提纯结核菌素.docx

提纯结核菌素（牛型）皮内变态反应试验操作方法牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的人、畜、禽共患的慢性传染病，世界动物卫生组织 （OIE）将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病人与动物关系密切，人间结核 有10%是由牛结核传染而来的，此外该病目前仍然是危害养牛业的主要传染病之一，消灭 和预防该病的惟一办法是对牛群实施检疫净化，检疫出感染牛进行扑杀、无害化处理，最终 建立无结核病牛群1实验所需材料试剂1.1牛型提纯结核菌素（牛型结核分枝杆菌PPD）1.2游标卡尺（50分度精确度）1.3 1毫升蓝芯注射器1.4记录档案本（畜主姓名、耳标号、注射时间、皮厚、72h后皮厚）1.5剃须刀（剃毛用）、5ml或10ml注射器、牛鼻钳、0.9%生理盐水、防护用品（手套、工 作帽、防护服、胶鞋、口罩等）、洗涤精、回收废物箱、75%酒精棉球2结核菌素使用前注意事项2.1检査有无异常使用前仔细检查外包装，如发现瓶破、瓶口、胶塞破损、瓶签不清，有异物，过期失效 和未在规定温度（冷藏）下保存等异常情况，均禁止使用检查是否真空：如果结核菌素瓶是真空的，由于外界压力大，生理盐水会自动吸入瓶内， 为有效方可使用2.2配制使用注意事项2.2.1配制结核菌素要无菌操作，生理盐水瓶塞与结核菌素瓶塞要用75%酒精棉球消毒。

如 溶解后菌素浑浊，有絮状物、异物等情况，一律不得使用2.2.2结核菌素应2—8°C冷藏保存，一经稀释后应当天用完，不得留作再用2.2.3由于生产厂家不同，每瓶所含头份不同，一般是50头份/瓶、100头份/瓶两种规格， 使用前详细阅读说明书50头份/瓶的抽取5ml生理盐水进行稀释100头份/瓶的抽取10ml 生理盐水进行稀释使用前应仔细阅读说明书2.3废弃物注意事项使用后的注射器、针头、空结核菌素瓶以及用具应进行消毒等无害化处理3注射部位及术前处理在颈侧中部上1/3处剪毛（或提前一天剃毛），三个月以内的犊牛，也可在肩胛部进行， 直径约10cm，用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录如术部有破损或变化时，应另选 部位或在对侧进行首先用洗涤精水洗毛以达到润滑的目的，剃毛时与皮肤呈45°角，用老式手动剃须刀，刀片卡片不用安装以防塞毛，注射角度与皮肤呈20—304注射剂量及注射方法不论大小牛只，将牛型提纯结核菌素稀释成每毫升含2万国际单位后一律皮内注射 0.1ml 2000国际单位/头牛冻干菌素稀释后应当天用完注意冷藏保存先以75%酒精消毒术部，然后皮内注入定量（0.1ml）牛型提纯结核菌素，注射后局部 应形成6〜8mm圆形皮丘，如注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重作。

注射时 要保证每头牛更换针头5注射次数和观察反应皮内注射后经72小时判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量 皮皱厚度，作好记录对疑似反应牛应即在另一侧以同一批菌素同一剂量进行第二回皮内注射，再经72小时 后观察反应如有可能，对阴性和疑似反应牛，于注射后96和120小时再分别观察一次，以防个别 牛出现较晚的迟发型变态反应6结果判定6.1阳性反应局部有明显的炎性反应皮厚差等于或大于4mm （24 mm）以上者，其记录符号为 （+ ）对进出口牛的检疫，凡皮厚差大于2mm者，均判为阳性6.2疑似反应局部炎性反应不明显，皮厚差在2.0-3.9mm间（4 mm＞皮厚差22 mm），其记录符号 为（±）凡判为疑似反应的牛只，于第一次检疫60天后进行复检，其结果仍为可疑反应时，经 60天后再复检，如仍为疑似，应判为阳性6.3阴性反应无炎性反应皮厚差在2mm以下（V 2 mm ），其记录符号为（一）7游标卡尺的构造及读数方法7.1游标卡尺包括尺身、主尺、游标尺、深度尺、内测量爪、外测量爪和紧固螺钉七个部分7.2游标卡尺分类一般分为10分度、20分度和50分度三种，10分度的游标卡尺可精确到0.1mm , 20分 度的游标卡尺可精确到0.05mm ,而50分度的游标卡尺则可以精确到0.02mm。

7.3读数方法先看游标尺的零刻度线在主尺的多少毫米刻度线的右边，读出所测长度以毫米为单位作 为整数部分；再看游标尺上第几条刻度线与主尺上的刻度线对齐，将对齐的游标尺刻度线与 游标尺零线间的格数乘以卡尺的精确度，就是所测长度以毫米为单位的小数部分；以上两部 分相加就是卡尺的读数7.4注意事项7.4.1游标卡尺的正确手持方法右手正面握尺，用拇指推动游标，左手持物7.4.2测量前要检查零点7.4.3临床选用50分度的游标卡尺以提高精确度8其它注意事项注射结核菌素后牛体可能会出现一些异常反应，应予妥善处理有发热症状体温37.5r 以上情况暂不宜作试验；局部出现水泡、溃疡，应保持清洁，涂2%甲紫，必要时可用注射 器将水泡液抽除；注射后全身发热多与结核菌素热原反应和器具消毒不严有关，一般于数小 时内可恢复；少数牛注射后数小时肺部病灶周围毛细血管扩张，通透性增加，呼吸紧张，流 涎，侵润渗出，形成变态反应性病灶周围炎，一般不必特殊处理，2~5天可自行消退。