苯诱发小鼠再生障碍性贫血模型的建立及氨磷汀干预作用研究.pdf

温州医学院 硕士学位论文 苯诱发小鼠再生障碍性贫血模型的建立及氨磷汀干预作用研究 姓名：任行洲 申请学位级别：硕士 专业：血液内科 指导教师：俞康;王光汉 20040501 温卅『医学院硕：} 学位论文 苯诱发小鼠再生障碍性贫血模型的建立及 氨磷汀干预作用研究 摘要 目的：探讨建立苯诱发小鼠再生障碍性贫m ( 再障) 模型的方法，并通过氨 磷汀干预作用研究，观察在体内氨磷汀对苯诱发的血液学毒性的发生是否有预防 作用，以及从氧化损伤与抗氧化方面初步探讨苯诱发再障和氨磷汀_ _ 『二预作用的发 生机制 方法：研究分两部分完成，先探讨苯诱发小鼠再障模型的建立方法，模型建 立成功后，复制模型并探讨氨磷汀的干预作用 1 ) 于雄性C D l 小鼠每周三次皮 F 注射苯+ 玉米油混合液作为造模组，按给苯剂量不同分为四组；B 1 组 ( 0 ．5 m l ／k g ) 、B 2 组( 1 ．O m l ／k g ) 、B 3 组( 1 ．5 m l ／k g ) 、B 4 组( 2 ．O m l ／k g ) ，以单 纯注射玉米油组( A 组) 为对照组，各组均以玉米油补足4 m l ／k g ；各组分别于造 模组给苯前及给苯1 0 、1 5 、2 0 、2 5 次两天后，称重动物，眶动、静脉取血法取 血，用血液分析仪检测白细胞( W B C ) 、红细胞( R B C ) 、血红蛋白( H G B ) 、血小板( P L T ) 和网织红细胞百分率，然后计算出网织红细胞绝对值( R E T ) ；另取适量血做血涂 片，进行外周血白细胞分类计数；然后颈椎脱臼法处死小鼠，浸泡于7 5 ％酒精中 5 分钟后取出，无菌分离出一侧股骨，剪去骨骺端，用3 m l R P M l l 6 4 0 培养液完全 冲出殷骨骨髓细胞，按臼细胞计数方法计数l 根股骨中的骨髓有核细胞数，然后 采用半固体琼脂培养法测定粒细胞、单核细胞集落形成单位( C F U —G M ) 数；剥离 出另一侧股骨，取出骨髓做涂片检查骨髓象；取出一根胫骨、肝和脾( 称重后计 算出脾脏指数：m g 脾质量／g 体质量) ，做病理形态学观察。

2 ) 模型建立成功后， 将C D l 小鼠随机分为四组：A 组( 对照组，单纯皮下注射玉米油4 m l ／k g ，每周三 次) ，B 组( 氨磷汀对照组，腹腔注射氨磷汀2 0 0 m g ／k g ，每周三次) ，C 组( 再障 组，按本研究第一部分建立再障模型的方法复制动物模型) ，D 组( 氨磷汀干预 组，在复制小鼠再障模型基础上，每次给苯半小时前，腹腔注射氨磷汀 2 0 0 m g ／k g ) ；于再障组给苯前及给苯2 5 次两天后，按本研究第一部分的方法分别 处理各组小鼠并留取标本，观察一般情况、外周血细胞计数和白细胞分类计数、 网织红细胞绝列值计数、骨髓象、骨髓有核细胞计数、C F U —G M 计数，以及肝、 温卅l 医学院硕士学位论文 脾和骨髓的病理形态学观察另取部分肝脏，分别测定活性氧、丙二醛( M D A ) 、 过氧化氢( H 0 ：) 、总抗氧化能力( 卜A O C ) 、超氧化物歧化酶( S O D ) 、过氧化氢酶 ( C A T ) 、还原型谷胱甘肽( G S I _ I ) 和巯基( s H ) 的活性或水平 结果：( 1 ) 与对照组相比，各造模组小鼠均有部分指标改变，但仅有B 4 组小鼠在给苯2 5 次后全部指标与对照组相比有显著性差异，其体重和脾脏指数 分别比对照组下降1 8 ．5 1 ％、6 3 ．8 6 ％( p Tm u t a t i o na n dr a p i df r a c t i o n a l e x c r e t i o no fc h l o r z o x a z o n e ．C a n c e rR e s ．1 9 9 7J u l1 5 ：5 7 ( 1 4 ) ：2 8 3 9 —4 2 ． 1 9 ．S m i t hM T ．Z h a n gLB i o m a r k e r so fl e u k e m i ar i s k ：b e n z e n ea sam o d e l ．E n v i r o nH e a l t h P e r s p e e t ．1 9 9 8A u g ：1 0 6S u p p l4 ：9 3 7 —4 6 ． 2 0 ．R i e t j e n sI M ，d e nB e s t e nC ，H a n z l i kR P ，e ta lC y t o c h r o m eP 4 5 0 一c a t a l y z e do x i d a t i o n o fh a l o b e n z e n ed e r i v a t i v e s ．C h e mR e sT o x i c 0 1 ．1 9 9 7J u n ：1 0 ( 6 ) ：6 2 9 —3 5 ． 2 1 ．K o l a c h a n aP ，S u b r a h m a n y a mW ，M e y e rK B ，e ta 1 ．B e n z e n ea n di t sp h e n o l i c m e t a b o l i t e sp r o d u c eo x i d a t i r eD N Ad a m a g ei nH L 6 0c e l l si nv i P r oa n di nt h eb o n e m a ／r o wi nv i v o ．C a n c e rR e s ．1 9 9 3M a rl ：5 3 ( 5 ) ：1 0 2 3 —6 ． 2 2 ．夏昭林综述金锡鹏审校与苯血液毒性易感性相关的几种毒物代谢酶多态性研究 进展中华劳动卫生职业病杂志2 0 0 1 年2 月第1 9 卷第i 期7 6 —7 8 2 3 ．M o lP h a r m a c 0 1 ．I n d u c t i o no fa p o p t o s i sb yb e n z e n em e t a b o l i t e si nH L 6 0a n dC D 3 4 + h u m a nh o n em a r r o wp r o g e n i t o rc e l l s ，1 9 9 6S e p ；5 0 ( 3 ) ：6 1 0 —5 ． 2 4 ．M o l P h a r m a c 0 1 ．S u p p r e s s i o n o f a p o p t o s i sb y B e l 一2t oe n h a n c eb e n z e n e m e t a b o l i r e s —i n d u c e do x i d a t i v eD N Ad a m a g ea n dm u t a g e n e s i s ：Ap o s s i b l em e c h a n is m o fe a r c i n o g e n e s i s ．1 9 9 9M a y ：5 5 ( 5 ) ：8 9 4 —9 0 1 ． 2 5 ．T h ee f f e c t so fb e n z e n ea n dh y d r o q u i n o n eo nm y e l o i dd i f f e r e n t i a t i o no fH L ～6 口 p r o m y e l o c y t i cl e u k e m i ac e l l s ．L e u kL y m p h o m a ．1 9 9 3N o v ：1 1 ( 5 - 6 ) ：3 3 1 —8 ． 2 6 ． Z h a n gL ， R o b e r t s o n M L ， K o l a c h a n a P ， e ta 1 ．B e n z e n e m e t a b o l i t e ， i ，2 ，4 - b e n z e n e p r i o l ，i n d u c e s m i c r o n u c l e ia n do x i d a t i v eD N A d a m a g e i nh u m a n l y m p h o c y t e sa n d } I L 6 0e e l i s ．E n v i r o nM o lM u t a g e n ．1 9 9 3 ：2 1 ( 4 ) ：3 3 9 —4 8 ． 2 7S h e nY ，S h e n 删，8 h iC Y ，e ta 1 ．B e n z e n em e t a b o l i t e se n h a n c er e a c t i v eo x y g e n s p e c i e sg e n e r a t i o n i nH L 6 0h u m a n1 e u k e m i ac e l l s ．B u m E x p T o x i c 0 1 ．1 9 9 6 M a y ：1 5 ( 5 ) ：4 2 2 —7 ． 2 8 ．W i n nL M ．H o m o l o g o u sr e c o m b i n a t i o ni n i t i a t e db yb e n z e n em e t a b o l i t e s ：ap o t e n t i a l r o l eo fo x i d a t i v es t r e s s ．T o x i c o lS c i ，2 0 0 3M a r ：7 2 ( 1 ) ：1 4 3 —9 ． 2 9 V e s t e r g a a r dS ，L o f tS ，M o i 】e rP ．R o l eo fi n d u c i b l en i S r o g e ne x i d es y n t h a s ei n b e n z e n e —i n d u c e do x i d a t i v eD N Ad a m a g ei nt h eb o n em a r r o wo fm i c e F r e eR a d i cB i o l M e d2 0 0 2M a rl ：3 2 ( 5 ) ：4 8 1 —4 ． 3 0 ．S o r e n s e nM ．S k o vH ，A u t r u pH ，e ta 1 ．U r b a nb e n z e n ee x p o s u r ea n do x i d a t i v eD N A d a m a g e ：i n f l u e n c eo fg e n e t i cp o l y m o r p h i s m si nm e t a b o l i s mg e n e s ．S e iT o t a lE n v i r o n 温燃医学院硕士学位论文 2 0 0 3J u n2 0 ：3 0 9 ( 卜3 ) ：6 9 —8 0 ． 3 1 ．李桂兰，尹午山，尹松年．苯DNA 加合物的组织分布及其与细胞遗传毒性的关系卫生研 究，1 9 9 5 ，2 4 ：2 6 0 —2 6 2 ． + ． 3 2 ．F e r n iA ．B e n z e n ei n d u c e dc h r o m o s o m ea b e r r a t i o n s ：af o l l o w - u ps t u d y ．E n v i r o n H e a l t hP e r s p e e t ．1 9 9 6D e c ：1 0 4S u p p l6 ：1 3 0 9 —1 2 ． 3 3 ， J EE r e n c h ， MS 。