水质粪大肠菌群的测定多管发酵法征求意见稿.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 环 境 保 护 标 准HJ □ □ □ -201□部 分 代 替 HJ/T347-2007水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法Water quality-Determination of fecal coliform-Manifold zymotechnics（ 征 求 意 见 稿 ）201□ -□ □ -□ □ 发 布 201□ -□ □ -□ □ 实 施发 布环 境 保 护 部附 件 2i目 次前 言 ..............................................................................................................................................i1 适 用 范 围 .......................................................................................................................................12 术 语 和 定 义 ...................................................................................................................................13 方 法 原 理 .......................................................................................................................................14 干 扰 和 消 除 ...................................................................................................................................15 试 剂 和 材 料 ...................................................................................................................................16 仪 器 和 设 备 ...................................................................................................................................27 样 品 ...............................................................................................................................................38 分 析 步 骤 .......................................................................................................................................39 结 果 计 算 与 表 示 ...........................................................................................................................410 精 密 度 和 准 确 度 .........................................................................................................................511 质 量 保 证 和 质 量 控 制 .................................................................................................................512 废 物 处 理 .....................................................................................................................................6附 录 A （ 资 料 性 附 录 ） 最 大 可 能 数 （ MPN） 表 ........................................................................7i前 言为 贯 彻 《 中 华 人 民 共 和 国 环 境 保 护 法 》 和 《 中 华 人 民 共 和 国 水 污 染 防 治 法 》 ， 保 护 环 境 ，保 障 人 体 健 康 ， 规 范 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 方 法 ， 制 定 本 标 准 。

本 标 准 规 定 了 测 定 地 表 水 、 地 下 水 和 废 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 多 管 发 酵 法 本 标 准 的 附 录 A 为 资 料 性 附 录 本 标 准 是 对 《 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法 和 滤 膜 法 （ 试 行 ） 》 （ HJ/T347-2007）多 管 发 酵 法 部 分 的 修 订 ， 与 原 标 准 相 比 主 要 修 改 内 容 如 下 ：在 干 扰 与 消 除 、 水 样 、 分 析 步 骤 、 结 果 计 算 与 表 示 、 精 密 度 和 准 确 度 、 质 量 控 制 和 质 量保 证 等 方 面 做 了 具 体 的 要 求 本 标 准 首 次 发 布 于 2007 年 ， 原 标 准 起 草 单 位 为 中 国 环 境 监 测 总 站 等 单 位 本 次 为 第 一 次修 订 自 本 标 准 实 施 之 日 起 ， 《 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法 和 滤 膜 法 （ 试 行 ） 》 （ HJ/T347-2007） 废 止 本 标 准 由 环 境 保 护 部 环 境 监 测 司 、 科 技 标 准 司 组 织 制 修 订 。

本 标 准 主 要 起 草 单 位 ： 辽 宁 省 环 境 监 测 实 验 中 心 本 标 准 的 验 证 单 位 ： 大 连 市 环 境 监 测 中 心 、 丹 东 市 环 境 监 测 中 心 站 、 锦 州 市 环 境 监 测 中心 站 、 辽 阳 市 环 境 监 测 站 、 沈 阳 市 疾 病 预 防 控 制 中 心 、 辽 宁 北 方 环 境 检 测 技 术 有 限 公 司 本 标 准 环 境 保 护 部 20□ □ 年 □ □ 月 □ □ 日 批 准 本 标 准 自 20□ □ 年 □ □ 月 □ □ 日 起 实 施 本 标 准 由 环 境 保 护 部 解 释 1水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法1 适 用 范 围本 标 准 规 定 了 测 定 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 多 管 发 酵 法 本 标 准 适 用 于 地 表 水 、 地 下 水 和 废 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 本 方 法 的 检 出 限 ： 12 管 法 为 3MPN/L， 适 用 于 清 洁 的 水 样 ； 15 管 法 为 20MPN/L， 适 用于 受 到 不 同 程 度 污 染 的 水 样 。

2 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 2.1 粪 大 肠 菌 群 fecal coliforms又 称 耐 热 大 肠 菌 群 44.5℃ 培 养 24h， 能 发 酵 乳 糖 产 酸 产 气 的 需 氧 及 兼 性 厌 氧 的 革 兰 氏 阴性 无 芽 孢 杆 菌 ， 是 总 大 肠 菌 群 的 一 部 分 2.2 最 大 可 能 数 most probable number,MPN微 生 物 检 验 常 用 发 酵 法 ， 又 称 稀 释 法 ， 是 一 种 利 用 统 计 学 原 理 定 量 检 测 微 生 物 浓 度 的 方法 它 根 据 不 同 稀 释 度 一 定 体 积 水 样 中 被 检 微 生 物 存 在 与 否 的 频 率 ， 查 表 求 得 水 样 中 微 生 物的 浓 度 ， 与 直 接 报 告 菌 落 数 的 平 板 计 数 法 不 同 ， 它 最 终 报 告 的 是 水 样 中 最 有 可 能 存 在 的 目 标微 生 物 浓 度 ， 这 个 以 最 大 可 能 存 在 的 浓 度 ， 就 被 称 为 最 大 可 能 数 （ mostprobablenumber， 缩写 为 MPN） 。

3 方 法 原 理将 一 定 量 的 水 样 ， 以 无 菌 操 作 方 式 接 种 到 含 有 乳 糖 培 养 基 的 试 管 中 ， 在 特 定 的 温 度（ 44.5 ℃ ） 培 养 24h， 当 细 菌 生 长 繁 殖 时 ， 产 酸 使 培 养 液 pH 值 降 低 ， 溴 甲 酚 紫 由 紫 色 变 为 黄色 ， 指 示 产 酸 ； 脱 氢 酶 分 解 底 物 产 生 气 体 ， 利 用 倒 管 指 示 产 气 通 过 指 示 剂 的 颜 色 变 化 和 倒管 中 有 无 气 体 判 断 是 否 产 酸 产 气 ， 从 而 确 定 是 否 存 在 粪 大 肠 菌 群 ， 并 通 过 查 MPN 表 ， 以 MPN表 示 粪 大 肠 菌 群 浓 度 值 4 干 扰 和 消 除氯 具 有 氧 化 性 ， 较 高 浓 度 的 重 金 属 离 子 具 有 毒 性 ， 它 们 都 能 破 坏 微 生 物 细 胞 内 酶 的 活 性 ，最 终 导 致 细 胞 死 亡 可 分 别 加 入 硫 代 硫 酸 钠 和 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 排 除 氯 或 重 金 属 的 干 扰 。

5 试 剂 和 材 料除 非 另 有 说 明 ， 分 析 时 均 使 用 符 合 国 家 标 准 的 分 析 纯 化 学 试 剂 25.1 乳 糖 蛋 白 胨 培 养 液成 分 ：蛋 白 胨 10g牛 肉 浸 膏 3g乳 糖 5g氯 化 钠 5g1.6%溴 甲 酚 紫 乙 醇 溶 液 1ml制 法 ： 将 蛋 白 胨 、 牛 肉 浸 膏 、 乳 糖 、 氯 化 钠 加 热 溶 解 于 1000ml 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 中 ， 调节 pH 值 到 7.2～ 7.4， 再 加 入 1.6%溴 甲 酚 紫 乙 醇 溶 液 1ml， 充 分 混 匀 ， 分 装 于 含 有 倒 置 小 玻 璃管 的 试 管 中 ， 115℃ 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min， 储 存 于 冷 暗 处 备 用 乳 糖 蛋 白 胨 培 养 液 可 选 用 市 售 成 品 培 养 基 5.2 三 倍 乳 糖 蛋 白 胨 培 养 液 ： 按 上 述 配 方 比 例 三 倍 （ 除 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 外 ） ， 配 成 三 倍 乳糖 蛋 白 胨 培 养 液 ， 制 法 同 上 5.3 EC 培 养 液 成 分 ：。