酶学第七章多底物酶反应动力学.doc

第七章 多底物酶反应动力学多底物酶占所有酶的一半以上见下表：表 酶反应按底物数的分类反应底物数酶类型酶催化反应式占总酶数的%单底物反应异构酶AB5单向一底物反应裂合酶AB + C12假单底物反应水解酶A-B + H2OA-OH + BH26氧化还原酶AH2 + BA + BH227 双底物反应基团转移酶A + BXAX + B24X + Y + ATPX-Y + ADP + Pi 三底物或多底物反应连接酶X + Y + ATPX-Y + AMP + PPi67.1 双底物酶反应机制7.1.1 顺序机制 ordered mechanism此机制有三元复合物生成，大部分脱氢酶属于顺序机制7.1.2 Theorell Chance 机制此机制也属顺序机制，只是没有三元复合物生成如肝醇脱氢酶，A 为 NAD+，B 为乙醇，P 为乙醛，Q 为 NADH7.1.3 随机机制 random mechanism许多激酶的催化机制属于此类7.1.4 乒乓机制 ping pong mechanism转氨酶、转磷酸酶、转酰基酶属于此机制7.2 双底物顺序反应动力学7.2.1 反应模式7.2.2 速度方程推导按快速平衡法，如果 k4、k5 << k－1、k－2，则总反应的限速步骤为 EAB 的生成，故可将反应模式简写成：， ][]][[ EABBEAKmB][][][EABBKEAmB， ， ][]][[][EABBAKKEmBiA][]][[ EAAEKiA][][][EAAKEiA， ][EABkVp][][][][0EABEAEE][][][]][[0 EABEAEEEABkVp ][][][][]][[][EABEABBKEABBAKKEABVmBmBiAm 1][]][[BK BAKKVmBmBiAm分子分母同乘以[A][B]得]][[][]][[ BAAKKKBAVVmBmBiAm ，][]][[ EABBEAKmB][][][EABBKEAmB， ， ][]][[][EABBAKKEmBiA][]][[ EAAEKiA][][][EAAKEiA， ][EABkVp][][][][0EABEAEE][][][]][[0 EABEAEEEABkVp ][][][][]][[][EABEABBKEABBAKKEABVmBmBiAm 1][]][[BK BAKKVmBmBiAm分子分母同乘以[A][B]得]][[][]][[ BAAKKKBAVVmBmBiAm a．当[A]固定，[B]可变时，速度方程可写成：，此方程形式与米氏方程相同。

  ][][][BKAKKBVVmBmBiAm][][1][BAKKBVViA mBm   b．当[B]固定，[A]可变时，速度方程可写成：][][][ ][][ABAK BKKAVVmBmBiAm   ][1][][][BKABKKAVmBmBiAm][][1][][][1ABKBKKABKVmBmBiAmBm   ，此方程形式也与米氏方程相同 ][][][][1AKBKKABKVVmBmBiAmBm  7.2.3 讨论a．固定两种反应物中的任一种，都可以使速度方程写成米氏方程的形式；两种反应物浓度都变化时，则不为米氏方程的形式b．当[A]固定，[B]可变时，[A]影响表观米氏常数，不影响最大反应速度c．当[B]固定，[A]可变时，[B]既影响表观米氏常数，又影响最大反应速度7.2.4 作图法求动力学参数7.2.4.1 [A]固定，[B]可变时a．双倒数作图， miAmmB VBAK VK V1 ][1 ][11   此直线的横轴截距＝   ][11AKKiA mBb．斜率对再作图][1 A斜率＝mmBmiAmB VK AVKK][1此直线的横轴截距＝。

iAK1c．横轴截距绝对值的倒数对再作图][1 AmBiAmBiA mBKAKKAKK   ][1 ][1此直线的横轴截距＝iAK17.2.4.2 [B]固定，[A]可变时a．双倒数作图   ][11 ][1 ][1 BK VABVKK VmBmmmBiA在不同的[B]下以对作出不同的直线，V1 ][1 A这些直线交于第三象限的一点，交点坐标为    miAVK1,1，横轴截距＝iAmB KKB][1 b．纵轴截距对再作图][1 B纵轴截距＝   ][11 BK VmBmmmmB VBVK1 ][1此直线的横轴截距＝mBK1c．横轴截距的绝对值对[B]再作图｜横轴截距｜＝iAmB KKB][1iAmBiAKBKK1][1此直线的横轴截距＝mBK7.3 Theorell Chance 机制动力学7.3.1 反应模式7.3.2 速度方程推导用稳态法处理：1．， ][][][23EPBkkEA ][]][[32EPkBEAk2．， ]][[][]][[112AEkEAkBEAk][]][[)][( ][])[][(][21123112EPABkkkBkk AkEAkBkE…………①， …………②，][][][][0EPEAEE][3EPkV ①式除以②式得][][][][][30 EPkEPEAE VE][][][][][]][[)][(32321123EPkEPEPBkkEPABkkkBkk323211231][]][[)][(kBkk ABkkkBkkVE0][1][]][[)][(][232112303 Bkk ABkkkBkkEkV 1][]][[][23213113 Bkk ABkkkk AkkVm固定[A]，改变[B]时：][][][][][23213113Bkk AkkkkBAkkBVVm     ][1][][][13232131 AkkBkk AkkkkBVm，与米氏方程形式相同。

][][1][][][11323213113BAkkkk AkkkkBAkkVVm   固定[B]，改变[A]时也类似。