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VEGF和MMP—2在卵巢乳头状癌组织中表达特征及临床意义5100字 　[摘 要] 目的：探讨卵巢乳头状癌组织中VEGF和MMP-2的表达特征，与卵巢乳头状癌发生侵袭、转移的相关性方法：利用实时定量聚合酶链反应（QT-PCR ）、免疫组织化学染色法、Western blot法检测VEGF/MMP-2基因及蛋白在正常卵巢组织、卵巢乳头状癌组织中的表达情况结果：与正常卵巢组织相比，在卵巢乳头状癌组织中，VEGF/MMP-2基因和蛋白的表达量均明显升高，差异具有统计学意义（P 50% ，呈现棕黄色（+++）以（ ++ ）（ +++ ）者为免疫组化阳性表达　　1.2.4 提取总蛋白，Western blot法检测VEGF/MMP-2蛋白的表达 从上述收集的病例中正常卵巢组织、卵巢乳头状癌组织石蜡标本I-II期、III-IV期中各选取5例，用组织蛋白提取试剂对每一份病例的石蜡组织分别进行总蛋白的提取，测定蛋白浓度Western blot具体步骤：配置分离胶和浓缩胶，蛋白上样，SDS-PAGE 80V电泳3h后转移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜，5%脱脂奶37℃封闭1h，一抗（1：500）4℃过夜，二抗（1：1000）37℃孵育1h，ECL法显色，同时检测actin（1：500）的表达作为内参。

　1.2.5 统计学处理 使用SPSS11.0软件系统，计数资料进行χ2检验或Fisher’s确切概率法检验，相关比较采用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义　　2 结果　　2.1 VEGF/MMP-2基因水平的表达情况　　如表1所示，正常卵巢组织中VEGF/MMP-2基因表达分别为0.18±0.11和0.41±0.35卵巢乳头癌组织VEGF/MMP-2基因表达分别为0.69±0.24和1.21±0.65在卵巢乳头癌组织中VEGF/MMP-2基因表达明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）并且随着卵巢乳头癌组织分期升高，VEGF/MMP-2基因表达也增加，差异具有统计学意义（P<0.05）　　2.2 VEGF/MMP-2蛋白的表达情况　　正常卵巢组织中VEGF/MMP-2蛋白表达阳性率分别是6.1%和4.1%，而在卵巢乳头状癌中VEGF/MMP-2蛋白表达阳性率分别是91.3%和86.3%　　与正常卵巢组织相比，卵巢乳头状癌中VEGF/ MMP-2蛋白表达量显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。

在III-IV中VEGF/ MMP-2蛋白高于I-II级的表达（P<0.05）（见表2）　　P<0.05　　2.3 Western blot法检测VEGF/MMP-2蛋白的表达　　情况　　对比图1正常卵巢组织、卵巢乳头状癌组织石蜡标本I-II期、III-IV期，可见VEGF/ MMP-2蛋白表达逐级升高，差异具有统计学意义（P<0.05）　　3 讨论　　卵巢癌在女性生殖系统癌瘤中排名第三[8]，仅次于子宫颈癌和子宫体癌近年，宫颈癌及宫体癌早期筛查技术的大力发展，对宫颈癌及宫体癌的防治已取得显著成效，总生存率明显升高而卵巢癌的早期诊断非常困难[9-10]，发现时已有卵巢癌的浸润、盆腹腔的转移，因此成为死亡率最高的肿瘤而肿瘤发生转移和侵袭的两个重要环节就是新生血管形成与细胞外基质金属降解　　VEGF作为血管内皮特异性的有丝分裂原，对血管内皮细胞的增殖、血管渗透性增加等方面具有很强的调控作用[11-13]因此VEGF在肿瘤细胞与血管内皮细胞都有阳性表达，只是在恶性细胞中，VEGF过度表达从我们的研究发现，VEGF无论是基因水平还是蛋白水平表达量在正常卵巢组织、卵巢乳头状癌组织表达差异均非常明显，尤其是在卵巢癌III-IV期表达量最高，这说明VEGF在卵巢乳头状癌转移过程中发挥重要的作用。

　　MMP-2作为细胞外蛋白水解酶，主要功能是降解细胞外基质的多种成分细胞外基质是阻碍癌组织学屏障，而癌细胞可以通过自身分泌或旁分泌等方式合成大量的MMP-2，破坏基底膜的完整性，发生侵袭和转　　移[14-15]我们的实验中可以观察到MMP-2基因和蛋白的表达在正常卵巢组织、卵巢乳头状癌组织石蜡标本I-II期、III-IV期也逐渐升高，而MMP-2在III-IV期高表达，有利于卵巢癌细胞的浸润和侵袭　　总之，VEGF通过增加血管通透性和促进血管形　　成[16]，MMP-2通过裂解细胞外基质，加速了卵巢癌的恶性转移[17]因此研究VEGF/ MMP-2两者的相关性为深入了解调控肿瘤微血管生成的分子机制及其与肿瘤侵袭和转移关系奠定基础而VEGF/ MMP-2在III-IV期的高表达，成为设计和研制治疗卵巢癌药物的新思路　　参 考 文 献　　[1] Hua X， Yu L， You R， et al. Association among Dietary Flavonoids， Flavonoid Subclasses and Ovarian Cancer Risk： A Meta-Analysis [J]. PloS One， 2016， 11（3）：e0151134.　　[2] Kihara K， Yamamoto S， Ohshiro T， et al. Laparoscopic ovarian transposition prior to pelvic irradiation in a young female patient with advanced rectalcancer[J].Surg Case Rep， 2015， 1（1）：113.　　[3] Yaqi K， Yotsumoto F， Miyamoto S. Heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor promotes transcoelomic metastasis in ovarian cancerthrough epithelial-mesenchymal transition[J].Mol Cancer Ther， 2008，7（10）：3441-3451.　　[4] He Z， Chen AY， Roianasakul Y， et al. Gallic acid， a phenolic compound， exerts anti-angiogenic effects via the PTEN/AKT/HIF-1α/VEGF signaling pathway in ovarian cancer cells [J]. Oncol Rep， 2016， 35（1）：291-297.　　[5] Ranjbar R， Nejatollahi F， Nedaei Ahmadi AS， et al. Expression of Vascular Endothelial Growth Factor （VEGF） and Epidermal Growth Factor Receptor （EGFR） in Patients With Serous Ovarian Carcinoma and Their Clinical Significance[J].Iran Cancer Prev， 2015， 8（4）：e3428. 。