人125二羟基维生素D3(125.docx

人1,25二轻基维生素D3 (1,25-(OH)2D3)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围： 96T6 ng/L -180ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 1,25二羟基维生素 D3(1,25-(OH)2D3)含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人1,25二瓮基维生素D3 (1,25-(OH)2D3)水平 用纯化的人1,25二瓮基维生素D3 (1,25-(OH)2D3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包 被单抗的微孔中依次加入1,25二瓮基维生素D3 (1,25-(OH)2D3)，再与HRP标记的1,25二 瓮基维生素D3 (1,25-(OH)2D3 )抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗 涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终 的黄色颜色的深浅和样品中的1,25二瓮基维生素D3 (1,25-(OH)2D3)呈正相关用酶标 仪在450nm波长下测定吸光度(0D值)，通过标准曲线计算样品中人 1,25二瓮基维生素 D3 (1,25-(OH)2D3)浓度试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlx 1 瓶7终止液6mlx 1 瓶2酶标试剂6mlx 1 瓶8标准品(320 ng/L)0.5mlx1 瓶3酶标包被板12孔x8条9标准品稀释液1.5mlx1 瓶4样品稀释液6mlx 1 瓶10说明书1份5显色剂A液6mlx 1 瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlx1/ 瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-209保存，但应避免反复冻融2. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释160 ng/L5号标准品150卩1的原倍标准品加入150卩1标准品稀释液80 ng/L4号标准品150卩l的5号标准品加入150卩l标准品稀释液40 ng/L3号标准品150卩l的4号标准品加入150卩l标准品稀释液20 ng/L2号标准品150卩l的3号标准品加入150卩l标准品稀释液10 ng/L1号标准品150卩l的2号标准品加入150卩l标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加样50卩1，待测样品孔中先加样品稀释液40卩1, 然后再加待测样品10M （样品最终稀释度为5倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀3. 温育：用封板膜封板后置379温育30分钟4. 配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复 5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50卩1，空白孔除外7. 温育：操作同 38. 洗涤：操作同 59. 显色：每孔先加入显色剂A50M，再加入显色剂B50M，轻轻震荡混匀，379避光显色 15分钟.10. 终止：每孔加终止液50^1，终止反应（此时蓝色立转黄色）11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）测定应在加终止液后 15分钟以内进行操作程序总结：洗板5次，加入显色液A、B> 37C显色10分钟加入准备好的样品和标准品，37C反应30分钟洗板5次，加入酶标试剂，37C反应30分钟准备试剂，样品和标准品15分钟之内读0D值加入终止液计算计算以标准物的浓度为横坐标，0D值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 0D值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与0D值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的0D值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好 控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样4•请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高（样本0D值 大于标准品孔第一孔的0D值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（xn x5）o5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染 6．底物请避光保存7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理9．本试剂不同批号组分不得混用 10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准 保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8°C2．有效期： 6个月。