对实验“观察植物细胞的有丝分裂” 临时装片制作的改进意见.doc

对实验“观察植物细胞的有丝分裂”临时装片制作的改进意见张水成，赵艳玲(驻马店师专化学系，河南驻马店 463000)天中学刊，2002，17(2)摘要：对实验“观察植物细胞的有丝分裂”临时装片的制作，在材料的选取、洋葱根尖的培养、根尖的取材、根尖的固定与解离等方面提出了几点改进意见关键词：有丝分裂;根尖;洋葱;装片“观察植物细胞的有丝分裂”实验是学习遗传学、植物学及普通生物学时所做的经典实验之一该实验要求观察细胞周期各个时期的主要特征，尤其是染色体的行为变化，要达到此目的，前期的临时装片制作是非常关键的由于种种原因，实验中所制作的装片往往达不到预期的效果笔者根据多年的实践经验和摸索，发现在制作临时装片时应对传统的一些步骤加以改进后，方能达到较为理想的效果现总结于后1 材料的选取洋葱是较为典型的用于观察植物细胞有丝分裂的材料，效果也较为理想但由于受季节及学生人数等条件的限制，培养的洋葱根尖往往不能满足学生实验的需要，影响了实验的正常进行针对上述情况，笔者近年来试着用大蒜、小麦、蚕豆、蒜苗、车前草等代替洋葱作为实验材料，发现蚕豆、小麦、大蒜等均达到较为理想的效果这些不同的材料来源方便，培养期短，易生根，根尖数目多，且可在不同的季节选用不同的材料。

因此，可以用这些材料代替洋葱完成实验，达到实验目的2 洋葱根尖的培养洋葱的生根与周围环境的温度关系密切在室温 20～25℃范围内洋葱鳞茎易生根，且数目多、生长速度快;在较低或较高温度条件下，则生根少、生长较慢且易老化，尤其是经冷藏或辐射处理而处于休眠期的洋葱鳞茎更不易生根(在市场上买到的洋葱则多是经过冷藏或辐射处理过的) 对于这样的材料，培养前先用刀片切去处于休眠状态的陈根，让它们在 20～25℃温度下放几周时间，待根部周围长出许多白色突起后再培养，就可以提高生根率在室温 20～25℃条件下，于实验前 5～7d 选取底部鳞茎盘面积较大的洋葱，用刀片切去底部陈根或切去一薄层，放在盛满水的烧杯或广口瓶上，使其底部接触水面，置于温暖向阳处，注意每天换水，以免因氧气不足等而造成根尖生长缓慢或腐烂3 根尖的取材时机实践证明，用作观察细胞分裂的植物根尖的取材时间非常重要各种不同植物的根尖细胞在一天 24小时内进行分裂的时刻不同，分裂的高峰期也不尽相同所以根尖的取材时间应根据不同植物种类培养的温度条件选取最佳的时机洋葱的根尖细胞在常温 20℃左右时，10 时至 16 时根尖细胞分裂较旺盛，尤以 11 时左右为最佳，在其他时间剪取根尖，则不易观察到不同分裂期的细胞。

因此，当根长到2～3cm 时在 11 时左右可以取材，取材长度以 5mm 左右为宜4 根尖的固定与解离固定的目的是迅速杀死细胞并能使细胞核及细胞器在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态解离的目的是使细胞的胞间层物质溶解，在压片时细胞易于分散传统的做法是固定与离析同时进行，即把取的材料放在由等量的浓盐酸和 95%的酒精所配制的固定离析液中进行固定与解离实践证明这样做不如把固定与解离分开进行效果好即把取下的材料先放在固定液中，固定时间为 3～5h固定剂可选用常用的 FFA 固定剂即福尔马林—醋酸—酒精固定剂，固定好的材料可放在 70%的酒精溶液中保存根尖的解离要掌握正确的解离时间若解离时间太短，细胞不易完全分散开，解离时间太长根尖完全酥软，无法进行观察解离液以 15%的盐酸溶液为好( 用 15%的盐酸代替 10%的盐酸可缩短解离时间) 把固定好的根尖取出用清水冲洗干净后放入盛有 15%盐酸离析液的培养皿中，解离时间 5min 左右，只要根尖色泽变白略带透明即可，此时根尖压片效果较好5 根尖的染色与压片染色是制作根尖临时装片的另一个关键步骤，其目的是使细胞的细胞质和细胞核及核中的染色体分别染上深浅不一的颜色，以便清晰地观察细胞分裂各个时期的特征。

洋葱根尖的染色剂常用的是龙胆紫和醋酸洋红醋酸洋红因价格较贵，配制复杂且染色效果又不如龙胆紫好，故目前多用龙胆紫作染色剂而仅用 1%的龙胆紫溶液对根尖进行染色，细胞核内都被染成深紫色，染色体不突出，在显微镜下难以清晰地观察到有丝分裂各个时期核内染色体行为的变化根据笔者多次比较体会，发现在 1%龙胆紫溶液中滴加少量 10%醋酸至溶液呈鲜亮的紫色，这样配制的染色剂，醋酸起到一定的分色作用，可加强细胞核和染色体的选择性着色，以避免核内都染成一片深紫色，从而达到良好的观察效果且用这种方法配制的染色剂可长久保存，溶液不易产生沉淀用清水洗净解离根尖，用镊子将洋葱根尖放在载玻片上为了使其染色均匀，可用镊子将圆柱状的根尖轻轻压扁，加 2 滴染色液进行染色，染色时间 3～5min 染色时若用酒精加热，效果更好但注意加热时不可使染色液蒸发，只需使载玻片在酒精灯火焰上来回移动几次即可染色完毕，盖上盖玻片，再盖以 2 层吸水纸，用拇指轻压一下(也可用铅笔的橡皮头在盖玻片上轻轻敲几下) ，即可使根尖细胞均匀地扩散成云雾状，四周多余的水分可用吸水纸吸掉，这样就可在显微镜下进行观察了至此，一个较为理想的用于观察植物细胞有丝分裂的临时装片即告制成。

参考文献：[1]张祥沛等.生物学实验研究[M]. 青岛: 青岛海洋大学出版社,1997.236～246.[2]河北师范大学等.遗传学实验[M]. 北京: 高等教育出版社,1995.2～9.[3]周仪等.植物形态解剖实验[M]. 北京: 北京师范大学出版社,1989.12～19.。