纳氏试剂光度法测定氨氮.docx

氨氮含量纳氏试剂分光度法的测定方法学验证文件编号： 第1页共7页水质氨氮的测定纳氏试剂分光光度法方法学验证报告验证起始日期：2018年 月 日 结束日期：2018年 月 日一、 实验目的1、 掌握比色法测定水中氨氮含量的测定方法及原理2、 熟悉纳氏试剂分光度法测定氨氮的方法学验证二、 依据标准文献HJ 535-2009水质氨氮的测定纳氏试剂分光光度法化学分析方法确认和验证指南GB/T 27417-2017三、 适用范围适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中氨氮的测定四、 方法原理以游离态的氨或铵离子等形式存在的氨氮与纳氏试剂反应生成淡红棕色络合物，该络合物 的吸光度与氨氮含量成正比，于波长420 nm处测量吸光度氨氮与纳氏试剂反应生成棕色胶态化合物，2K2 我14 L 3KOH + NH3 =我2O - NH2 \ + 2H2O + 7KI五、 仪器设备紫外可见分光光度计 型号：T6新世纪 出厂编号：26-1650-01-1108厂家：北京普析六、 试剂材料1. 20mm比色皿，50毫升比色管，实验室用超纯水机2. 纳氏试剂（碘化汞-碘化钾-氢氧化钠（HgI2-KI-NaOH）溶液）：称取16.0g氢氧化钠（NaOH），溶于50ml水中，冷却至室温。

称取7.0g碘化钾（KI）和 10.0g碘化汞（HgI2），溶于水中，然后将此溶液在搅拌下，缓慢加入到上述50ml氢氧化钠溶液 中，用水稀释至100ml贮于聚乙烯瓶内，用橡皮塞或聚乙烯盖子盖紧，于暗处存放，有效期1 年3. 酒石酸钾钠溶液：称取50.0g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6・4H2O）溶于100mL水中，加热煮沸 以驱除氨，充分冷却后稀释至100ml4. 氨氮标准贮备溶液（1000M g/ml）:称取3.8190g氯化铵（NH4Cl，优级纯，在100~105°C干 燥2h），溶于无氨水中，移入1000ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀可在2~5C保存1个 月5. 氨氮标准工作溶液（10p g/mL）:吸10.00ml氨氮标准贮备溶液于1000ml容量瓶内，用无 氨水稀释至刻度，摇匀临用前配制以下为水样需预处理时所需试剂6. 硫代硫酸钠溶液（3.5g/L）:称取3.5g硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶于水中，稀释至1000ml7. 硫酸锌溶液（100g/L）:称取10.0g硫酸锌（ZnSO4・7H2O）溶于水中，稀释至100ml8. 氢氧化钠溶液（250g/L）:称取25g氢氧化钠溶于水中，稀释至100ml。

9. 氢氧化钠溶液（1mol/L）:称取4g氢氧化钠溶于水中，稀释至100ml10. 盐酸溶液（1mol/L）：量取8.5ml盐酸于适量水中用水稀释至100ml11. 硼酸（H3BO3）溶液（20g/L）:称取20g硼酸溶于水，稀释至1 L12. 漠百里酚蓝指示剂（0.5g/L）:称取0.05g漠百里酚蓝溶于50ml水中，加入10ml无水乙醇， 用水稀释至100ml13. 淀粉-碘化钾试纸：棕色瓶中密封保存，外购七、实验步骤1. 校准曲线的绘制在 8 个 50mL 比色管中，分别加入 0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 和 10.00mL 氨 氮标准工作溶液，其所对应的氨氮含量分别为0.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0和100|!g， 加水至标线加入1.0ml酒石酸钾钠溶液，摇匀，再加入纳氏试剂1.0ml，摇匀放置10min后， 在波长420nm下，用20mm比色皿，以水作参比，测量吸光度以空白校正后的吸光度为纵坐标，以其对应的氨氮含量（咫）为横坐标，绘制校准曲线2. 样品预处理样品采集与保存f去除余氯f絮凝沉淀…调节PH值至约6.5，预蒸馏一馏出液达200 mL 时，停止蒸馏，加水定容至250 mL。

3. 样品测定取经预处理后的适量水样50 mL （使氨氮含量不超过2mg/L），加入50mL比色管中，稀释 至刻度按与校准曲线相同的步骤测量吸光度空白试验：用水代替水样，按与样品相同的步骤进行前处理和测定4. 数据处理由水样测得的吸光度，从标准曲线上查得氨氮含量（咫）氨氮（N, mg/L）号式中：m 由标准曲线查得的氨氮量（咫）；V 水样体积（mL）5注意事项1. 纳氏试剂中碘化汞与碘化钾的比例，对显色反应的灵敏度有较大影响静置后生成的沉淀应 除去2. 纳氏试剂显色后的溶液颜色会随时间变化，应在较短时间内完成比色操作氨氮含量纳氏试剂分光度法的测定方法学验证文件编号： 第3页共7页八、方法学实验1.标准溶液配制记录表配制日期标准物质 名称生产厂家 及批号纯度（%）称取量/取样体积（）溶剂定容 体积（）配制浓度（）有效期2018.7.31氯化铵NH4C1批号： 20160423 西陇科学99.8%优级纯3.8190 克纯水1000毫升1000|J g/mL1个月配制 日期试剂名称试剂浓度（）储备液 来源储备液 浓度储备液取用量定容体积有效期2018.7.31氨氮标准工作溶液10p g/ml2018.7.31配制1000|J g/mL5.0mL500mL1天2018.8.65.0mL500mL1天2018.8.105.0mL500mL1天2, 标准曲线试验结果：检测日期：2018年7月31日氨氮标准曲线（纯水空白）序号浓度系列（口 g）测得吸光度A减空白吸光度A结果10.00.1650.165线性方程：A-0.0054C+0.1879相关系数R2 =0.99125.00.2270.227310.00.2350.235420.00.2890.289540.00.4360.436660.00.5310.531780.00.6010.60181000.7200.720y 二 0. Ll054x + 0. 1879 氨氮-标准曲线氨氮标准曲线（纯水空白）序号浓度系列（.g）吸光度A减空白吸光度A结果10.00.050.05线性方程：A-0.0079C+0.0545相关系数R2 =0.998225.00.0930.093310.00.1250.125420.00.2130.213540.00.3770.377660.00.5530.553780.00.6960.69681000.8270.827序号- 序号n浓度系列（.g）吸光度A减空白吸光度A结果 irn10 00 0510 051线性方程：A-0.008C+0.059925.00.0990.099310.00.1350.135420.00.2090.209相关系数R2 =0.9971540.00.4080.408660.00.5450.545780.00.7130.71381000.8350.835结论：综合3次测量数据，线性方程相关系数均＞0.99,表明标准曲线方程良好。

3. 检出限连续测量8次空白溶液的3倍标准偏差法得出检出限氨氮标准曲线（水加试剂空白）序号浓度系列（mg/L）测得吸光度A浓度结果10.00.001-0.0263线性方程：A=0.4035C+0.0116相关系数R2 =0.996920.00.002-0.023830.00.001-0.026340.00.003-0.021350.00.001-0.026360.00.001-0.026370.00.002-0.023880.00.001-0.0263浓度平均值-0.0250浓度标准偏差S0.001891 3 倍=0.00567检出限mg/L0.00567结论：依据标准HJ 535-2009水质氨氮的测定纳氏试剂分光光度法要求，使用20mm （2 ^）比色皿，50毫升水样体积，检出限为0.025mg/mL，检出限符合要求4.准确度检查（回收率测定）检测时间2018年_8月口匚日时样品氨氮测得量0.20mg/L标准贮备溶液名称及浓度氯化铵 NH4Cl 1000p g/mL(1mg/mL)标准溶液加入量贮备溶液 10.0mL一250mL一5mL，0.2mg回收率测定样品液总体积500mL回收率测定 样品液加入标准溶液含量0.4mg/L测得氨氮总量0.58mg/L回收率=（测得氨氮总量一样品氨氮测得量）小加入标准溶液含量妇00%= （0.58mg/L-0.20mg/L） -0.4mg/Lx100% =95%结论：回收率95%，准确度符合要求。

5精密度检查标准溶液名称：氯化铉NH4C1 浓度:10p g/mL检测日期：2018年7月31日九、评价与验证结论1 .评价1.1空白值检出限评价本方法的氨氮检出限为0.06 mg/L；符合方法要求1.2精密度与准确度评价本实验的相对标准偏差RSD=0.38%,方法精密度良好加标回收率评价本实验所测氨氮加标回收率95%,在方法回收率偏差范围内，符合规范要求2 .结论通过对上述各项指标的验证，表明该项目可在本实验室开展。