/min，15min）弃上清，将菌体用无菌生理盐水洗2次，最终制成菌悬液，用血球计数板在显微镜下调成浓度108个/ml；2.2.4诱变（1）预热：正式照耀前开启紫外灯预热10min；（2）搅拌：取制好的菌悬液4ml移入6cm的无菌培育皿中，放在无菌磁力搅拌器上，20w紫外灯下据紫外灯30cm处；（3）照耀：打开皿盖，边搅拌边照耀，时间为1min，2min，3min； 注：全部操作均在红灯照耀下进行；2.2.5稀释涂平板 在红灯下取未照耀和照耀的菌液各0.5ml，进行不同浓度的稀释，取最终3个浓度的菌液（稀释为5、15、20、倍的菌液），涂到淀粉平板上，三个重复，每板加液0.1ml，涂抹匀称，用黑纸包好37oC培育48h；2．3结果2.3.1酶活力的测定 取出平板，加入典液，观看抑菌圈的大小；诱变后抑菌圈变大，知酶活力增强，相反，假如诱变后抑菌圈变小，酶活力就下降；分析与争论： 1、接种操作时尽量防止外界细菌的掺入，使得最终培育终止的时候，培育基中最终获得了空气中掺入的杂菌，导致试验误差； 2、在试验过程中，为了便利我们辨识与计数，因此我们应尽量采纳稀释倍数较大的稀释液，稀释倍数过小，使得菌落过于集中，不易于我们辨论； 3、在试验过程中由于操作，环境等因素导致试验数据部分丢失，运算不准，造成部分试验误差，影响最终试验结果，因此我们在试验中应尽量防止这些误差； 4、紫外诱变后的菌株存在光复活现象，因此诱变及以后均应在红光下进行，而试验中由于环境问题而造成并不是完全黑暗和红光照耀，留意诱变时间和操作也会不同程度的会造成误差； 参考文献：[1]沈萍、陈向东主编、微生物试验学[M].第四版.高等训练出版社. [2]谷军主编、淀粉酶的生产与应用[J].生物技术.1994.4第三期：1-5.[3]袁勤生.应用酶学[M].上海:华东理工高校出版社,1994. 精品.[4]邬显章.酶的生产技术.吉林:吉林科技出版社,1988. 360～ 365. [5]吴根福、杨志坚.发酵工程试验指导.北京：高等训练出版社，2006.[6]郭杰炎,蔡武城编著.微生物酶.北京: 科学出版社, 1986. 75～ 77.如有侵权请联系告知删除，感谢你们的协作！精品。